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World File Search System外植体
遗传转化，转基因花生的再生和分析
ACIAR Projects 8419（1985-1988）和8834（1989-1991）在印度尼西亚花生生产的主要限制中确定了花生条纹病毒（PSTV）。与ICRISAT合作，在世界上有1000多个Arachis Hypogaea种质收集中，没有发现对该病毒的抵抗来源。经典的繁殖方法融合了来自野生阿拉奇亲属的宿主抗性基因，这是由于遗传不兼容而没有成功的。因此，随后的两个ACIAR项目，9017（1992-1995）和9439（1996-1999），通过不关注从病毒本身中得出的转基因抗性基因来解决商业花生系中针对PSTV的保护。引入，表达或沉默转基因的先决条件是将新型基因引入花生组织的可靠和有效手段，并随后再生的转化植物的再生，这些植物善于稳定地继承了新的抗性特征。在9017和9439项目期间，尝试了几种基因输送的方法，花生外植体的类型和不同的植物园再生途径，这些方法已在项目的年度报告和利文斯通和Birch（1995，1999）中总结了。此处描述的详细花生转化方案的开发构成了D. Malcolm Livingstone和Tanya Newton和D.M.的BSC荣誉论文的基础。利文斯通的博士学位论文（昆士兰大学植物学系），
摘要。 Nurhayati，Ardie SW，Santoso TJ，Sudarsono。 2021。CRISPR/CAS9介导的水稻CV中的基因组编辑。 IPB3S导致半昏迷表型M
摘要。Nurhayati，Ardie SW，Santoso TJ，Sudarsono。2021。CRISPR/CAS9介导的基因组编辑，在水稻CV中。 IPB3S导致半昏迷的表型突变体。 生物多样性22：3792-3800。 IPB3S是印尼低地大米和高产品种。 但是，植物高度的姿势使其容易产生住宿，这可以降低产量。 这项研究旨在通过将CRISPR/CAS9 GA 20 OX2构建体引入IPB3s并开发半沃尔夫水稻突变体来编辑GA 20 OX2基因。 IPB3S的未成熟胚胎外植体用于由携带PC1300-CAS9/ GA 20 OX2的EHA105农杆菌菌株介导的转化过程，并通过更改再生培养基组成。 PCR分析表明，水稻CV。 IPB3S遗传转化获得了携带HPT基因的推定突变体T0线（生长效率为47.9％，而转化效率为19.3％）。 使用开发的再生培养基，我们获得了24种推定的水稻CV。 IPB3S T0突变线携带HPT。 再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。 IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。 在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。CRISPR/CAS9介导的基因组编辑，在水稻CV中。IPB3S导致半昏迷的表型突变体。 生物多样性22：3792-3800。 IPB3S是印尼低地大米和高产品种。 但是，植物高度的姿势使其容易产生住宿，这可以降低产量。 这项研究旨在通过将CRISPR/CAS9 GA 20 OX2构建体引入IPB3s并开发半沃尔夫水稻突变体来编辑GA 20 OX2基因。 IPB3S的未成熟胚胎外植体用于由携带PC1300-CAS9/ GA 20 OX2的EHA105农杆菌菌株介导的转化过程，并通过更改再生培养基组成。 PCR分析表明，水稻CV。 IPB3S遗传转化获得了携带HPT基因的推定突变体T0线（生长效率为47.9％，而转化效率为19.3％）。 使用开发的再生培养基，我们获得了24种推定的水稻CV。 IPB3S T0突变线携带HPT。 再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。 IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。 在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。IPB3S导致半昏迷的表型突变体。生物多样性22：3792-3800。IPB3S是印尼低地大米和高产品种。但是，植物高度的姿势使其容易产生住宿，这可以降低产量。这项研究旨在通过将CRISPR/CAS9 GA 20 OX2构建体引入IPB3s并开发半沃尔夫水稻突变体来编辑GA 20 OX2基因。IPB3S的未成熟胚胎外植体用于由携带PC1300-CAS9/ GA 20 OX2的EHA105农杆菌菌株介导的转化过程，并通过更改再生培养基组成。PCR分析表明，水稻CV。 IPB3S遗传转化获得了携带HPT基因的推定突变体T0线（生长效率为47.9％，而转化效率为19.3％）。 使用开发的再生培养基，我们获得了24种推定的水稻CV。 IPB3S T0突变线携带HPT。 再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。 IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。 在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。PCR分析表明，水稻CV。IPB3S遗传转化获得了携带HPT基因的推定突变体T0线（生长效率为47.9％，而转化效率为19.3％）。使用开发的再生培养基，我们获得了24种推定的水稻CV。IPB3S T0突变线携带HPT。 再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。 IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。 在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。IPB3S T0突变线携带HPT。再生IPB3S的最佳介质是A培养基（再生效率73.3％）。IPB 8和IPB 14有可能在下一代评估。在IPB 8-3突变体中观察到T1生成的最短植物高度。
癌症免疫学和计算生物学博士学位...
