番茄既是一种重要的粮食作物,也是用于各种研究(包括了解基因功能)的模型植物。转化通常与番茄的所有广泛遗传和基因组资源相结合,以促进这些研究。我们实验室常用的转化方案已应用于许多不同的番茄基因型,并依赖于农杆菌对幼子叶切片的感染。我们使用载体系统进行过度表达,使用 RNA 干扰进行基因沉默,使用 CRISPR/Cas9 进行基因组编辑。用于设计基因构建体的载体包含可选择的标记基因,这些基因赋予对卡那霉素、潮霉素和除草剂成分双丙氨膦的抗性。本章详细介绍了我们遵循的农杆菌介导的番茄栽培和野生品种转化方案。
。cc-by-nc-nd 4.0国际许可证(未获得同行评审证书)获得的是作者/资助者,他已授予Biorxiv授予Biorxiv的许可,以永久显示预印本。这是该版本的版权所有,该版本发布于2024年6月23日。 https://doi.org/10.1101/2024.06.21.600065 doi:Biorxiv Preprint
使用含有 pCAMBIA 1301 载体的农杆菌菌株 AglI 感染新鲜芦荟外植体,以验证 GUS 基因的瞬时表达。与农杆菌共培养后,在进行外植体 GUS 组织化学染色的外植体上观察到几个明显的蓝点(图 5)。该载体在 GUS 基因中有一个内含子,确保其仅在转化组织中活跃表达,消除了假阳性的可能性。通过 GUS 组织化学染色评估了不同芦荟外植体在不同物理参数下的再生潜力和转化效率。在组 I 和组 II 中分别发现瞬时表达率为 91.3% 和 28.6%。芦荟茎(芽基部)表现出最大的再生潜力
我们能否找到更有用、发展更灵活的系统?Jouanin 团队(法国国家农业科学研究院)鉴定了一种 shooty Agro 菌株,并在 20 世纪 90 年代利用它进行植物再生
序列 MDPKAEGNGENITETAAGNVETSDFVNLKRQKREGVNSTGMSEIDMTGSQET PEHNMHGSPTHTDDLGPRLDADMLDSQSSHVSSSAQGNRSEVENELSNLFA KMALPGHDRRTDEYILVRQTGQDKFAGTTKCNLDHLPTKAEFNASCRLYRDG VGNYYPPPLAFERIDIPEQLAAQLHNLEPREQSKQCFQYKLEVWNRAHAEMGI TGTDIFYQTDKNIKLDRNYKLRPEDRYIQTEKYGRREIQKRYEHQFQAGSLLPD ILIKTPQNDIHFSYRFAGDAYANKRFEEFERAIKTKYGSDTEIKLKSKSGIMHDS KYLESWERGSADIRFAEFAGENRAHNKQFPAATVNMGRQPDGQGGMTRDR HVSVDYLLQNLPNSPWTQALKEGKLWDRVQVLARDGNRYMSPSRLEYSDPE HFTQLMDQVGLPVSMGRQSHANSVKFEQFDRQAAVIVADGPNLREVPDLSPE KLQQLSQKDVLIADRNEKGQRTGTYTNVVEYERLMMKLPSDAAQLLAEPSDRYSRAFVRPEPALPPISDSRRTYESRPRGPTVNSL
• 文献中有许多名称 - 包括“形态发生基因” • DEV 基因 = 任何其表达有助于促进转基因或基因编辑组织的转化或再生 (TR) 的基因 • 源自发育和病理学基础研究的基因 • 但由于 TR 的一部分的激进干预,使用通常会大大偏离自然角色 • 这些包括……
摘要:在巴基斯坦,棉花作物占国内生产总值的 23%,其大量出口为贸易业务提供了 60% 的总利润。不幸的是,双子病毒以惊人的速度摧毁了棉花作物。现在,CLCuV 导致棉花作物发生棉花卷叶病毒病并降低其产量。这种病毒对棉花植物的攻击给巴基斯坦造成了 50 亿美元的损失。在这方面,使用了一些传统方法,如植物育种和特定的 RNA 编辑。同时,生物技术引入了一些非常有吸引力的技术,这些技术具有根除这种疾病的巨大潜力。这些技术包括 ZFN、TALEN 和 CRISPR/Cas9。在我的研究中,采用 CRISPR 方法是因为其具有出色的位点特异性诱变效率。不同 CLCuV 的 rep 基因的保守位置被确定为靶位点。这些特定位点为 3 个 gRNA 的建立提供了信息。克隆了具有多个引导RNA和1Cas9的单一表达载体pHSE-401。使用了特定的棉花品种coker-312。通过切除棉花植株的下胚轴并通过农杆菌EHA-105菌株进行传递感染来进行载体的转化。然后,将1000个感染性下胚轴转移到具有各自抗生素的MSB上,然后转移到将下胚轴边缘转化为愈伤组织的再生培养基上。仅获得两个转基因愈伤组织,转基因愈伤组织的百分比为0.02%,通过PCR筛选并在凝胶上进行电泳。200bp的条带证实了棉花愈伤组织中存在CRISPR/Cas9构建体。关键词:CRISPR/Cas9,多重载体,3gRNA和Cas9,农杆菌,转化,愈伤组织。版权所有 © 2020 作者:这是一篇开放获取的文章,根据知识共享署名 4.0 国际许可(CC BY-NC 4.0)分发,允许在任何媒体中无限制地使用、分发和复制,用于非商业用途,前提是注明原作者和出处。 1. 引言 巴基斯坦的经济主要依靠农业部门。其在 GDP 中的百分比为 19.82%,但农业部门的参与度从 1950 年的 50% 下降到 2014 年的 21% 左右。农产品、林业劳动力、牲畜养殖和农作物转化所赚取的收入养活了巴基斯坦 64% 的乡村人口。据统计,66% 的巴基斯坦人在农业部门就业。在 20 世纪的十年里,农产品的年增长率为 2.5%。在 1997 年的农业一揽子计划中,农作物产量增长了 5.9%。为了提高农业生产力,年产量从 2010 年的 0.2% 增加到 2015 年的 2.9%(匿名,2014-2015 年)。
农杆菌是一种杆状土壤细菌,以其将肿瘤诱导质粒 (Ti 质粒) 片段转移到植物细胞的独特能力而闻名。这种机制已广泛应用于植物基因工程。本综述深入探讨了农杆菌与植物细胞之间复杂的生物相互作用,包括细菌附着、毒力 (Vir) 基因的激活、T 复合物的产生和运输以及 T-DNA 整合到植物染色体中的关键步骤。此外,本综述还研究了农杆菌作为转化工具的工程化,重点研究了 Ti 质粒的修饰以创建二元和共整合载体系统,这大大提高了转化方案的效率和多功能性。本文还重点介绍了农杆菌介导的转化在可食用疫苗生产中的应用。通过详细研究农杆菌介导转化的生物学、技术和实践方面,本综述旨在为优化该技术以用于各种植物生物技术应用提供见解。最终,了解和改进农杆菌介导转化对于推进植物生物技术至关重要。
ORCID ID:0000-0003-1641-6310(SR)、0000-0002-0246-9318(MK); 0000-0002-8407-7413(EVL); 0000-0003-2285-5782(GC); 0000-0001-8787-7347(南非); 0000-0003-4263-3407(DH); 0000-0003-0603-7755(HI); 0000-0003-4711-5131(MVM); 0000-0002-6330-4744(李); 0000-0002-2185-5724(JW); 0000-0002-5408-492X(TBJ); 0000-0002-9349-5086(BDC); 0000-0002-0221-9052(LP)
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