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回到未来：对农业形态学基因的利他使用来帮助植物种类的转化
•文献中的许多名称 - 包括“形态学基因”•Dev Gene =任何表达在促进转基因或基因编辑组织的转化或再生（TR）中都有用的基因•从发展和病理学的基本研究中得出的基因•但经常由于自然作用而经常偏离自然作用，因为这些干预措施的一部分是Try的一部分。
新的整合载体可增加农杆菌的转化并有助于表征大豆 GmTML 基因家族成员的作用
。CC-BY-NC-ND 4.0 国际许可，根据 提供（未经同行评审认证）是作者/资助者，他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2024 年 7 月 26 日发布。；https://doi.org/10.1101/2024.07.25.605222 doi：bioRxiv 预印本
优化农杆菌介导的大豆毛状根体外和体外转化，以便使用可视化方法筛选转化子
体外和体外农杆菌介导的毛状根转化 (HRT) 测定是植物生物技术和功能基因组学工具包的关键组成部分。在本报告中，使用 RUBY 报告基因优化了大豆的体外和体外 HRT。评估了不同的参数，包括农杆菌菌株、细菌细胞培养物的光密度 (OD 600 )、共培养基、大豆基因型、外植体年龄以及乙酰丁香酮的添加和浓度。总体而言，就毛状根和转化根（表达 RUBY ）的诱导百分比而言，体外测定比体外测定更有效。尽管如此，体外技术被认为更快且方法更简单。在 cv 的 7 天大子叶上观察到了 RUBY 的最高转化。 Bert 用 R1000 接种 30 分钟，R1000 悬浮在 ¼ B5 培养基中，OD 为 600 (0.3)，乙酰丁香酮含量为 150 µM。该测定的参数还通过两步体外毛状根转化获得了最高百分比的 RUBY。最后，使用基于机器学习的建模，进一步确定了两种测定的最佳方案。本研究建立了适用于大豆功能研究的高效可靠的毛状根转化方案。
通过单农杆菌系统简化植物基因沉默和基因组编辑物流，同时递送多部分病毒载体
图 1 JoinTRV 的设计，这是一种基于具有兼容来源的微型 T-DNA 载体的 TRV 表达系统。(A) 烟草脆裂病毒 (TRV) 的基因组组织。(B) TRV RNA2 工程用于序列克隆和表达。pLX-TRV2 的克隆盒图与 Bsa I 识别位点和 Bsa I 产生的突出端一起显示（底部）。LacZ 报告基因允许可视化选择重组载体；插入物的植物表达由豌豆早褐病毒 (PEBV) 外壳蛋白 (CP) 启动子驱动。(C) VIGS (pTRV2) 和 VIGE (pRNA2.PEBV) 中描述的 pLX-TRV2 和 TRV RNA2 载体的尺寸比较。(D) JoinTRV 系统图。两个 T-DNA 载体被多路复用到单个农杆菌细胞中，以同时递送 TRV 基因组成分。 pLX-TRV2 是 pLX-B2 衍生物，具有 pBBR1 来源和卡那霉素抗性基因 (npt I)，pLX-TRV1 是 pLX-Z4 衍生物，具有 RK2 来源和庆大霉素抗性基因 (aac C1)；由于这两个 T-DNA 载体具有兼容的来源和独立的抗生素选择机制，因此可以同时寄宿在同一细菌细胞中
新的基因组技术
Promoter 35s from the cauliflower mosaic virus (CAMV P35S) Promoter 35s from the leper mosaic virus (FMV P35S) Promoter NOS NOS from Agrobacterium Tumefaciens (PNOS) Terminator nose from AGROBACTERIUM Tumefaciens (tnos) Hygroscopicus Gen Barnase from Bacillus Amyloliquefaciens Gen EPSPS from Agrobacterium Tumefaciens, Szczep CP4 Gen GOX with Ochrobactrum Anthropi Gen Pat from Streptomyces Viridochromogenes NPTII gene from Escherichia coli Gen Cry1AB/AC Construct Promoter 35s from the Cauliflower mosaic病毒/Gen PAT与链霉菌的病毒蛋白色，CAMV p35s/pat）构造CTP2-CP4 EPSPPNOS/NPTIA构建体CAMV
