使用形态学基因婴儿繁荣(BBM)和wuschel2(WUS2)以及新的三元构建体增加了基因型范围和可用于玉米转化的外植体的类型。进一步优化BBM / WUS2的表达模式已导致快速玉米转化方法,这些方法更快,适用于更广泛的近交范围。但是,BBM / WUS2的表达会损害再生植物的质量,从而导致不育。我们推论转化后的剪切形态基因,但在再生之前会增加肥沃的T0植物的产生。我们开发了一种使用诱导位点特异性重组酶(CRE)来消除形态学基因的方法。在早期胚胎发育中使用了受发展调控的启动子,例如OLE,GLB1,END2和LTP2,以驱动CRE的CRE切除,并以25-100%的速度产生切除的事件。利用切除激活的可选标记的一种不同的策略,以53 - 68%的速度产生了切除的事件;但是,转化频率较低(13-50%)。使用诱导热冲击启动子(例如hsp17.7,hsp26)表达CRE,以及组织培养条件和构造设计的改善,导致T0转化的高频(29-69%),切除(50 - 97%),可用的质量事件(4--15%)(4-15%),几乎没有Escapes(非TransgaInic; 14 - 17%; 14 - 17%; 14 - 17%;该方法产生的转基因事件不含形态学和标记基因。
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