农杆菌介导的菜籽(甘蓝纳普斯)通过下胚轴段转化是过去30年来常用的一种方法。虽然基于下胚基的方法是良好的,但它不容易适应精英种质,并且延长过程对于生产转化设置并不理想。我们开发了一种基于上皮基和较高的茎(损伤)段的农杆菌介导的转化方法,该方法有效,快速且可用于高通量转化和基因组编辑。该方法已在多种低芥酸菜籽基因型中成功实现。该方法似乎是与基因型无关的,具有不同的转化效率。节日段转换用于产生转基因事件以及CRISPR-CAS9介导的移码基因敲除。
悬浮培养物对光照作出反应并开始分化,我们确定了光照后接种农杆菌的最佳时间。为此,将 O. dubium 细胞培养物在接种农杆菌前 0、5、10、15 和 20 天转移到光照下(图 3b)。接种农杆菌后,培养物在选择培养基中再生长十周。值得注意的是,虽然暗生长培养物的转化产生了两个转化子,但接种前 5、10、15 和 20 天暴露在光照下的培养物分别产生了 15、6、19 和 14 个卡那霉素抗性芽,其中 4、6、6 和 5 个芽(共 21 个芽)从第 21 天开始显示出弱的 RFP 荧光(图 4a、b、c)。经过挑选,绿色健康
图5-17(a)由细菌性农杆菌引起的玫瑰茎上的外部和横截面视图。(b)细菌Ti质粒结构以及在受感染植物中T-DNA的转移,整合和表达的示意图表示,从而导致冠状胆囊产生。
摘要:高效的遗传转化是快速进行基因功能分析和作物性状改良的先决条件。我们最近证明,使用我们的快速农杆菌介导转化方法,具有 NptII /G418 选择和兼容辅助质粒的新型 T-DNA 双元载体可以有效地转化玉米自交系 B104。在这项工作中,我们实施了非整合型 Wuschel2 (Wus2) T-DNA 载体方法进行农杆菌介导的 B104 转化,并测试了其对难转化自交系 B73 转化和基因编辑的潜力。非整合型 Wus2 (NIW) T-DNA 载体辅助转化方法使用两株农杆菌菌株:一株携带目的基因 (GOI) 构建体,另一株提供 NIW 构建体。为了监测 Wus2 与玉米基因组的共整合,我们将由强组成型启动子驱动的玉米 Wus2 表达盒与新的可见标记 RUBY 相结合,后者产生紫色色素甜菜碱。作为 GOI 构建体,我们使用之前测试过的 CRISPR-Cas9 构建体 pKL2359 进行 Glossy2 基因诱变。当 GOI 和 NIW 构建体都由 LBA4404Thy 菌株递送时,B104 转化频率显著提高了约两倍(10% vs. 18.8%)。重要的是,我们能够使用 NIW 辅助转化方法转化顽固性自交系 B73,并通过省略选择剂 G418 获得了三株无转基因编辑植物。这些结果表明,NIW 辅助转化可以提高玉米 B104 转化频率,并为 CRISPR 技术用于无转基因基因组编辑提供一种新选择。
2。2.0植物的技术和遗传操纵2.1)将DNA引入植物 - 间接方法(粒子轰炸,聚乙烯乙二醇,(PEG)电穿孔,碳化硅纤维纤维等)的方法和直接方法(硅核酸杆菌纤维纤维等)(Agrobacterium介导的基因Tranfer)2.2)植物变换 - 基本特征Vectoration-vectortation sos sos vectoration sos vectoration sos vectoration。2.3) - 遗传操纵在农业中的应用 - 使用有关除草剂耐药性,耐药性,抗病性,降低病毒疾病的影响,胁迫耐受性,提高作物产量和质量的案例研究,分子药物。2.4)生物伦理学 - 对转基因作物(抗生素耐药性基因,除草剂耐药性和“超级weed”基因污染物,大企业)和GM作物和产品法规的关注。
