参考文献1。en ISO 11133:2014+AMD1:2018+AMD2:2020。 食物,动物饲料和水的微生物学 - 制备,生产,存储和性能测试。 2。 ISO 14189:2013。 水质 - 灌注梭菌的枚举 - 使用膜过滤的方法。 3。 ISO 7937:2004。 食物和动物喂养物质的微生物学 - 检测梭状芽胞杆菌的水平方法 - 菌落计数技术。 4。 Rapporti Istisan 07/5 ISSA 005B Rev.00。 确定性DI梭状芽胞杆菌(Sucque provenienti o污染da acque浅表表)。 5。 downes F.P.和K. Ito(2001)食品微生物学检查的纲要。 第4版。 美国公共卫生协会,华盛顿特区6。 Haushild,A.H.W。和A. Hilsheimer(1974)对perfrigens枚举的评估和修改。 应用。 微生物。 27:78。 7。 Harmon,S.M.,O.A。 Kautler和J.T. Peeler(1971)改进了灌注梭状芽胞杆菌的枚举。 应用。 微生物。 22:688。 8。 Shahidi,SA。 和AR Ferguson(1971)App。 微生物。 21:500-606。en ISO 11133:2014+AMD1:2018+AMD2:2020。食物,动物饲料和水的微生物学 - 制备,生产,存储和性能测试。2。ISO 14189:2013。 水质 - 灌注梭菌的枚举 - 使用膜过滤的方法。 3。 ISO 7937:2004。 食物和动物喂养物质的微生物学 - 检测梭状芽胞杆菌的水平方法 - 菌落计数技术。 4。 Rapporti Istisan 07/5 ISSA 005B Rev.00。 确定性DI梭状芽胞杆菌(Sucque provenienti o污染da acque浅表表)。 5。 downes F.P.和K. Ito(2001)食品微生物学检查的纲要。 第4版。 美国公共卫生协会,华盛顿特区6。 Haushild,A.H.W。和A. Hilsheimer(1974)对perfrigens枚举的评估和修改。 应用。 微生物。 27:78。 7。 Harmon,S.M.,O.A。 Kautler和J.T. Peeler(1971)改进了灌注梭状芽胞杆菌的枚举。 应用。 微生物。 22:688。 8。 Shahidi,SA。 和AR Ferguson(1971)App。 微生物。 21:500-606。ISO 14189:2013。水质 - 灌注梭菌的枚举 - 使用膜过滤的方法。3。ISO 7937:2004。 食物和动物喂养物质的微生物学 - 检测梭状芽胞杆菌的水平方法 - 菌落计数技术。 4。 Rapporti Istisan 07/5 ISSA 005B Rev.00。 确定性DI梭状芽胞杆菌(Sucque provenienti o污染da acque浅表表)。 5。 downes F.P.和K. Ito(2001)食品微生物学检查的纲要。 第4版。 美国公共卫生协会,华盛顿特区6。 Haushild,A.H.W。和A. Hilsheimer(1974)对perfrigens枚举的评估和修改。 应用。 微生物。 27:78。 7。 Harmon,S.M.,O.A。 Kautler和J.T. Peeler(1971)改进了灌注梭状芽胞杆菌的枚举。 应用。 微生物。 22:688。 8。 Shahidi,SA。 和AR Ferguson(1971)App。 微生物。 21:500-606。ISO 7937:2004。食物和动物喂养物质的微生物学 - 检测梭状芽胞杆菌的水平方法 - 菌落计数技术。4。Rapporti Istisan 07/5 ISSA 005B Rev.00。确定性DI梭状芽胞杆菌(Sucque provenienti o污染da acque浅表表)。5。downes F.P.和K. Ito(2001)食品微生物学检查的纲要。第4版。 美国公共卫生协会,华盛顿特区6。 Haushild,A.H.W。和A. Hilsheimer(1974)对perfrigens枚举的评估和修改。 应用。 微生物。 27:78。 7。 