ETS 转录因子是一个蛋白质家族,由一组在从后生动物到人类的进化过程中保守的基因编码 [1,2]。迄今为止,已在脊椎动物中描述了该家族的 28 个成员,分为 12 组 [3]。这些转录因子的特点是具有一个高度保守的有翼螺旋-转角-螺旋 DNA 结合域 (DBD),该域可识别位于靶基因启动子中的具有中央 5′-GGA(A/T)-3′ 核心的特定 DNA 元素,称为 ETS 结合位点 (EBS)。尽管所有 ETS 家族成员都共享相同的 DBD,但每个 ETS 转录因子都有自己的 DNA 结合特性,这些特性受到严格控制以确保特定的生物学作用。具体而言,ETS 转录因子的 DNA 结合特性可通过以下方式彼此区分:(i) EBS 序列识别的细微差异 [4]、(ii) 与不同结合伙伴的特异性相互作用,或 (iii) 调节其对 DNA 亲和力的差异性翻译后修饰 [3]。尽管如此,ETS 转录因子在许多细胞类型(例如造血细胞、乳腺和前列腺组织)中广泛共表达,并且这些细胞中每种因子的生物学特异性仍不清楚 [3]。
如果将抑制剂化合物溶于水中,则使化合物的溶液比1倍测定缓冲液中的最终浓度高5倍(因为您将在25 µL反应中添加5 µL)。然后,从该溶液到您首选的浓度中的1倍测定缓冲液中进行一系列稀释液。如果将抑制剂化合物溶解在DMSO中,则比您要在DMSO中测试的最高浓度高100倍。然后在1倍测定缓冲液中进行20倍稀释(在此步骤中,化合物浓度比最终浓度高5倍,而DMSO浓度为5%)。然后,从该溶液到您首选的浓度中的5%DMSO中的5%的DMSO稀释。由于将5 µL的化合物溶液添加到25 µL反应中,因此所有反应中DMSO的最终浓度均为1%。3。准备DNA pol theta溶液。
批次 数量 描述 2811329 0.25 kU EquiPhi29 DNA 聚合酶 250 U 2759725 0.25 mL 0.1 M DTT 2809236 0.25 mL 10X EquiPhi29 DNA 聚合酶缓冲液
1。Forward primers: These primers bind to the 5' end of the target DNA sequence and are used to initiate DNA synthesis.2。Reverse primers: These primers bind to the 3' end of the target DNA sequence and are used to initiate DNA synthesis in the reverse direction.3。嵌套引物:这些引物用于嵌套的PCR反应,其中第二组引物用于放大初始PCR产物内的较小区域。4。退化引物:这些引物包含退化碱基,它们是可以与靶DNA序列中多个碱基结合的核苷酸。5。分子信标:这些引物旨在与特定序列结合并在结合后经历构象变化,可以使用荧光检测到。
TAQ DNA聚合酶是一种衍生自含水型菌群的重组DNA聚合物的DNA。其分子量为94 kDa。TAQ DNA聚合酶可以将靶DNA扩大到5KB(简单模具)。扩展速度为0.9〜1.2kb/min(70〜75 o C)。它具有5'至3'的活性,没有3'活性到5'外切酶,而没有导致含有3'-da末端的PCR产物。
摘要:背景:使用基因组数据,我们确定了MRSA ST398分离株的起源,该分离物是无知的牲畜接触患者的侵入性感染。方法:我们使用Illumina Technique测序了2013年至2017年之间具有侵入性感染患者的七个MSSA和四种MRSA ST398分离株的基因组。预言相关的毒力基因和耐药基因。为了确定分离株的起源,其基因组序列被包括在系统发育分析中,还包括NCBI上可用的ST398基因组。结果:所有分离株都带有ϕ SA3预言,但是免疫逃避簇的变化:MRSA分离株中的C型,MSSA分离株中的B型B型。所有MSSA都属于SPA Type T1451。MRSA菌株具有相同的SCC MEC类型IVA(2B)盒式盒子,属于SPA型T899,T4132,T1939和T2922。所有MRSA都携带四环素抗性基因TET(M)。系统发育分析表明,MSSA分离株属于人类相关的分离株,而MRSA分离株属于含有牲畜相关的MRSA的簇。结论:我们表明临床分离株MRSA和MSSA ST398具有不同的起源。通过牲畜相关的MRSA分离株对毒力基因的获取使它们能够在人类中诱导侵袭性感染。
ID号 5200100帽颜色红色含量2 x 1.25 ml密钥特征TAQ DNA聚合酶2X主混合物是一种现成的2X反应混合物,与AmpliQON TAQ DNA聚合酶,NH 4 +缓冲液系统,DNTPS,DNTPS和氯化镁存在。 每个反应需要25 µL 2倍主混合物。 只需将底漆,模板和水添加到50 µL的总反应量中,即可成功执行底漆延伸和其他分子生物学应用。 TAQ DNA聚合酶2X主混合物提供了几个优点。 设置时间大大减少。 消除了污染组件股票的机会。 减少试剂处理步骤可更好地可重复性。 可以信心设置标准测试,即结果每次都会保持一致。 TAQ DNA聚合酶2x主混合物(1.5 mm MGCL 2最终浓度)的组成Tris-HCl pH 8.5,(NH 4)2 S0 4,3 mm mgcl 2,0.2%tween。ID号5200100帽颜色红色含量2 x 1.25 ml密钥特征TAQ DNA聚合酶2X主混合物是一种现成的2X反应混合物,与AmpliQON TAQ DNA聚合酶,NH 4 +缓冲液系统,DNTPS,DNTPS和氯化镁存在。每个反应需要25 µL 2倍主混合物。只需将底漆,模板和水添加到50 µL的总反应量中,即可成功执行底漆延伸和其他分子生物学应用。TAQ DNA聚合酶2X主混合物提供了几个优点。设置时间大大减少。消除了污染组件股票的机会。减少试剂处理步骤可更好地可重复性。可以信心设置标准测试,即结果每次都会保持一致。TAQ DNA聚合酶2x主混合物(1.5 mm MGCL 2最终浓度)的组成Tris-HCl pH 8.5,(NH 4)2 S0 4,3 mm mgcl 2,0.2%tween。
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重组腺相关病毒(RAAV)是通常用于基因治疗的病毒载体。残留的宿主细胞DNA是一种与感染和致癌性风险有关的杂质。因此,需要对其进行监控以进行质量控制。我们旨在开发针对18S核糖体RNA(RRNA)基因的液滴数字聚合酶链反应(DDPCR)方法,以定量残留宿主细胞DNA。使用两组共享C-末端的启动对确定18S rRNA基因的拷贝数。对于将18S rRNA基因的拷贝数转化为基因组DNA的质量浓度,HEK293基因组DNA中18S rRNA基因的准确拷贝数通过与三个参考基因的拷贝数(EIF5B,DCK和HBB的拷贝数进行比较)确定。结果表明,回收了88.6–97.9.9%的HEK293基因组DNA,被回收到RAAV制剂中。将基于DDPCR的分析应用于RAAV制剂,以定量残留的宿主细胞DNA作为杂质。我们的发现表明该测定可用于RAAV产品中残留宿主细胞DNA的定量和尺寸分布。