™DNA多样本Ultra 2.0套件是开发出可从多种样品矩阵的高质量DNA快速纯化的。DNA可以在下游应用的广泛分子生物学中使用,例如测序,基因分型和qPCR。该协议通过使用翠鸟自动隔离DNA自动隔离
内容数量/容量储存温度蛋白酶 250µl -20°C 蛋白酶缓冲液 5ml RT 裂解缓冲液 20ml RT 沉淀缓冲液 15ml RT 洗涤缓冲液 2×50ml RT 溶剂缓冲液 2×1250µl RT 描述易于使用的 DNP TM 试剂盒用于从人或动物来源中分离双链 DNA。该过程需要 35-55 分钟,不需要在过程中进行苯酚提取或换管。DNA 分离基于细胞裂解和随后的选择性 DNA 沉淀。最后,用洗涤缓冲液洗涤和脱盐不溶性 DNA。通过这种方法获得的 DNA 可用于所有分子生物学程序(PCR、限制性消化、克隆、Southern 印迹、DNA 测序等)。
提交日期:2023 年 11 月 13 日 修订日期:2024 年 4 月 6 日 接受日期:2024 年 6 月 22 日 摘要 聚合酶链式反应 (PCR) 是提高检测真菌感染(例如由黑曲霉引起的感染)灵敏度的重要技术。纯 DNA 和 DNA 分离技术的可用性是实施 PCR 的重要因素。本研究旨在比较使用基于过滤器的试剂盒方法和冷却分离黑曲霉 DNA 的质量和数量。实验研究设计使用琼脂糖凝胶电泳 (1.5%) 对 DNA 分离物进行定性测试,使用紫外可见分光光度计 (波长为 260 nm 和 280 nm) 进行定量 DNA 测试。数据分析比较了两种方法分离的 DNA 的定性和定量结果。结果表明,两种分离方法中都存在 DNA 带,基于过滤器的试剂盒方法中的带较粗使用基于过滤器的试剂盒分离后的 DNA 平均浓度 (6,478 ng/μl) 高于冷却方法 (5,994 ng/μl)。基于过滤器的试剂盒中的 DNA 纯度 (1.7) 也高于冷却方法 (1.1)。基于过滤器的试剂盒方法含有支持成功分离 DNA 的化学成分。可以得出结论,基于过滤器的试剂盒方法比冷却方法产生的黑曲霉 DNA 分离物质量更好、数量更多。这些发现意味着基于过滤器的试剂盒可能是实验室应用中分离黑曲霉 DNA 的更好选择。关键词:黑曲霉;冷却方法;基于过滤器的试剂盒 1. 简介
方法:将CHO衍生的DNA(10 fg至1 ng)刺激到panc-1细胞的培养上清液中,并使用该试剂盒提取DNA。qPCR,并测量CQ值。单独进行qPCR,以用CHO衍生的DNA尖峰而无DNA提取,并测量了CQ值。这被用作标准条件。在标准条件下制备了校准曲线,并计算了DNA回收率。
管式试剂盒设计用于中低通量(少于 8 个样本)。它可根据制备次数进行调整,有助于有效节省试剂。板式试剂盒可提取 16 个样本,每次提取使用六个连续的孔。这六个孔水平排列,每个孔都装有用于提取过程的特定试剂。这两种试剂盒可以与相同的硬件一起使用,从而允许用户根据样本的要求在两种方法之间切换。第 1(第 7)个孔含有裂解缓冲液,它可以破坏细胞膜并通过磁珠结合目标 DNA 和 RNA。在开始提取时,存储在第 4(第 10)个孔中的磁珠会被移至第 1(第 7)个孔。第 2、第 3、第 4、第 6(第 8、第 9、第 10、第 12)个孔含有洗涤缓冲液,以去除不需要的细胞成分和缓冲液。洗脱缓冲液位于第 5 个(第 11 个)孔中,有助于核酸分子从磁珠中溶解。
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我们强烈建议您在使用靶向特异性多向导 sgRNA 之前,先使用特定细胞类型的阳性对照优化转染条件。为了优化人类细胞系的条件,EditCo 提供了转染优化试剂盒,其中包含靶向人类 TRAC 的阳性对照多向导 sgRNA。对于小鼠细胞系,我们建议使用靶向小鼠 Rosa26 的阳性对照单向导 sgRNA 来优化您的条件(请参阅第 2 页所需的其他材料)。我们建议为您的基因组编辑实验形成核糖核蛋白 (RNP) 复合物,以最大限度地提高编辑效率并减少脱靶效应。选择 EditCo 的电穿孔、脂质转染或核转染方案与此试剂盒一起使用。所有方案均可在 editco.com/resources 上找到。
RNA 样本要求:RNA 样本应不含盐(例如 Mg 2+ 或胍盐、二价阳离子螯合剂(例如 EDTA 或 EGTA)或有机物(例如苯酚或乙醇)。RNA 必须不含 DNA。gDNA 是 RNA 制备中的常见污染物。它可能来自有机提取的中间相,或者当固相 RNA 纯化方法的二氧化硅基质超载时。如果总 RNA 样本可能含有 gDNA 污染,则用 DNase I 处理样本以去除所有痕迹的 DNA(此试剂盒中不提供 DNase)。用 DNase I 处理后,应从样本中去除酶。DNase I 的任何残留活性都可能降解富集所需的寡核苷酸。可以使用苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀从提取物中去除 DNase I。
NEXTFLEX® Rapid DNA-Seq Kit 2.0 专为约 3 小时构建 DNA 文库而设计,包含 1 ng – 1 µg 碎片 DNA。此试剂盒不推荐用于 FFPE 样本。该试剂盒可用于使用 Illumina® 和 Element® 平台为单端或双端测序准备多路复用文库。此外,多达 1536 个独特适配器条形码的可用性有助于实现高通量应用。如果执行定量测序应用(如检测低频变异或罕见体细胞突变),请考虑使用我们的 NEXTFLEX® UDI-UMI 条形码。
• 高性能:从琼脂糖凝胶中提取和纯化 DNA 时,可获得高产量(高达 5 μg)和高纯度,同时能够去除污染物和残留盐。• 高浓度:以非常小的体积洗脱,仅需 5 μl 即可洗脱,从而获得高度浓缩的 DNA。• 节省时间:仅需 10 分钟的旋转和孵育时间的简短协议即可完成工作流程。• 独特的柱设计:旋转柱采用独特设计,能够以少量洗脱,并最大限度地减少缓冲液保留和污染物携带。• 优化的缓冲液:缓冲系统经过优化,无需调整 pH 值或添加异丙醇。• 应用兼容性:纯化的 DNA 可用于下游分子应用,例如限制性消化、DNA 测序、连接、扩增和其他酶促反应。