159 图 2. 实验设置以确定适用于 DBS 的 DNA 提取和纯化方案 160。测试的不同方法是 DNA_P1) QIAsymphony® PowerFecal® Pro DNA 161 试剂盒(目录号 938036,Qiagen),包括在 FastPrep-24™ Classic 162 上以 6 m/s 的速度进行 6 轮均质化 162 60 秒,中间休息 5 分钟,然后用 163 蛋白酶 K 600 mAU/ml(Qiagen)消化,然后在 QIAsymphony® SP 164 机器人(Qiagen)上进行自动纯化。DNA_P2) 执行与 DNA_P1 相同,但不进行蛋白酶 K 处理。 DNA_P3) ZymoBIOMICS™ DNA Miniprep Kit (Zymo Research Corp., Irvine, CA, USA) 经 FastPrep-24™ Classic 匀浆化后,以 6m/s 的速度匀浆 60 秒,共 6 轮,中间间隔 5 分钟。DNA_P4) MagNA Pure 96 DNA 和 Viral NA 小容量试剂盒在 MagNA Pure 96 仪器 (Roche, Basel, Switzerland) 上进行,采用蛋白酶 K 预处理步骤和标准缓冲液,使用针对双链 DNA 和下一代测序优化的 DNA Blood ds SV 方案。其中,DNA_P1、DNA_P2、DNA_P3 和 DNA_P4 用于从模拟物、空白和猪粪便中提取 DNA,DNA_P1 在所有研究动物的粪便上进行性能测试,此外还对阳性和空白对照进行了三份重复测试。使用 DNA_P1 从牛、马、犬、羊和猪的粪便中提取 DNA,并在 Illumina NovaSeq 上进行测序,从每个样本中生成 >2000 万个 PE 读数。这些数据集用于告知所需的测序工作量。
1个单位进化和寄生姐妹(UNEREP),国际研究中心,弗朗西斯维尔(CIRMF),弗朗西维尔bp 769,加蓬; biteghebiteghe@gmail.com(J.-C.B.-B.-E.); borislendongo@yahoo.fr(J.B.L.W。); onouaseinnat@gmail.com(S.-S.O.); lyds_ass@yahoo.fr(L.S.O.-L。); mpega_mb2@yahoo.fr(c.n.m.m.n.); charleneklc@gmail.com(l.c.k.); lekana_jb@yahoo.fr (J.-B.L.-D.) 2 Laboratory of molish and cellular biology (LABMC), University of Masuku Sciences and Techniques, Franceville BP 943, Gabon 3 unit of Emerging Viral Diseases (UMVE), International Research Center M É DICALES DE FRANCEVILLE, Franceville BP 769, Gabon; s_lekana@yahoo.fr 4 Mivegec,IRD,CNRS,Montpellier大学,法国蒙彼利埃34900; rougeron.virginie@gmail.com 5博士学位学校在热带感染力学领域,法国维尔bp 876,Gabon 6 D Ettement de Parasitologie-Mycologie,Universitédesciencesde des Sciences de laSanté大学,Libreville BP 4008,Gabon * sostomence:Imboumykarl@imboumykarl@imboumykarl@imboumykarl@imboumykarl@n n@gmail@gmail@gmail;这样的。: +241-660-72638
