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产品表Cellule U2OS-CRISPR-NUP96-HALO | 300448产品表Komórkiu2os-crispr-nup96-snap产品表célulasasb-xiv | 400120产品表HK-Crispr-CAP-H-MEGFP细胞| 301568
HK-CRISPR-CAP-H-MEGFP细胞系是一种为晚期基因编辑和荧光应用而设计的人类衍生模型。该细胞系基于亲本人类细胞系，并已使用CRISPR-CAS9技术进行了修改，以表达用单体增强的绿色荧光蛋白（MEGFP）标记的CAP-H（染色体相关蛋白H）基因。这种修饰允许CAP-H的精确可视化和跟踪，CAP-H是冷凝蛋白复合物的组成部分，对于细胞分裂期间的染色体凝结和稳定至关重要。MEGFP标签提供了强烈而稳定的荧光信号，这使该细胞系非常适合活细胞成像和基于荧光的测定。
产品表Komórkiu2os-crispr-nup96-megfp
由于融合蛋白NUP96-MEGFP的稳定表达而选择了该特定的克隆，并选择了数字195，并保留了U-2 OS系的典型特征，包括固体细胞骨架结构，这对于与癌细胞和转移的迁移有关的研究至关重要。使用CRISPR技术可确保基因的精确版本，从而最大程度地减少可能威胁实验结果完整性的脱靶效应。这意味着U-2 OS-Crispr-NUP96-MEGFP 195克隆在高分辨率成像技术和详细的细胞结构中特别有用，有助于细胞生物学，癌症研究和核转运现象的先进研究。
产品表KomórkiHK-Crispr-CAP-H2-MEGFP
亚培养从相邻的细胞中去除旧培养基，并将其洗净，而PBS不含钙和镁。对于T25烧瓶，使用3-5 mL PBS，对于T75烧瓶5-10 ml。然后，使用1-2 mL对T25和2.5 ml平底物完全覆盖Accutase细胞，用于T75烧瓶。让细胞在室温下持续8-10分钟，将它们分开。孵育后，将细胞与10 mL培养基轻轻混合以再次悬挂，然后以300xg的速度将其提起3分钟。拒绝上清液，再次将细胞挂在新鲜的培养基中，然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
产品表BuňkyHK-Crispr-CAP-H2-MEGFP | 301569
亚培养从Adher细胞中去除旧培养基，并在没有钙和镁的情况下洗净PBS。用于T25烧瓶使用3-5 ml PBS和T75 5-10 ml烧瓶。然后，使用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶完全覆盖细胞，用于T75烧瓶。让细胞在室温下孵育8-10分钟以分开。孵育后，将细胞与10 ml培养基再次悬浮，然后在300xg洒3分钟。丢弃上清液，将细胞溶解在新鲜培养基中，然后将其转移到已经包含新培养基的新瓶中。
产品表célulashk-crispr-cap-d3-megfp
亚培养消除了粘附细胞的古老介质，并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。 div>对于T25烧瓶，使用3-5毫升PBS，对于T75烧瓶，使用5-10毫升。 div>然后用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶进行T75烧瓶的作用覆盖细胞。 div>让细胞在室温下孵育8-10分钟以释放它们。 div>孵化后，将细胞与10 ml培养基轻轻混合，以重悬于它们，然后离心至300xg 300倍。 div>丢弃上清液，将细胞重悬于凉爽的介质中，然后将其转移到已经包含新鲜手段的新瓶中。 div>
产品表HK-Crispr-Nup188-MEGFP细胞| 300657
亚培养物从粘附细胞中去除旧培养基，并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。对于T25烧瓶，使用3-5毫升PBS，对于T75烧瓶，使用5-10毫升。然后，使用1-2 mL对T25烧瓶完全覆盖细胞，T75烧瓶2.5 mL。让细胞在室温下孵育8-10分钟以将其分离。孵育后，将细胞与10 ml培养基轻轻混合以重悬于它们，然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液，将细胞重悬于新鲜培养基中，然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
产品表célulashk-crispr-cap-h2-megfp
亚培养消除了粘附细胞的古老介质，并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。 div>对于T25烧瓶，使用3-5毫升PBS，对于T75烧瓶，使用5-10毫升。 div>然后用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶进行T75烧瓶的作用覆盖细胞。 div>让细胞在室温下孵育8-10分钟以释放它们。 div>孵化后，将细胞与10 ml培养基轻轻混合，以重悬于它们，然后离心至300xg 300倍。 div>丢弃上清液，将细胞重悬于凉爽的介质中，然后将其转移到已经包含新鲜手段的新瓶中。 div>
利用 CRISPR/Cas9 介导的靶向整合生成 Y 染色体中含有 EGFP 基因的转基因克隆水牛胚胎
性别控制技术在家畜生产中具有重要意义，尤其对于快速繁殖的水牛（bubalus bubalis）具有重要意义，本研究以水牛为研究模型。我们已证实整合到小鼠Y染色体上的荧光蛋白可用于小鼠植入前胚胎的性别鉴定。首先，我们优化了增强型绿色荧光蛋白（eGFP）和mCherry外源基因在Neuro-2a细胞、小鼠胚胎干细胞、小鼠胚胎细胞（NIH3T3）、水牛胎儿成纤维细胞（BFF）中的靶向整合效率。结果表明，靶标两侧同源臂长度为800 bp比300 bp或300 bp/800 bp更有效。当细胞补充了 pifithrin-µ（一种抑制 p53 与线粒体结合的小分子）时，BFF 细胞中同源定向修复 (HDR) 介导的敲入也得到了显著改善。250 V 的三个脉冲在 BFF 细胞中产生最有效的电穿孔，并且发现 1.5 µ g/mL 嘌呤霉素是筛选的最佳浓度。此外，利用 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑结合体细胞核移植 (SCNT) 技术成功生成了 Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞和克隆水牛胚胎。在第 6-8 代时，Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞的生长率和细胞增殖率明显低于非转基因 BFF 细胞；甲基化相关基因 DNMT1 和 DNMT3a 的表达水平相似；然而，与非转基因细胞相比，Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 细胞中乙酰化相关基因 HDAC1 、 HDAC2 和 HDAC3 的表达水平显著较高（p < 0.05）。Y-Chr-eGFP 转基因 BFF 被用作 SCNT 的供体，结果表明 eGFP 报告基因适用于胚胎性别的可视化。克隆水牛胚胎的囊胚率相似；然而，与对照相比，转基因克隆胚胎的卵裂率明显较低。总之，我们优化了产生转基因 BFF 细胞的方案，并使用这些细胞作为供体成功产生了 Y-Chr-eGFP 转基因胚胎。