浓度。DMEM培养基、0.25%胰蛋白酶(Gibco,美国)、胎牛血清(Every Green,中国)、青霉素和链霉素(Sigma-Aldrich,美国)、FITC Annexin V 凋亡检测试剂盒和 7-AAD(BD Biosciences,美国)、CCK-8(Dojindo,日本)、DAPI(Beyotime,中国)、TRIzol 试剂(Invitrogen,美国)、First Stand cDNA Synthesis Kit(Thermo Fisher Scientific,美国)和 UltraSYBR One-Step RT-qPCR Kit(Cwbio,中国)。所有引物均购自GeneScript(中国)。一抗p27(sc-71813)、CDK2(sc-53219)、Cyclin D1(sc-56302)、p53(sc-71819)、Bax(sc-20067)、Bcl-2(sc-56015)、cleaved PARP(sc-56196)和β-actin均购自Santa Cruz Biotechnology(美国),cleaved caspase-3[9661]和cleaved caspase-9(9505和9509)购自Cell signaling Technology(美国)。p53抑制剂(PFT-α,s2929)购自Selleck Chemicals(美国)。
背景:事后组织是细胞疗法的茎/祖细胞的潜在来源,保存种质和通过克隆复兴濒危和/或死亡物种的复兴。然而,动物死亡后可以恢复多长时间。这项研究的目的是评估可从冷藏绵羊皮肤中回收活细胞的死后间隔(PMI)窗口。耳朵皮是从屠宰场的动物中采购的,并在实验室中存储在4°C。小型外植体(2-3 mM 2)。在37°C培养物在CO 2孵化器中培养10-12天后对外植体周围的细胞产物进行评分,并将来自选定PMI的细胞培养3-5次,并在其生长谱,遗传稳定性,冷冻保存能力和基因表达方面进行表征。
方法:将血清饥饿的HDPSC分为四组:对照:DMEM中的HDPSC;基于L-精氨酸的300μmol/L中的HDPSC;基于L-精氨酸的400μmol/L中的HDPSC;在500μmol/L的基于L-精氨酸的培养基组中的HDPSC中,在两个单独的24孔板(5×10 4细胞/孔)中添加了增殖和迁移评估。24小时后,使用细胞计数测试(血液镜和手动检查器)测量所有组的增殖。通过使用细胞迁移测定法(刮擦伤口测定法),在24小时后使用细胞迁移测定法测量了所有组的迁移速度。在显微镜下评估细胞特征,然后使用Image-J®解释对其进行评估。此图像j表示迁移速度(NM/h)数据的测量。使用单向方差分析和事后Bonferroni(p <0.05)进行统计分析,以进行增殖,并在事后LSD(P <0.05)进行迁移。
摘要。背景/目的:伊维菌素最初用作兽药,对各种寄生虫均有疗效。胰腺癌是目前最难治愈的疾病之一。本研究旨在证明重组蛋氨酸酶 (rMETase) 和伊维菌素的组合在体外消灭人胰腺癌细胞方面的协同作用。材料和方法:在添加了 10% 胎牛血清和 1 IU/ml 青霉素/链霉素的杜氏改良伊格尔培养基 (DMEM) 中培养 MiaPaCa-2 人胰腺癌细胞。使用 WST 试剂测定 rMETase 单独使用、伊维菌素单独使用及其组合对 MiaPaCa-2 细胞活力的降低。体外检查了四个实验组:未治疗的对照组;伊维菌素单独使用;rMETase 单独使用;伊维菌素与 rMETase 联合使用。结果:伊维菌素对MiaPaCa-2细胞的IC 50为5.9μM,rMETase对MiaPaCa-2细胞的IC 50为2.93U/ml,伊维菌素(5.9μM)加rMETase(2.93U/ml)可显著降低MiaPaCa-2细胞的存活率,
Wnt3a,R-Spondin1和Noggin(WRN)调节培养基。15在简短的L-WRN(ATCC CRL-3276)细胞中,在10 cm板上培养了带有培养基(Dulbecco修改的Eagle的培养基[DMEM,Fisher],0.5 mg/ml G418(Thermofisher),0.5 mg/ml hygromycin b(Hygrofomycin B(Hygroforisher),1%的(生命),(life offermin),/strimies contrymin和1%(life ottercin),(thermofisher)的0.5 mg/mL G418(Thermofisher),/STRECTCILIN(LIFERCTIN),症状(Themerofisher),/症胎牛血清)。在10%的L-WRL细胞(ATCC,CRL-3276)中已在10 cm板中播种在培养基中(没有G418和Hygromycin B),将细胞孵育3-4天。当细胞为80%-90%汇合时,将培养基替换为10 mL新鲜培养基,并将细胞孵育24小时。收集培养基,以1000×g离心4分钟,通过0.22-PM无菌过滤器,并存储在-80°C下。将另外10毫升的新鲜培养基添加到板上并在24小时后收集,以使用相同的步骤使第二批条件培养基。在使用前将第一,第二和第三批条件介质混合在一起,以制备100%WRN条件介质。
1 Precision制造中心,DMEM,Strathclyde大学,格拉斯哥,英国w.xie@strath.ac.uk摘要摘要实现了对氧化增长的精确控制已成为局部阳极氧化(LAO)纳米术的质量控制的关键瓶颈,这是由于缺乏有效的流程监测和反馈控制方法而导致的纳米术。在这种情况下,本文提出并提出了一种现场检测方法,使用高度耐用的导电钻石涂层探针在老挝过程中实时监测氧化生长的状态。研究结果表明,使用钻石涂层的探针可以在微型水平上诱导具有瞬态电流的可控老挝,并创建高度超过18 nm的纳米结构,这尤其优于使用掺杂的硅探针获得的纳米结构。还证明,在一定的电压范围内,检测到的电流可以反映纳米碱制造过程中氧化的生长,检测到的电流与氧化表面的电导率相关,表明氧化程度。可以预期,与柔性脉冲调制的组合将有助于一种柔性,简单的方法来调整氧化生长,为生产高质量的氧化物线铺平道路。原子力显微镜,监测,纳米制造,氧化