简介:自由放养的白尾鹿(Odocoileus virginianus)是位于密歇根州东北部(美国)的牛结核病(BTB)的自我维持的水库,(美国)不断使该地区的牛业陷入困境。自由娱乐鹿的收获,诱饵禁令和农场的缓解措施减少了但没有消除鹿的BTB,也没有消除向牛的传播。鹿的明显患病率很低(1-2%),但恒定,疫苗接种可能是帮助解决该问题和值得研究的附加工具。结核分枝杆菌Calmette-guérin(BCG)疫苗是一种广泛使用的人类疫苗用于结核病,在家庭牲畜和野生动植物中也接受了很好的研究。它是主要的疫苗候选者,口服输送是将其交付给自由放养鹿的逻辑手段,尽管以前从未尝试过。
保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。(未经同行评审证明)是作者/资助者,他已授予Medrxiv的许可证,以永久显示预印本。
目标。这项研究的目的是使用16S rRNA基因的下一代测序(NGS)来表征并可能区分健康和肥胖马的下肠道(粪便)细菌。方法。这项研究涉及7匹马(4匹马和3匹母马),年龄8-17岁:乌克兰鞍品种1-4匹马(马1运动马匹rebus,10 Y.O.,马匹2马匹2种马santes,15 Y.O.,15 Y.O.,15 Y.O.),重量吃水的5匹马(种马Tsyhan,8 Y.O.)和非透明马6和7(Mare Sne-Zhynka,10 Y.O.,Mare Rumba 12 Y.O.)马匹2、4、5和7是肥胖,马1、3和6是健康的。所有马匹都保留在州生物技术大学的马术中心,乌克兰教育与科学部(乌克兰哈尔基夫)。根据制造商的说明,使用Purelink微生物组DNAPuriÞ阳离子试剂盒(Invitrogen,USA)提取直肠粪便样品的总DNA。准备了细菌16S rRNA的库,我们使用了16S rRNA条形码试剂盒1-24(美国牛津纳米波尔)。为了净化所获得的库,磁性颗粒核元素清理和尺寸选择(Macherey-Nagel,德国根据推荐的快速测序放大器的建议协议 - 16S条形码(SQK-16SS024)(测序套件的手册)。这些条件基于Fujiyoshi等人(2020)中所述的16S rRNA基因扩增阳离子的标准方案,并确保细菌DNA跨各种群分类群的稳健扩增。结果。结论。细菌门的代表(Syn.肌动杆菌),纤维杆菌,小叶虫 - 螺旋杆菌(Syn.螺旋体),杆菌,富公司(Syn.芽孢杆菌),planctomycetota,verrucomicrobiota(Syn.verrucomicrobia),念珠菌Melainabacteria,kiritimatiellota和proteeobacteria(Syn.假单胞菌)。占主导地位的门是坚硬的,其份额是所有检测到的门的50%至82%。与杆菌的数量相比,健康马匹和肥胖马之间的数量差异很大。在健康马1,3和6中,这是企业和肥胖的马2,4,5和7的2.5、3.4和2.9倍,它是8.6、8.2、7.6和5.7倍。与杆菌相比,坚硬的人数在健康马匹和肥胖马之间发生了显着变化。在健康的马1、3和6中,牢固的数量分别为2.5、3.4和2.9倍,而在肥胖的马2、4、5和7中,牢固的数量分别为8.6、8.2、7.6、7.6和5.7倍。在肥胖的马匹2、4、5和7中观察到蛋白杆菌的数量增加,范围为25%至37%,而在健康运动马1、3和6中,蛋白质的水平在1.07至3.43%之间,这对于健康动物的微生物组典型。在研究的马匹粪便中检测到低水平的放线菌(分杆菌):健康运动马3分别为0.09%,健康运动马3分别为0.09%,健康马匹6分别为0.15%。相比之下,肥胖的马2、4、5和7的水平分别从0.21%到0.48%。重要的是要注意,放线菌的门还包括BiÞ多杆菌属,在所研究的任何动物中均未检测到。在乌克兰第一次,我们对七个不同年龄,性别和品种的七匹马的下肠道(粪便材料)的细菌菌群进行了测序。在肥胖马的粪便中,细菌的细菌占主导地位(天细菌粉,粉状,裂缝),尤其是来自振荡性螺丝素和lachnospileceae的家族,并伴随着细菌的降低细菌(fcylumberimteroidota)(FC-fcbe)(FC-fc-
当考古材料缺失时,重建过去的环境可能具有挑战性。研究有机分子是克服这一缺点的一种方法,这些分子在环境中以痕迹的形式存在了数千年。粪便脂质标记物(类固醇和胆汁酸)和古代沉积物 DNA 提供了一种互补和交叉验证的分析工具,可以拓宽环境考古学中使用的方法范围。然而,人们对结合这两种方法的好处知之甚少。我们简要概述了目前对粪便脂质标记物和古代沉积物 DNA 的了解状况。我们确定了科学和方法上的差距,并提出了它们对更好地理解过去动态的人与动物关系的潜在相关性。通过这篇评论,我们旨在促进新的研究途径,既在既定学科中,也结合迄今为止很少结合的分析方法。
