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![植物生物技术 37: 20.0404b (2020) [adv.pub.]](/simg/7\79f64403bd75f8328112fa08a0b4888c68c1ea25.webp)
植物生物技术 37: 20.0404b (2020) [adv.pub.]
摘要 利用 CRISPR/Cas9 进行基因组编辑对普通小麦非常有用，因为普通小麦具有异源六倍体的特性，并且可以同时在三个同源基因中诱发突变。虽然农杆菌介导的转化在基因组编辑方面具有优势，但它在小麦中仍然效率低下且需要相对较长的时间。因此，使用具有高效体内诱变功能的向导 RNA (gRNA) 是在短时间内产生基因组编辑突变系的关键因素之一。在本研究中，我们针对普通小麦中的三个基因，建立了一种快速检测由基因枪瞬时表达系统诱导的突变的方法。在未成熟的小麦胚中实现了 gRNA 和 Cas9 的基因枪瞬时表达。一周后使用 PCR-RFLP 检测到突变，并通过基因组克隆测序进行验证。我们确认了几种类型的突变，这些突变的发生率取决于靶序列。此外，在农杆菌转化的植物中，以较高速率编辑的靶标处的突变频率往往更高。这些结果表明，这种快速检测编辑突变的方法可用于多种应用，例如筛选目标序列或修饰载体以实现小麦中有效的 CRISPR/Cas9 基因组编辑。
用于卵巢孢子的有效农杆菌介导的遗传转化方法。胚胎愈伤组织
摘要：证明是卵巢Betaceum（tamarillo）中的体细胞胚发生，因为可以从不同的epplants中诱导胚胎胜任的细胞系，因此可以从不同的植物中诱导胚胎胜任的细胞系，这是研究形态发生的有效模型系统。然而，尚未针对该物种实施胚胎愈伤组织（EC）的有效遗传转化系统。在这里，描述了使用tumefaciens的遗传转化的优化较快的遗传转化方案。确定了EC对三种抗生素的敏感性，卡纳米霉素被证明是tamarillo愈伤组织的最佳选择剂。两种农杆菌菌株EHA105和LBA4404都带有p35sgusint质粒，含有β-葡萄糖醛酸酶的记者基因（GUS）和标记基因neomycin phosycin phossforsfransferase（NPTIII），用于测试该过程。采用了基于抗生素耐药性的遗传转化，冷震处理，椰子水，聚乙烯基吡咯烷酮和适当的选择时间表的成功。通过GUS分析和基于PCR的技术评估了遗传转化，并在耐卡那霉素的EC团中确定了100％的效率。用EHA105菌株遗传转化导致基因组中GUS插入的值更高。 提供的协议为功能基因分析和生物技术方法提供了有用的工具。遗传转化导致基因组中GUS插入的值更高。提供的协议为功能基因分析和生物技术方法提供了有用的工具。
使用BT Cry2a基因和印度品种Arka Vikas 的遗传转化使用BT Cry2a基因和印度品种Arka Vikas
南印度品种Arka Vikas的转基因番茄植物是使用农杆菌菌株EHA 105开发的，该菌株具有bt Cry2a基因，其中包含35S CAMV启动子，OCS终止剂和NPTII -NEPTI -NEPTI -NOPTII -abledable Marker，通过Agrobacterium Medimed -MediDied Transformation。进行了这项研究是为了改善南印度品种Arka Vikas的再生和转化方案。下胚基被用作由于较高的再生效率，通过PCR分子分析t 0生成中的推定转化体，用于t 0生成中的分子分析，并进行了定性ELISA方法，以用于BT蛋白表达，然后进行昆虫生物测定。昆虫生物测定研究，以筛选植物，并在后代进一步携带了用分子和表型特征表达良好耐药性的植物。实验结果得出的结论是，BT基因成功地部署在番茄品种中，并在实验室条件下对Helicoverpa Armigera的新生儿幼虫产生了抗性。这些结果表明转基因线在Helicoverpa Armigera的管理中有效地表达了大量的BT Cry2a蛋白。转基因T 1系的精确筛选对于获得单拷贝数植物非常重要，因为连续一代中BT蛋白的表达促进了将来该害虫的有效管理。
农杆菌介导的转化效率和...