摘要 无人机在军事应用和民航领域越来越受到爱好者和企业的青睐。实现自然的人机交互 (HDI) 将使不熟练的无人机飞行员能够参与这些设备的飞行,并且更普遍地简化无人机的使用。本文的研究重点是设计和开发自然用户界面 (NUI),允许用户通过身体姿势驾驶无人机。使用 Microsoft Kinect 捕获用户的身体信息,这些信息通过运动识别算法进行处理并转换为无人机的命令。图形用户界面 (GUI) 的实现为用户提供反馈。无人机机载摄像头的视觉反馈显示在屏幕上,并且已实现由身体姿势控制的交互式菜单,允许选择照片和视频捕捉或起飞和降落等功能。这项研究产生了一个高效且实用的系统,比使用物理控制器驾驶更直观、更自然、更具沉浸感、更有趣,包括创新方面,例如为无人机驾驶和飞行速度控制实现附加功能。关键词:人机交互、自然用户界面、设计工程、界面设计、以用户为中心的设计 联系人:Gio, Nicolas Clément 斯特拉斯克莱德大学 DMEM 法国 nicolas.gio@gadz.org
摘要 无人机在军事应用和民航领域越来越受到爱好者和企业的欢迎。实现自然的人机交互 (HDI) 将使不熟练的无人机飞行员能够参与这些设备的飞行,并使无人机的使用更加容易。本文的研究重点是自然用户界面 (NUI) 的设计和开发,使用户能够通过肢体动作驾驶无人机。Microsoft Kinect 用于捕获用户的身体信息,并通过动作识别算法进行处理并转换为无人机的命令。图形用户界面 (GUI) 的实现为用户提供反馈。无人机机载摄像头的视觉反馈显示在屏幕上,并实现了由肢体动作控制的交互式菜单,允许选择照片和视频捕捉或起飞和降落等功能。这项研究产生了一个高效且实用的系统,比使用物理控制器驾驶更直观、更自然、更具沉浸感、更有趣,包括创新方面,例如为无人机驾驶和飞行速度控制实现附加功能。关键词:人机交互、自然用户界面、设计工程、界面设计、以用户为中心的设计联系人:Gio, Nicolas Clément 思克莱德大学 DMEM 法国 nicolas.gio@gadz.org
试剂或资源源标识符化学品,肽和重组蛋白Puelink RNA Mini Kit Invitrogen 12183018A ISCRIPT™ISCRIPT™cDNA合成Kit Kit Biorad 1708840 Sybr™SELICS SYBR™SELECT MASTER MASTER MASTER MIST 4-12%,10井Genscript M00653胶原酶II Sigma C2-28-100MG DMEM(无葡萄糖)GIBCO GIBCO 11-966-025 FBS FISHER FISHER FISHER SCOCICILIFIC SH3010903 PENICILLIN SH30103 PhosSTOP Roche 4906845001 IBMX Sigma 410957 Insulin Sigma I5500 Indomethacin Sigma 405268 Triiodothyronine (T3) Sigma T6397 Dexamethasone Sigma 265005 Rosiglitazone Sigma PHR2932 LipidTOX deep red neutral lipid stain Fisher Scientific H34477超级阻止诱因37535抗体抗KHK Sigma HPA007040抗HIF1α(D2U3T)细胞信号传导14179抗PPARγ(C26H12)细胞信号2443 C/EBPα细胞信号8178 Anti-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-EBPα细胞信号8178 Anti-al timnigin-αtubin tim-αtubin(38)细胞信号2250质粒和siRNA PVSV-G添加剂138479 PCL-ECO ADDGENE 12371 PBABE-NEOLARGE TCDNA ADDGENE 1780人HIF1A 3091 sirna accell drm-a-a-a-a-004018230001生物。n/a
近年来,患者来源的原代细胞培养物在癌症临床前检测(包括药物筛选和遗传毒性研究)中的应用有所增加。然而,它们的转化价值受到多种限制的制约,包括可能由培养条件引起的多变性。在这里,我们表明常用于繁殖原代黑色素瘤培养物的培养基组成限制了它们对其肿瘤来源的代表性和细胞可塑性,并改变了它们对治疗的敏感性。事实上,我们建立并比较了不同黑色素瘤患者的培养物,这些培养物在低酪氨酸(Ham's F10)或高酪氨酸(补充酪氨酸的 Ham's F10 或 RPMI1640 或 DMEM)培养基中平行繁殖。酪氨酸是黑色素生物合成的前体,该过程在分化的黑色素细胞和黑色素瘤细胞中特别活跃。出乎意料的是,我们发现高酪氨酸浓度会促进早期表型向间充质样或衰老样表型转变,并阻止具有分化特征的黑色素瘤细胞培养物的建立,我们发现这些特征在人类临床活检中经常出现。此外,在这些培养条件下出现的侵袭性表型似乎是不可逆的,并且如预期的那样,与对 MAPKi 的内在抗性有关。与此形成鲜明对比的是,分化的黑色素瘤细胞培养物在低酪氨酸培养基中增殖时保留了它们的表型,更重要的是它们的表型可塑性,这是黑色素瘤细胞的一个关键特征。总之,我们的研究结果强调了在低酪氨酸培养基中培养黑色素瘤细胞的重要性,以保持其表型的起源身份和细胞可塑性。