密歇根州立大学
图：图1。PMSU2DR-02 T-DNA的线性图。 图2。 A。农杆菌根源菌株Arport1中PMSU2DR-02的圆形图。 B. tumefasciens菌株ATJGT105中PMSU2DR-02的圆形图。 图3。 PMSU2DR-02 T-DNA插入物的序列。 表列表：表1。 基因供体生物的分类分类表2。 pMSU2DR-02缩写和定义的DNA插入物的遗传元素：ARPORT1：含有gaantry基因在毒力质粒中堆叠所需的遗传成分的根状腺根源菌株。 直接用于植物转化。 cc-nb-lrr：N末端盘绕圈（CC）结构域，核苷酸结合位点（NB）和富含亮氨酸的重复序列（LRRS）EHA105：EHA105 tumefaciens菌株对土豆和其他植物的转基因作用有用。 gaantry：使用重组酶技术HS中的核酸转移基因组装HS：高度敏感的反应JGT105：Tumefaciens JGT105 Gaantry菌株，该菌株是tumefaciens eha105的衍生物，含有基因组成的群体。 直接用于植物转化。 LB: Left Border MOA: Mechanism of Action MSU: Michigan State University NCBI: National Center for Biotechnology Information NPTII: Neomycin phosphotransferase II ONT: Oxford Nanopore Technology ORF: Open Reading Frame PCR: Polymerase Chain Reaction PLRV: Potato Leaf Roll Virus PVY: Potato Virus Y R genes: Resistance genes RB: Right Border RSR: Regulatory Status Review T-DNA：转移DNAPMSU2DR-02 T-DNA的线性图。图2。A。农杆菌根源菌株Arport1中PMSU2DR-02的圆形图。B. tumefasciens菌株ATJGT105中PMSU2DR-02的圆形图。图3。PMSU2DR-02 T-DNA插入物的序列。表列表：表1。基因供体生物的分类分类表2。pMSU2DR-02缩写和定义的DNA插入物的遗传元素：ARPORT1：含有gaantry基因在毒力质粒中堆叠所需的遗传成分的根状腺根源菌株。直接用于植物转化。cc-nb-lrr：N末端盘绕圈（CC）结构域，核苷酸结合位点（NB）和富含亮氨酸的重复序列（LRRS）EHA105：EHA105 tumefaciens菌株对土豆和其他植物的转基因作用有用。gaantry：使用重组酶技术HS中的核酸转移基因组装HS：高度敏感的反应JGT105：Tumefaciens JGT105 Gaantry菌株，该菌株是tumefaciens eha105的衍生物，含有基因组成的群体。直接用于植物转化。LB: Left Border MOA: Mechanism of Action MSU: Michigan State University NCBI: National Center for Biotechnology Information NPTII: Neomycin phosphotransferase II ONT: Oxford Nanopore Technology ORF: Open Reading Frame PCR: Polymerase Chain Reaction PLRV: Potato Leaf Roll Virus PVY: Potato Virus Y R genes: Resistance genes RB: Right Border RSR: Regulatory Status Review T-DNA：转移DNA
Hofer的碱性中等 ezstain骨细胞染色套件 磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4，1x Hicrome™uti agar M-FC琼脂基础 M1245.pdf 葡萄糖肽琼脂 使用Himedia的MAG24平台 乳酸杆菌夫人（Agar Mrs Mrs），颗粒状 营养肉汤 盐水营养琼脂 酵母提取物agar 磷酸盐缓冲盐水，pH 7.2，10x