Harmon,S.M.,O.A。 Kautler和J.T. Peeler(1971)改进了灌注梭状芽胞杆菌的枚举。 应用。 微生物。 22:688。 8。 Shahidi,SA。 和AR Ferguson(1971)App。 微生物。 21:500-606。第4版。美国公共卫生协会,华盛顿特区6。Haushild,A.H.W。和A. Hilsheimer(1974)对perfrigens枚举的评估和修改。应用。微生物。27:78。 7。 Harmon,S.M.,O.A。 Kautler和J.T. Peeler(1971)改进了灌注梭状芽胞杆菌的枚举。 应用。 微生物。 22:688。 8。 Shahidi,SA。 和AR Ferguson(1971)App。 微生物。 21:500-606。27:78。7。Harmon,S.M.,O.A。 Kautler和J.T. Peeler(1971)改进了灌注梭状芽胞杆菌的枚举。 应用。 微生物。 22:688。 8。 Shahidi,SA。 和AR Ferguson(1971)App。 微生物。 21:500-606。Harmon,S.M.,O.A。Kautler和J.T. Peeler(1971)改进了灌注梭状芽胞杆菌的枚举。 应用。 微生物。 22:688。 8。 Shahidi,SA。 和AR Ferguson(1971)App。 微生物。 21:500-606。Kautler和J.T.Peeler(1971)改进了灌注梭状芽胞杆菌的枚举。应用。微生物。22:688。8。Shahidi,SA。 和AR Ferguson(1971)App。 微生物。 21:500-606。Shahidi,SA。和AR Ferguson(1971)App。微生物。21:500-606。
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紫罗兰色红胆葡萄糖(VRBG)琼脂脱水且现成的培养基1-在食物,动物饲料和环境样品中检测和列举肠杆菌科的使用和枚举。2 – C OMPOSITION - TYPICAL FORMULA * ( AFTER RECONSTITUTION WITH 1 L OF WATER ) DEHYDRATED AND READY - TO - USE MEDIUM Peptone 7.0 g Yeast extract 3.0 g Sodium chloride 5.0 g Bile salts No.3 1.5 g Glucose 10.0 g Neutral red 30.0 mg Crystal violet 2.0 mg Agar 15.0 g *The formula may be adjusted and/or supplemented to meet the required performances 标准。3-方法的含量和解释肠杆菌科的解释通常被食品制造商视为卫生指标,因此用于监测采取的预防措施的有效性。这也反映在肠杆菌科作为卫生指标的几种国家和国际标准或标准中。紫罗兰色胆汁葡萄糖(VRBG)琼脂是由摩森植物1设计的,用于枚举肠杆菌科,通过将葡萄糖添加到紫罗兰红胆汁乳糖琼脂中。Mossel等人后来的作品。2,3证明可以省略乳糖,从而导致称为VRBG琼脂的配方。紫罗兰色红胆葡萄糖琼脂,以进行探测和枚举,并采用富集前的步骤,并采用肠杆菌科的MPN技术,当期望寻求的微生物预计需要复苏,并且预计需要的数量低于100次以下或每米级测试。葡萄糖的同化会导致培养基的酸化,因此胆汁盐和中性红摄取的沉淀。ISO 21528-2 5推荐使用倒板技术枚举肠杆菌科,而预计所需的菌落数量为每毫升100毫升或测试样品的每克。肽为细菌生长提供了重要的生长因子;酵母提取物是用于生长刺激的B-VITAMINS复合物的来源。氯化钠保持渗透平衡。培养基依赖于选择性抑制性成分晶体紫和胆汁盐,这些含量抑制了革兰氏阳性细菌的生长以及指标系统葡萄糖和中性红色的生长。肠杆菌科以红色粉红色至红色紫色菌落的生长,周围是红色降水带。非葡萄糖发酵罐(例如,假单胞菌,阿科杆菌,阿尔卡吉尼等)表现出透明的无色菌落。除肠杆菌科以外的一些革兰氏阴性细菌可能会生长,但可能受到覆盖程序的限制。