率） • 国内外学费。关于项目抗体免疫疗法显着提高了血液系统和非血液系统恶性肿瘤的存活率。这些抗体通过直接靶向肿瘤细胞进行破坏（例如利妥昔单抗）或通过激活微环境内的关键免疫细胞以引发强大的免疫反应（例如派姆单抗）发挥作用。然而，临床批准的抗体所针对的抗原范围有限，研究表明扩大这些能力可以进一步增强肿瘤微环境内的免疫系统再激活。胶质母细胞瘤 (GBM) 是一种致命且高度耐药的原发性脑肿瘤，没有足够的治疗方法，这凸显了改善患者预后的迫切需要。由于人们误解抗体不能穿透血脑屏障 (BBB)，因此抗体免疫疗法在这种情况下相对未得到充分探索。然而，我们实验室的研究表明，在小鼠 GBM 的原位模型中，全身给药的抗体可以穿过 BBB 并通过消耗 T 调节细胞 (Treg) 来调节免疫系统，从而改善生存结果。该项目旨在研究是否可以使用双特异性抗体进一步增强体内这种调节，以靶向先天免疫系统，并使用患者来源的外植体模型评估对人类的可移植性。该项目的目的是生成双特异性抗体，与先天免疫系统相互作用并与 Treg 消耗剂协同作用，以增强 GBM 治疗的免疫疗法：
不含转移 DNA 的碱基编辑柑橘植物的生成
为了以最有效的方式恢复转基因柑橘植株，使用选择标记基因至关重要。在这项研究中，结果表明，将乙酰乳酸合酶 (ALS) 基因的突变形式与添加到选择培养基中的除草剂选择剂伊玛莠平 (IMZ) 结合使用可以实现这一目标。这种方法能够开发顺式基因再生体，即不掺入目前用于转基因选择的细菌基因的植株，此外，它还允许生成经过编辑的非转基因植株，这些植株的内源性 ALS 基因发生了改变，从而产生 IMZ 抗性。在这项研究中，将外植体与携带与 T-DNA 中的 nSpCas9 融合的胞苷脱氨酶的农杆菌共培养，并在添加了 IMZ 的培养基中选择再生体，从而恢复了柑橘突变体，其中 ALS 已使用碱基编辑器系统转化为 IMZ 抗性形式。对无转基因植物的分析表明，T-DNA 基因的瞬时表达足以诱发 ALS 突变，从而以 11.7% 的频率产生 IMZ 抗性芽。据我们所知，这是第一份关于无 T-DNA 编辑柑橘植物的报告。虽然需要进一步优化以提高编辑效率，但这种方法将允许生成具有改进的感官/农艺特征的新柑橘品种，而无需使用外来基因。
培养基，各种NAA和蔗糖浓度对Gerbera Jamesonii的体外繁殖的影响
Gerbera Jamesonii Bolus是全球最受欢迎的观赏植物之一，其微疏力允许在短时间内生产大量的True，以质量良好。在体外繁殖Gerbera需要培养培养基，并补充特定浓度的矿物质，有机补充剂和能源。这项研究的目的是确定合适的培养基，并评估不同浓度的蔗糖和含含乙酸的含量（NAA），以便在体外发育Gerbera Epplants。在四种不同的培养基上培养了两个Gerbera品种（艺术家和光彩）的微芽，以及各种蔗糖（20和30 G L -1）以及MGSO 4 .7H 2 O和CACL 2 O和CaCl 2 .2H 2 O（0.5x，1x和1.5x）对In Vitro Expagation的影响。MS培养基提供了更好的芽发育和较低浓度的蔗糖的应用，提高了Gerbera微繁殖的效率。在艺术家品种中，通过使用20 g l -1的蔗糖以及有或没有NAA应用（每个Epplant的9.08微型芽）获得了最多的芽。相比之下，光彩通过使用20 g l -1的蔗糖和0.1 mg l -1的NaA（每位外植体7.4微型芽）产生了最高的芽。此外，MGSO 4 .7H 2 O和CaCl 2 .2H 2 O的增加或减少没有改变传播效率。结果可能有助于优化生物反应器系统以进行大规模生产。