摘要 四十年来，植物转化与再生技术不断发展。在水稻（Oryza sativa L.）中，农杆菌介导的转化方法利用成熟种子和未成熟胚在粳稻和一些籼稻品种中具有较高的转化效率。然而，这些方法在2010年以来华南地区开发的最新籼稻品种中转化效率较低。在本文中，我们通过基于CRISPR/Cas的基因组编辑和传统的过表达转化探索了优质高产籼稻品种南桂占（NGZ）的植物培养再生。我们以成熟种子和基因谷粒大小和数量1（GSN1）为例，比较了该品种与其他四个广泛使用的籼稻品种和一个粳稻品种的转化效率。我们观察到不同品种中过表达系的谷粒大小普遍较小，而基因编辑系的谷粒大小较大。 NGZ 表型使其成为研究基因功能的极佳模型。我们还研究了愈伤组织中单核苷酸多态性 (SNP) 的分布和再生相关基因的表达水平差异，可能揭示了 NGZ 在农杆菌介导转化中的优势来源。这些结果为 NGZ 在与谷物改良相关的基因编辑和过表达转化中的高级应用提供了启示，为“水稻育种 4.0 时代”做出了贡献。
个人简历 Madhusudhana Reddy Janga 农作物非生物胁迫耐受性基因组学研究所 (IGCAST) 助理教授
• 5325 转基因与植物细胞遗传学，德克萨斯理工大学。“染色体和基因组织、DNA 结构和复制” • PLNT_SCI_4550/7550，植物生物技术，密苏里大学。“植物组织培养和转化方法” • 植物生物技术 (AGRO/BIOTC 460)：宾夕法尼亚州立大学。“植物组织培养和转化方法”。• 高级植物遗传学 (2021FS BIO_SC 8300)：跨学科植物组 (IPG)，密苏里大学。“农杆菌介导的植物转化” • 高级植物遗传学 (2020FS BIO_SC 8300)：跨学科植物组 (IPG)，密苏里大学。“农杆菌介导的植物转化” • 高级分子遗传学 (NRE-763)，阿拉巴马农工大学生物与环境科学系 (BES)。(高级基因组工具和 NGS 技术在植物遗传学中的应用、分子工具：通过 RNAi 和基因组编辑技术进行基因沉默、植物转化技术、转基因植物：对非生物和生物胁迫的抗性、转基因植物的发展和放松管制) • 人类疾病遗传学 (CPHD-725)，南达科他大学桑福德医学院。(孟德尔疾病：显性和隐性疾病及案例示例) 研究资金 年份 状态 机构 角色 总资金 我的部分 2023 待定 USDA-ARS，Scab 计划
植物生物技术 37(2)
摘要 使用位点特异性核酸酶（例如转录激活因子样效应核酸酶 (TALEN) 和成簇的规律间隔短回文重复序列-CRISPR 相关蛋白 9 (CRISPR-Cas9)）进行基因组编辑是一种强大的作物育种技术。对于植物基因组编辑，基因组编辑试剂通常在植物细胞中从基因组内稳定整合的转基因中表达。这需要杂交过程从基因组中去除外来核苷酸以产生无效分离子。然而，在马铃薯等高度杂合的植物中，子代品系与亲本品种具有不同的农艺性状，不一定成为优良品系。农杆菌可以将 T-DNA 上的外源基因转移到植物细胞中。这既可用于稳定转化植物，也可用于在植物细胞中瞬时表达基因。在这里，我们用含有靶向固醇侧链还原酶 2 ( SSR2 ) 基因的 TALEN 表达载体的农杆菌感染马铃薯，并在没有选择的情况下再生了芽。我们获得了具有破坏的 SSR2 基因且没有转基因 TALEN 基因的再生系，这表明它们的破坏应该是由瞬时基因表达引起的。这里开发的使用农杆菌瞬时基因表达的策略（我们称之为农杆菌诱变）应该会加速使用基因组编辑技术来修改杂合植物基因组。
引言根际细菌对商业重要作物的植物生长和生产力的积极影响通常称为
INTRODUCTION Rhizosphere bacteria that positively influence plant growth and productivity of commercially important crops are commonly referred to as Plant Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) and include bacteria of the genera Azotobacter, Azospirillum , Arthrobacter, Bacillus, Agrobacterium, Rhizobium, Flavobacterium, Burkholderia, Enterobacter,克莱伯斯ella，假单胞菌，xanthomonas和serratia。根渗出液的分泌有助于调节微生物动力学及其与植物的相互作用，进而在促进植物生长中起着重要作用。此外，根际中的这种共生相关性还赋予对由真菌，细菌和病毒病原体引起的各种疾病的保护。这些细菌直接通过使用刺激性生长素和细菌的组合或通过刺激性生长素和细菌的形式组成的刺激性的生长素，gibberellins和componial compan和compoa，并通过刺激性的生产力和细菌来通过刺激性的生长蛋白和胞质的组合来直接影响植物的生长和分泌。 N.I.K.al-Barhawee和F.A.al-Wazzan。2025。从新分子表征的根瘤菌菌株中产生吲哚-3-乙酸的估计。农业科学全球创新杂志13：85-94。[2024年9月2日收到； 2024年10月6日接受；出版于2025年1月1日]
生化技术 26 重组 DNA 技术
克隆载体是一种能够在宿主生物体内复制的 DNA 分子。将目标 DNA 引入该载体以产生重组 DNA 分子。大肠杆菌作为宿主生物，使用多种克隆载体。有时，需要使用不同的宿主进行克隆实验。因此，已经开发了基于其他细菌（如芽孢杆菌、假单胞菌、农杆菌等）和不同真核生物（如酵母和其他真菌）的各种克隆载体。不同类型的 DNA 分子可用作克隆载体，例如它们可能是质粒、噬菌体、粘粒、噬菌粒或人工染色体