1。上海肠道疾病研究所,上海第十人医院隶属于汤吉大学,200072年上海,中国上海。2。张上海胰腺疾病研究所胃肠病学系,昌伊医院;国家主要的免疫与炎症实验室,海军医科大学,200433年上海,中国。3。上海医院医学院上海癌症研究所,上海乔汤大学,200030年上海上海。 4。 中国医学科学研究所,澳门,SAR SAR 999078 Taipa MACAU,中国医学研究所的国家主要研究实验室5. 福丹大学中山医院临床科学研究所,200032年上海,中国6。 上海第十人医院病理学系,隶属于汤吉大学,200072年上海,中国上海。 7。 肠道微环境治疗中心,上海第十人医院隶属于汤吉大学,200072年上海上海。 8。 上海第十人医院儿科,隶属于汤吉大学,200072年上海,中国上海。 9。 中央医学中央实验室科学与技术创新公园,上海第十人医院隶属于汤吉大学,200435年上海,中国上海。 10。 Hainan大学生命科学学院,中国Haikou 570228。上海医院医学院上海癌症研究所,上海乔汤大学,200030年上海上海。4。中国医学科学研究所,澳门,SAR SAR 999078 Taipa MACAU,中国医学研究所的国家主要研究实验室5.福丹大学中山医院临床科学研究所,200032年上海,中国6。上海第十人医院病理学系,隶属于汤吉大学,200072年上海,中国上海。 7。 肠道微环境治疗中心,上海第十人医院隶属于汤吉大学,200072年上海上海。 8。 上海第十人医院儿科,隶属于汤吉大学,200072年上海,中国上海。 9。 中央医学中央实验室科学与技术创新公园,上海第十人医院隶属于汤吉大学,200435年上海,中国上海。 10。 Hainan大学生命科学学院,中国Haikou 570228。上海第十人医院病理学系,隶属于汤吉大学,200072年上海,中国上海。7。肠道微环境治疗中心,上海第十人医院隶属于汤吉大学,200072年上海上海。8。上海第十人医院儿科,隶属于汤吉大学,200072年上海,中国上海。9。中央医学中央实验室科学与技术创新公园,上海第十人医院隶属于汤吉大学,200435年上海,中国上海。10。Hainan大学生命科学学院,中国Haikou 570228。Hainan大学生命科学学院,中国Haikou 570228。
摘要 简介 1 型糖尿病 (T1D) 是一种由胰腺 β 细胞破坏引起的自身免疫介导疾病。虽然患 T1D 具有潜在的遗传易感性,但其诱因是多因素的,可能包括环境因素。肠道微生物群已被确定为其中一个因素。先前的研究表明,T1D 患者的微生物群与健康对照组存在差异。本研究旨在描述临床 T1D 或 3 期 T1D 诊断的第一年微生物群和代谢组的演变,并研究患有和不患有糖尿病酮症酸中毒的儿童的微生物群和代谢组是否存在差异。该研究还将探索微生物群、代谢组、血糖控制和 β 细胞储备之间的可能关联。方法与分析 这项前瞻性队列研究将纳入新诊断为 1 型糖尿病的儿童和兄弟姐妹对照(n=100,男性和女性),并使用散弹枪宏基因组测序在诊断第一年的多个时间点对他们的粪便微生物组进行表征。我们将根据健康对照者粪便样本的培养组学研究建立微生物培养生物库,以支持未来的研究。代谢组学分析旨在确定可能与疾病表现和进展有关的其他生物标志物。通过这项初步探索性研究,我们旨在确定可在 1 型糖尿病进展各个阶段用作未来干预目标的特定微生物标志物。 伦理与传播 本研究已获科克教学医院临床研究伦理委员会批准。研究结果将提供给 1 型糖尿病患者及其家人、护理人员、支持网络和微生物组协会以及其他研究人员。 试验注册号 此试验的 clinicaltrials.gov 注册号为 NCT06157736。
。cc-by 4.0国际许可(未经Peer Review尚未获得认证)是作者/资助者,他已授予Biorxiv的许可证,以永久显示预印本。它是此预印本版本的版权持有人,该版本发布于2025年1月29日。 https://doi.org/10.1101/2025.01.28.635365 doi:biorxiv preprint