原理和解释农杆菌是导致植物肿瘤的细菌属。大多数农杆菌是植物病原体，其自然栖息地位于易感植物的根和地下茎周围（1）。农杆菌Tumefaciens是该属中最常见的物种。农杆菌以其在自身和植物之间转移DNA的能力而闻名，因此，它已成为基因工程改善植物的重要工具。如Subba Rao（4）所述， HOFERS碱性培养基的配制，用于生长农杆菌，同时抑制土壤中的根瘤菌。 它是一种具有高碱性pH的选择性培养基。 农杆菌在较高的pH下生长，而根瘤菌在碱性pH下生长。 培养基补充甘露醇作为碳水化合物或碳源。 酵母提取物提供氮营养素。 氯化钠保持培养基的渗透平衡。 磷酸二硫酸二硫酸盐缓冲培养基。 百里香蓝是pH指示剂，在高碱性pH值下保持蓝色。HOFERS碱性培养基的配制，用于生长农杆菌，同时抑制土壤中的根瘤菌。它是一种具有高碱性pH的选择性培养基。农杆菌在较高的pH下生长，而根瘤菌在碱性pH下生长。培养基补充甘露醇作为碳水化合物或碳源。酵母提取物提供氮营养素。氯化钠保持培养基的渗透平衡。磷酸二硫酸二硫酸盐缓冲培养基。百里香蓝是pH指示剂，在高碱性pH值下保持蓝色。
yem肉汤
yem肉汤预期用roth肉汤广泛用于农业杆菌和其他土壤微生物的培养。摘要农杆菌是革兰氏阴性细菌的属。农业属是非常异质的。农杆菌以其在自身和植物之间转移DNA的能力而闻名。农杆菌Tumefaciens是一种无处不在的土壤，负责造成冠状病的病原体，影响了许多较高的植物。yem琼脂还用于培养共生氮固定的微生物（如根瘤菌），使其适合于生产豆类接种剂。原理YEM肉汤，其中含有甘露醇作为碳源和酵母提取物，作为农杆菌的氮和生长因子的来源。它也可以固定氧化 - 在有利于根瘤菌的范围内培养基的降低潜力，并在呼吸过程中充当氢供体。甘露醇是可发酵的糖酒精来源。镁提供了对农杆菌生长必不可少的阳离子。配方 *成分G/L酵母提取物1.0甘露醇10.0磷酸磷酸二硫酸镁0.5硫酸镁0.2氯化钠0.1最终pH（在25°C下）7.0±0.2 *调整了以适应性能参数。储存和稳定存储在紧密闭合的容器和2°C-8°C下制备的培养基中脱水的培养基脱水。避免冷冻和过热。在标签上到期日之前使用。打开后，保持粉末状培养基闭合以避免补水。样品收集和处理确保所有样品都正确标记。指示按照确定的准则遵循适当的技术来处理样品。某些样品可能需要特殊处理，例如立即制冷或免受光的保护，遵循标准程序。样品必须在允许的持续时间内存储和测试。使用后，必须在丢弃前高压灭菌对受污染的材料进行消毒。
yem agar
yem琼脂打算使用yem琼脂被广泛用于农杆菌物种和其他土壤微生物的培养。摘要农杆菌是革兰氏阴性细菌的属。农业属是非常异质的。农杆菌以其在自身和植物之间转移DNA的能力而闻名。农杆菌Tumefaciens是一种无处不在的土壤，负责造成冠状病的病原体，影响了许多较高的植物。yem琼脂还用于培养共生氮固定的微生物（如根瘤菌），使其适合于生产豆类接种剂。YEM琼脂原理，其中含有甘露醇作为碳源和酵母提取物，作为农杆菌的氮和生长因子的来源。它也可以固定氧化 - 在有利于根瘤菌的范围内培养基的降低潜力，并在呼吸过程中充当氢供体。甘露醇是可发酵的糖酒精来源。镁提供了对农杆菌生长必不可少的阳离子。配方 *成分G/L酵母提取物1.0甘露醇10.0二磷酸氢磷酸盐0.5硫酸镁0.2氯化钠0.1琼脂0.1琼脂15.0最终pH（在25°C下）7.0±0.2 *调整为适合性能参数。储存和稳定存储在紧密闭合的容器和2°C-8°C下制备的培养基中脱水的培养基脱水。避免冷冻和过热。在标签上到期日之前使用。打开后，保持粉末状培养基闭合以避免补水。样品收集和处理确保所有样品都正确标记。按照确定的准则遵循适当的技术来处理样品。某些样品可能需要特殊处理，例如立即制冷或免受光的保护，遵循标准程序。样品必须在允许的持续时间内存储和测试。使用后，必须在丢弃前高压灭菌对受污染的材料进行消毒。指示
大豆中不含 DNA 且不依赖基因型的 CRISPR/Cas9 系统
简介 CRISPR/Cas9 系统彻底改变了植物基因工程领域 1-3 。为了促进植物中先进而精确的定点诱变，CRISPR/Cas9 系统的表达模块经常作为外来 DNA 整合到宿主基因组中。这种整合通常通过粒子轰击或农杆菌介导的转化等方法实现 4-5 。然而，基因组编辑过程通常会在特定的目标植物物种和菌株中遇到挑战。这些挑战主要源于转化过程中植物再生关键步骤可用基因型的限制。值得注意的是，农杆菌介导的拟南芥花浸法 6 或小麦粒子轰击 7 等方法已成功直接生产出基因组编辑植物，