柑橘植物育种新技术用于改良重要农艺性状。综述
新型植物育种技术 (NPBT) 旨在突破果树品种的传统育种限制，以获得感官性状改良、抗生物和非生物胁迫的新品种，并通过（克隆）选择保持数百年来的果实品质。了解控制特定性状的基因对于 NPBT 的使用至关重要，例如基因组编辑和同源杂交。在研究包括柑橘在内的果树品种的国际科学界框架内，NPBT 主要用于应对病原体威胁。柑橘可以利用 NPBT，因为它具有复杂的物种生物学（无籽、无融合生殖、高杂合性和长幼期）和体外操作能力。据我们所知，通过转基因对柑橘进行基因组编辑已成功利用抗性基因 CsLOB1 在甜橙和葡萄柚中诱导出对柑橘细菌性溃疡病的抗性。未来，NPBT 还将用于改善果实性状，使其更健康。应用 NPBT 后植物的再生是一个瓶颈，因此有必要优化当前协议的效率。我们将讨论使用来自幼小的离体植株和成熟植株的外植体的优缺点。本综述中讨论的其他主要问题与对无标记系统的要求以及缩短漫长的幼苗期有关。本综述旨在总结文献中适用于柑橘的方法和途径，重点关注使用 NPBT 之前观察到的原则。
玉米中有效的基因切除系统
使用形态学基因婴儿繁荣（BBM）和wuschel2（WUS2）以及新的三元构建体增加了基因型范围和可用于玉米转化的外植体的类型。进一步优化BBM / WUS2的表达模式已导致快速玉米转化方法，这些方法更快，适用于更广泛的近交范围。但是，BBM / WUS2的表达会损害再生植物的质量，从而导致不育。我们推论转化后的剪切形态基因，但在再生之前会增加肥沃的T0植物的产生。我们开发了一种使用诱导位点特异性重组酶（CRE）来消除形态学基因的方法。在早期胚胎发育中使用了受发展调控的启动子，例如OLE，GLB1，END2和LTP2，以驱动CRE的CRE切除，并以25-100％的速度产生切除的事件。利用切除激活的可选标记的一种不同的策略，以53 - 68％的速度产生了切除的事件；但是，转化频率较低（13-50％）。使用诱导热冲击启动子（例如hsp17.7，hsp26）表达CRE，以及组织培养条件和构造设计的改善，导致T0转化的高频（29-69％），切除（50 - 97％），可用的质量事件（4--15％）（4-15％），几乎没有Escapes（非TransgaInic; 14 - 17％; 14 - 17％; 14 - 17％;该方法产生的转基因事件不含形态学和标记基因。
SERCA2a 蛋白水平在人类心力衰竭中保持不变
肌质网 Ca 2+ ATPase 2a (SER- CA2a) 及其主要调节剂受磷蛋白 (PLN) 会影响心肌中的 Ca 2+ 处理，并与心力衰竭 (HF) 有关。针对 HF 患者的研究报告称 SERCA2a 和 PLN 转录水平降低，但在蛋白质水平上的发现并不太一致。1,2 先前的研究仅限于少数具有异质性 HF 病因的患者。1,2 尽管在动物模型中取得了有希望的结果，但针对 SERCA2a 过表达的基因治疗临床试验尚未显示出结果的显着改善。3 因此，我们的目标是对 HF 患者的 SERCA2a 和 PLN 蛋白水平进行全面研究。