4a -d介质制剂(脱水培养基)悬浮41.5 g在1000毫升冷纯净的水中。热量频繁搅动以完全溶解。不要自压盐,也不要过热。冷却至47-50°C,混合并分布成无菌培养皿。4B- d的介于培养基(准备就绪 - 使用烧瓶 /试管)的液体液化液在100±2°C或温度控制的水浴(100°C)中的高压釜中烧瓶 /管的含量。或者,可以将瓶子或管子放入装有水的罐子中,该水放在热板上并煮沸。在加热之前稍微松开盖,以允许压力交换。冷却至47-50°C,然后将培养基倒入无菌条件下的无菌培养皿中。5-疗程特征脱水的培养基外观绿色紫色,细,均匀,自由流动的粉末溶液和准备好的中等外观紫罗兰,在20-25°C时清除最终pH 7.4±0.2 6- M M M原始物质 - 包装
脱水培养基 1-预期用途 用于牛奶和奶制品中的微生物平板计数。 2-成分 *典型配方(用 1 升水溶解后) 胰蛋白胨 5.0 g 酵母提取物 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 脱脂牛奶 1.0 g 琼脂 15.0 g *配方可能会进行调整和/或补充,以满足所需的性能标准。 3-方法原理和程序说明 ISO 标准 1-3 建议使用补充有脱脂牛奶的平板计数琼脂来计数牛奶和奶制品中的中温或嗜冷微生物。该测试基于以下假设:每个活细胞、细胞对或小细胞簇与生长培养基混合后会形成一个可见的菌落,称为菌落形成单位 (CFU)。 4 微生物计数需要稀释样品,以达到所选方法可计数的菌群。目前已描述了几种可用于需氧菌落计数的技术:倾倒平板法、表面平板法、膜过滤法、螺旋板法、校准环法、滴板法。4 选择最合适的方法必须考虑监管机构的要求、要分析的样品类型、预期的微生物和污染程度。国际标准 ISO 4833-1 规定了一种用于中温菌落计数的倾倒平板法,适用于在规定了检测下限时需要可靠计数的产品或预期含有扩散菌落的产品。1 ISO 4833-2 规定了一种适用于含有热敏性微生物或专性需氧菌的产品的表面平板法。2 ISO 17410 描述了一种用于在 6.5°C 下培养的嗜冷菌落计数的表面平板法。 3 含脱脂牛奶的平板计数琼脂的配方符合 ISO 标准。1-3 胰蛋白胨为微生物生长提供氮、碳、矿物质和氨基酸。酵母提取物是维生素的来源,尤其是 B 族维生素。葡萄糖是碳和能量的来源。配方中包含的脱脂牛奶经测试不含抗生素。4 - 脱水培养基的使用方法 将 24.5 g 悬浮在 1000 mL 冷纯净水中。加热至沸腾并频繁搅拌以完全溶解,然后在 121°C 下高压灭菌 15 分钟。冷却至 47-50°C,充分混合并分配到无菌培养皿中。 5 - 物理特性 脱水培养基外观 米色、细腻、均匀、自由流动的粉末 溶液和制备培养基外观 淡米色、透明或略带乳白色 20-25 °C 时的最终 pH 值 7.0 ± 0.2 6 - 提供的材料 - 包装
摘要 尽管倾注平板法在微生物质量控制中得到广泛应用,但它也存在某些缺点,包括必须在接种前融化培养基。在本研究中,通过使用较低浓度的琼脂(10 g/L)对培养基的制备进行了改进,琼脂在灭菌过程中与营养物质分离。在食品、化妆品和药品微生物质量控制中经常使用的培养基中评估了新方案,其中包括胰蛋白酶大豆琼脂 (TSA)、Sabouraud 4% 葡萄糖琼脂 (SDA) 和紫红胆汁葡萄糖琼脂 (VRBG)。与传统生产的培养基相比,改进后的培养基显著改善了 SDA 中酿酒酵母、金黄色葡萄球菌、肠道沙门氏菌亚种的生长。在 TSA 中可分离肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和白色念珠菌,在 VRBG 中可分离大肠杆菌 ATCC 8739 和 ATCC 25922 以及鼠伤寒沙门氏菌。改良的 VRBG 对铜绿假单胞菌也更具选择性。至于物理化学性质,在 TSA 和 VRBG 中观察到 pH 值明显较低,在 TSA 中观察到强度值较低。将琼脂与培养基的其他成分分开灭菌,并将琼脂浓度降低至 10 g/L,可改善微生物生长,并提高倾注平板法中差异培养基的选择性。这些改进可以促进这种培养技术的自动化。
f g -1)和pedotoh/pei(142.3 f g -1)的扫描速率为10 mV s -1。随后,我们制造了
