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World File Search System电穿孔
优化的 HDR 介导的 K-荧光蛋白敲入...
图 2：在 K-562 细胞中通过电穿孔优化 HDR 介导的报告基因敲入。A. LMNA -EGFP 供体质粒单独电穿孔，浓度增加，显示非特异性 EGFP 表达量较低。Cas9 蛋白：crRNA：tracrRNA 电穿孔，LMNA -EGFP 供体质粒浓度增加，显示 EGFP 表达相关增加。B. 放大倍数增加后，HDR 介导的敲入样本中 EGFP 表达的定位与 LMNA 的预期一致，位于细胞核中，并与 Hoechst 染色共定位。C. HDR 介导的敲入细胞群的流式细胞术分析显示，随着 DNA 供体质粒数量的增加，EGFP 表达增加高达 32%。单独 DNA 供体质粒对照的相应分析显示所有剂量的 EGFP 表达均低于 0.5%（未显示数据）。
基因组编辑-Alt -R为CAS12A（CPF1）超核酸酶-Net
图1。Alt-R A.S. CAS12A超蛋白在TTTV目标位点选择方面表现出卓越的性能。 DOTS代表了216个指南的等级编辑效率，该指南靶向TTTV（深色阴影）或TTTN（浅色阴影）PAM站点，并且在输送到HEK-293细胞（96个位点）和陪同下（96个位点）和陪同细胞（96个位点）和野生型CAS12A V3（绿色）V3（绿色）或Cas12a Ultra（蓝色）。 如Alt-R CRISPR-CAS12A用户指南中所指示的RNP 人类细胞使用4D-Nucleofector™System（LONZA）的RNP电穿孔。 使用NGS（Rhampseq Amplicon测序）进行电穿孔后48小时编辑效率。Alt-R A.S. CAS12A超蛋白在TTTV目标位点选择方面表现出卓越的性能。DOTS代表了216个指南的等级编辑效率，该指南靶向TTTV（深色阴影）或TTTN（浅色阴影）PAM站点，并且在输送到HEK-293细胞（96个位点）和陪同下（96个位点）和陪同细胞（96个位点）和野生型CAS12A V3（绿色）V3（绿色）或Cas12a Ultra（蓝色）。人类细胞使用4D-Nucleofector™System（LONZA）的RNP电穿孔。使用NGS（Rhampseq Amplicon测序）进行电穿孔后48小时编辑效率。编辑效率。
实验动物
摘要：电穿孔动物基因敲除系统技术（TAKE）是一种简单有效的方法，利用成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR 相关蛋白 9（Cas9）系统生成转基因小鼠。为了增强电穿孔在小鼠基因编辑中的多功能性，针对玻璃化冷冻小鼠胚胎优化了电条件，并将其应用于广泛使用的近交系（C57BL/6NCr、BALB/cCrSlc、FVB/NJcl 和 C3H/HeJJcl）的新鲜胚胎。电脉冲设置（穿孔脉冲：电压，150 V；脉冲宽度，1.0 ms；脉冲间隔，50 ms；脉冲数，+4；转移脉冲：电压，20 V；脉冲宽度，50 ms；脉冲间隔，50 ms；脉冲数，±5）对于玻璃化冷冻加温的小鼠胚胎是最佳的，其可以有效地将 gRNA/Cas9 复合物递送到受精卵中而无需透明带变薄过程并编辑目标位点。这些电条件在广泛使用的近交系小鼠中有效地产生了转基因小鼠。此外，使用间隙为 5 mm 的电极进行电穿孔可以在 5 分钟内引入超过 100 个胚胎，而无需特殊的预处理和复杂的技术技能，例如显微注射，并且在产生的后代中表现出较高的胚胎发育率和基因组编辑效率，从而快速高效地产生基因组编辑小鼠。本研究中使用的电条件用途广泛，可以更轻松高效地生成转基因小鼠，有助于了解人类疾病和基因功能。关键词：CRISPR/Cas9、电穿孔、冻融胚胎、基因组编辑
优化电穿孔参数，使用 3 至 2000 kDA 的荧光葡聚糖将大分子有效递送至猪受精卵中
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可证（未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。
小鼠糖尿病诱导电穿孔介导的基因转移至啮齿动物胚胎组织IACUC标准程序生效日期：2024年5月描述：Elec
手术程序：将根据IACUC的啮齿动物生存手术指南制备怀孕（12.5-16.5 d后）女性的腹部。然后，将在皮肤和腹膜中进行腹部中线切口，长度约1.5厘米至2厘米，以暴露子宫角。应注意维持无菌的子宫和周围的组织，并用温暖的无菌盐水保持湿润。胚胎/胎儿可以使用纤维光通过子宫壁进行透射，以可视化受体组织。可视化目标区域的其他方式，例如超声。完成电穿孔程序后，子宫角将返回腹膜腔，切口将以两层关闭。完成电穿孔程序后，子宫角将返回腹膜腔，切口将以两层关闭。