在本研究中，我们评估了从 3 组获得的心脏外植体中 SERCA2a 和 PLN 的转录本和蛋白质水平：114 名患有扩张型心肌病 (DCM) 的 HF 患者；77% 为男性；年龄，51.4±11.4 岁；65 名患有缺血性心脏病 (IHD) 的 HF 患者；85% 为男性；年龄，57.6±6.5 岁；57 名无心衰患者 (35% 为男性；年龄，67.8±9.3 岁) 作为对照 (图 [A])。人类左心室来自拉科鲁尼亚大学医院的晚期心力衰竭和心脏移植科 (西班牙) 和塞梅维斯大学心脏和血管中心的移植生物库 (匈牙利)。已获得书面同意和机构批准（REC LRS-17/18- 5080、Entry-17440；REC Entry 2015/312；ETT TUKEB 7891/2012/EKU [119/PI/12.]；和 IV/10161- 1/2020）。支持本研究结果的数据
改进的农杆菌介导的转化和再生方案，用于成功进行茄子基因工程和基因组编辑
成功的基因操作很大程度上取决于有效的转化和再生方法。农杆菌介导的转化一直是通过基因工程和最近开发的基于 CRISPR/Cas9 的基因组编辑方法改良作物的首选方法。在本研究中，我们为三个高产茄子品种 BARI begin 2、4 和 6 开发了一种改进的再生和农杆菌介导的转化方案。深入研究了几个关键参数，包括培养基组成、生长调节剂浓度、兼容抗生素选择、超水和生根过程。对于研究中使用的三种不同外植体，发现 MS + 2.5 mg/l BAP 单独作为激素补充剂是实现最大芽再生的最佳选择。当在 MS + BAP 2.5 mg/l 补充培养基中分别以 0.2 mg/l 和 0.1 mg/l 的浓度使用酪蛋白水解物和山梨糖醇时，观察到超水显著降低（16.67 ± 0.11%）。发现当农杆菌浓度为 0.6（OD 600 nm）、感染 10 分钟、共培养 2 天时，转化效率最高。我们发现 100 mg/l 浓度的卡那霉素适合作为筛选茄子转化事件的选择压力。此方案中标准化的生根培养基成分在体外和体外条件下均提供了更高的生根率（85%）。使用此方案，可以轻松克服茄子基因工程中存在的问题，并提高转化效率。
通过冰片包埋水凝胶局部治疗酪氨酸激酶 2 抑制剂：对牛皮癣的预防、治疗和复发管理的评估
银屑病是一种免疫介导的炎症性皮肤病，其特征是慢性复发-缓解过程，目前主要通过局部疗法进行治疗。虽然口服酪氨酸激酶 2 抑制剂 (TYK2i) 是治疗银屑病的有效方法，但局部应用 TYK2i 的潜在疗效仍未得到探索。本文将卡波姆/海藻酸水凝胶与冰片 (BO) 一起包埋作为 TYK2i 的新型局部载体，以增强透皮渗透性和抗银屑病功效。表型图像、银屑病严重程度评分指数 (PSI)、组织学、免疫组织化学染色和 PCR 分析证实，水凝胶系统 TYK2i-BO-gel 在小鼠银屑病样皮炎模型中表现出显著改善的预防和治疗效果。值得注意的是，TYK2i-BO-gel 的效果优于传统的外用皮质类固醇疗法，可显著预防银屑病病变复发，衡量标准是耳朵厚度变化 (p < 0.0001)、PSI (p < 0.0001) 和表皮厚度 (p < 0.05) 减少了近 50%。此外，在人体皮肤外植体模型中也观察到 TYK2i-BO-gel 引起的增强的抗炎作用，这意味着它对人类患者有潜在的应用价值。加入 BO 后，TYK2i-BO-gel 不仅可以增加皮肤渗透性，还可以抑制角质形成细胞中抗菌肽的表达，并通过抑制 STAT3 的激活来促进 TYK2i 的抗 Th17 反应。因此，这项研究代表了 TYK2i-BO-水凝胶作为一种新的抗银屑病管理外用制剂的可及性和有效性，并显示出巨大的临床应用潜力。