tmp 006 - 营养琼脂板的预期使用一种通用培养基,用于种植各种微生物。产品摘要和解释营养培养基是用于培养和列举细菌的基本培养基,这些培养基并非特别挑剔和维持微生物,通过富集血清或血液来培养挑剔的生物体,并在生物学或血清学测试之前也用于纯度检查。营养琼脂非常适合演示和教学目的,在这种目的中,通常需要在环境温度下培养更长的生存期,而不会在更营养的基材中发生过度生长的风险。这种相对简单的公式已保留,并且仍被广泛用于各种材料的微生物检查,也建议通过标准方法进行。它是几种用于常规培养微生物的非选择性介质之一。构图
*根据需要进行调整和 /或补充,以满足性能标准方向,将23.5 g粉末悬挂在1升蒸馏水中。通过频繁搅拌将沸腾的溶解。分配到最终容器中,并在121°C的高压釜中对15分钟进行消毒。描述板计数琼脂公式是根据Buchbinder等人的。在对微生物板计数的培养基研究中的建议。为了避免添加牛奶,已修改了标准化琼脂标准琼脂的原始配方。这种新的组成允许大多数微生物的生长,而无需进一步添加。该培养基的配方等效于“乳制品检查标准方法”,USP的“胰蛋白葡萄糖酵母琼脂”,“ Deutsche Landswirtchaft”以及Apha和Aoac的AOAC的板块倒物。这是任何类型样品的平板计数的首选媒介。技术准备样品的10倍连续稀释液,并从每个稀释液(重复)中取1 ml等分试样,并将其放入无菌培养皿中。倒大约每个板中的无菌冷却培养基(约45°C)。通过图8的形式轻轻混合板。将不受干扰的板留在倒置的位置。孵育时间和温度取决于正在研究的微生物的类型。对于一般有氧计数,在30°C下孵育3天。在24、48和72小时后进行读数。质量控制APHA提出的板数方法包括将熔融琼脂倒在50°C的板上,这些板上包含稀释样品的板(倒板技术)。在32-35°C下孵育48小时后进行最终计数。对于具有其他温度需求的微生物,已经提出了以下孵育:在32 -35°C,45°C下2-3天,在55°C下为2天,在20°C下为20°C,10天,6.5ºC±1ºC。样品稀释液用1/4林格的溶液,缓冲肽水或最大恢复稀释剂根据其性质制备。倒板计数方法比扩散板技术更优选,因为它给出了更高的计数。尽管如此,后者促进了殖民地的孤立和恢复。
*根据需要进行调整和 /或补充,以满足性能标准方向,将20克粉末悬挂在1升蒸馏水中,然后浸泡。煮沸,不断搅拌。分配到合适的容器中,并在121°C的高压釜中对15分钟进行消毒。描述这种含有牛奶的媒介比其他标准媒体更丰富营养。但是,介质的乳白色使早期观察有时很难。由于其较低的琼脂浓度,它可用于浇注板法或扩散板法。技术准备了样品的10倍连续稀释液,并从每个稀释液中以重复的等分试样服用1 mL,并将其放入无菌培养皿中。倒大约每个板中的无菌冷却培养基(约45°C)。通过在图8中旋转板轻轻混合。将不受干扰的板留在倒置的位置。孵育时间和温度取决于正在研究的微生物的类型。通常进行有氧计数,在30°C下孵育3天。在24、48和72小时检查板。APHA提出的板数方法由倒板法组成,即将熔融琼脂倒在50°C的板上,这些平板上包含稀释的样品。在32-35°C下孵育48小时后进行最终计数。对于具有其他温度需求的微生物,已经提出了以下温育:在30±1°C,在45°C下为2-3天,在55°C下为2天,在20°C,在5-7°C下为20°C,7-10天,3-5天。质量控制样品稀释液用1/4林格的溶液,缓冲肽水或最大恢复稀释剂根据其性质制备。倒板计数方法比表面接种方法更优选,因为它给出了更高的计数,尽管后者有助于菌落的隔离和恢复。
伯克霍尔德菌琼脂以 PC 培养基为基础,该培养基最初由 Gilligan 发明。研究发现,这种培养基比麦康凯琼脂更适合伯克霍尔德菌的生长。培养基中的酪蛋白糖和酵母提取物提供碳、氮、长链氨基酸、维生素 B 源和其他必需营养素。结晶紫和抗菌剂用作选择剂。结晶紫和万古霉素可抑制革兰氏阳性球菌,包括肠球菌和葡萄球菌。多粘菌素 B 和庆大霉素等抗生素可抑制革兰氏阴性细菌。伯克霍尔德菌代谢丙酮酸形成碱性终产物。蔗糖和乳糖是可发酵碳水化合物。酚红指示剂在碱性 pH 下从粉橙色变为粉红色。如果出现带有黄色晕圈的绿褐色菌落或被粉红色区域包围的白色菌落,则可能存在伯克霍尔德菌。