摘要 CRISPR/Cas9 和 Cas12a (Cpf1) 工具已大规模用于基因组编辑。最近建立了一种具有单个核酸酶结构域、相对较小尺寸、低频率脱靶效应和高温下切割能力的新效应物,并将其命名为 CRISPR/Cas12b (C2c1)。Cas12b 还表现出在哺乳动物系统中的温度诱导性。因此,该系统对于编辑耐高温植物物种(如棉花)的基因组具有潜在价值。利用这种新系统,在一系列温度下通过农杆菌介导的遗传转化成功生成了陆地棉突变体。暴露在 45°C 下 4 天的转化子(被农杆菌感染的外植体)显示出最高的编辑效率。全基因组测序未检测到脱靶突变。T0 代中 AacCas12b 进行的基因组编辑忠实地传递给了 T1 代。综上所述,CRISPR/Cas12b 是一种高效、精确的棉花基因组编辑工具。
摘要:长期以来,大麻一直用于治疗和工业用途。由于其在医药、娱乐和工业上的需求不断增长,迫切需要应用新的生物技术工具来引入具有理想特性和增强次生代谢产物产量的新基因型。微繁殖、保存、细胞悬浮培养、毛状根培养、多倍体操作和农杆菌介导的基因转化已在大麻中得到研究和使用。然而,转基因植物再生率低、毛状根培养和细胞悬浮培养中次生代谢产物生产效率低等一些障碍限制了这些方法在大麻中的应用。在当前的评论中,大麻的体外培养和基因工程方法以及其他有前景的技术,如形态发生基因、新的计算方法、成簇的规律间隔的短回文重复序列 (CRISPR)、配备 CRISPR/Cas9 的农杆菌介导的基因组编辑和毛状根培养,这些技术可以帮助改善基因转化和植物再生,并增强次生代谢产物的产生,已经被重点介绍和讨论。
在隔离真菌时,从三个不同地方的三种不同种类的土壤样品中分离了十种真菌。2018年12月从Pathein Chaungtha路边收集了三种土壤样品。通过串行稀释法进行了真菌的分离。从这些土壤样品中获得了十种真菌菌株。研究了孤立的土壤真菌的形态特征。在研究分离的土壤真菌,枯草芽孢杆菌,小球菌,白色念珠菌和农杆菌的抗菌活性中。其中,一个菌株表现出较弱的活性。三种菌株表现出良好的活性,一种菌株(TPF-07)表现出对农杆菌的高度抗菌活性。选择了这种孤立的土壤真菌TPF-07进行进一步研究。在选定的土壤真菌TPF-07的发酵参数中,优化了一天(24小时)种子培养和20%的接种物大小,并在4天发酵期达到最大活性。
在传统的GM植物产生方法(农杆菌和生物植物)中,无法控制转基因插入位点。 div>插入甚至可以是多重的,并且发生在基因组的随机位点中。 div>
摘要 基因组编辑对于作物改良非常有用。利用农杆菌中的瞬时表达系统表达基因组编辑酶的方法,称为农杆菌诱变,是基因组编辑技术中用于改良包括马铃薯在内的无性繁殖作物优良品种的一种捷径。然而,用这种方法不能选择经过编辑的个体。再生促进基因的瞬时表达可以导致幼苗再生出芽,而大多数再生促进基因的组成性表达不会导致正常再生的芽。在这里,我们报告我们可以通过正向选择获得基因组编辑的马铃薯。这些再生芽是通过将再生促进基因与基因组编辑酶基因的瞬时表达相结合的方法获得的。此外,我们证实,用这种方法获得的基因组编辑马铃薯不含有农杆菌中使用的二元载体的序列。我们的数据已提交给日本监管机构文部科学省 (MEXT),我们正在对这些马铃薯进行田间试验以进一步研究。我们的工作为通过再生促进基因的瞬时表达来再生和获取基因组编辑作物提供了一种强有力的方法。