构建编码肠杆菌噬菌体T3(噬菌体T3)SSB蛋白蛋白(1-232AA)的质粒是表达重组型噬菌体T3(噬菌体T3)SSB蛋白蛋白的一般方法的第一步。然后将质粒转化为大肠杆菌细胞。阳性大肠杆菌细胞并培养,诱导蛋白质表达,并裂解细胞。蛋白质与N末端6XHIS-SUMO标签融合。然后通过亲和力纯化纯化所得的重组肠杆菌噬菌体T3(T3)SSB蛋白蛋白,并进行SDS-PAGE分析以验证并评估蛋白质的纯度。其纯度超过90%。
复原 我们建议在打开前先短暂离心此小瓶,使内容物沉至底部。请使用去离子无菌水复原蛋白质至浓度为 0.1-1.0 mg/mL。我们建议添加 5-50% 甘油(最终浓度)并分装以在 -20°C/-80°C 下长期储存。我们默认的甘油最终浓度为 50%。客户可以将其作为参考。
。CC-BY 4.0 国际许可下可用(未经同行评审认证)是作者/资助者,他已授予 bioRxiv 永久展示预印本的许可。它是此预印本的版权持有者此版本于 2024 年 10 月 22 日发布。;https://doi.org/10.1101/2024.10.08.617237 doi:bioRxiv 预印本
摘要背景和目标:基于大肠杆菌 (E. coli) 的新型癌症疗法最近引起了广泛关注。本研究研究了具有转基因大肠杆菌治疗癌症的潜力。方法:进行本系统综述以收集有关基于大肠杆菌的癌症疗法的相关文献。本研究搜索了多个数据库以查找临床前研究和早期临床试验。这些研究包括用于癌症治疗的转基因大肠杆菌的体外和体内评估。此外,本研究评估了基于大肠杆菌的疗法与其他疗法结合并使用个性化方法治疗癌症的潜力。结果:在仔细审查了 13,064 篇出版物后,经过筛选过程,纳入了 301 项研究进行定量分析,其中包括 44 篇文章。该综述表明,活的肿瘤靶向细菌有可能彻底改变癌症治疗。尽管传统癌症治疗面临挑战,但大肠杆菌提供了一种可以在肿瘤内积聚和增加的替代策略。大肠杆菌可通过基因操作和合成生物工程携带多种抗癌剂,使其成为定制治疗方法的理想载体。研究人员发现它们可用作单一疗法或联合疗法,为增强临床效果提供多方面的解决方案。多项针对肿瘤的大肠杆菌临床试验正在进行中,表明理论前景已转化为实际应用。结论:总而言之,活的靶向肿瘤细菌可能能够解决现有癌症治疗的局限性。其抗肿瘤免疫反应的选择性、可编程性和诱导抗肿瘤免疫反应的能力表明了显著的进步。尽管存在这些挑战,但正在进行的临床试验表明,大肠杆菌融入癌症治疗方案的方式发生了切实的转变。需要进行更多的研究和开发,以充分利用这些新的靶向抗癌策略。关键词:大肠杆菌、癌症治疗、系统评价、体外、体内资金:无。*本作品已根据 CC BY-NC-SA 许可发表。版权所有 © 作者 引用本文为:Ameli N、Shahriari A、Yousefi M、Alaghi A、Gorgestani O、Hatami B。大肠杆菌在癌症治疗中的创新策略:系统评价。伊朗红新月会医学杂志,2024,20.1-13。一、简介
摘要背景和目标:基于大肠杆菌(大肠杆菌)的新癌症疗法最近引起了人们的重大兴趣。大肠杆菌,以治疗癌症的潜力。方法:进行了当前的系统综述,以收集有关基于大肠杆菌的癌症疗法的相关文献。当前的研究搜索了几个数据库进行临床前研究和早期临床试验。这些研究包括对用于癌症治疗的基因工程大肠杆菌的体内和体内评估。此外,当前的研究还评估了基于大肠杆菌的疗法与其他疗法结合治疗癌症的潜力,并使用了个性化方法。结果:经过精心审查13,064篇出版物后,包括301项研究以进行定量分析,包括44篇文章。活肿瘤的细菌有可能彻底改变癌症治疗剂。尽管与常规癌症治疗相关的挑战,但大肠杆菌提供了一种可以在肿瘤内积累和增加的替代策略。大肠杆菌可以通过基因操纵和合成生物工程来携带多种抗癌药,使其成为量身定制的治疗方法的理想载体。研究人员发现,它们可以用作单一疗法或联合疗法,并提供了多方面的解决方案,以增强临床结果。结论:得出结论,靶向肿瘤的细菌可能能够解决现有癌症治疗的局限性。1。正在进行多项大肠杆菌靶向肿瘤的临床试验,表明理论上的承诺已转化为实际应用。其抗肿瘤免疫反应,可编程性和诱导抗肿瘤免疫反应的能力的选择性表明了显着进步。尽管存在这些挑战,但持续的临床试验表明,将大肠杆菌纳入癌症治疗方案的方式存在明显的转变。需要更多的研究和开发来利用这些新的目标抗癌策略,以充分发挥其潜力。关键字:大肠杆菌,癌症疗法,系统评价,体内,体内资金:无。*这项工作已根据CC BY-NC-SA许可发布。版权所有©作者引用本文为:Ameli N,Shahriari A,Yousefi M,Alaghi A,Gorgestani O,Hatami B.大肠杆菌在癌症中的创新策略:系统评价。伊朗红月MED J.2024,20.1-13。 简介伊朗红月MED J.2024,20.1-13。简介
。cc-by-nc-nd 4.0国际许可证(未经同行评审证明)获得的是作者/资助者,他授予Biorxiv授予Biorxiv的许可,以永久显示预印本。这是该版本的版权所有,该版本于2024年10月7日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.08.06.606784 doi:Biorxiv Preprint
摘要:基因组编辑,特别是使用 CRISPR-Cas9,是操纵基因组(包括大肠杆菌)的有力工具。本研究旨在利用 CRISPR-Cas9 对大肠杆菌中的 lacZ 基因进行遗传工程改造,以评估其在红薯皮(Ipomoea batatas)深层发酵过程中在淀粉酶产生中的作用。在 37ºC、pH 6.2、7.0 和 8.4 条件下培养编辑型和野生型大肠杆菌,并使用硫酸铵纯化所得淀粉酶。使用淀粉作为葡萄糖源筛选淀粉酶的产生,并在不同温度和 pH 水平下进行酶表征。没有向导 RNA (gRNA) 和阿拉伯糖的 CRISPR-Cas9 编辑的大肠杆菌显示蓝色菌落,而有 gRNA、Cas9 但没有阿拉伯糖的 CRISPR-Cas9 编辑的大肠杆菌没有菌落。用 Cas9 和阿拉伯糖但不加 gRNA 编辑的大肠杆菌也产生了蓝色菌落。当暴露于 Cas9、gRNA 和阿拉伯糖时,菌落表现出白色表型。凝胶电泳显示,暴露于 Cas9 和阿拉伯糖的大肠杆菌在 650 bp 处有两条带,而暴露于不含 gRNA 和阿拉伯糖的 Cas9 的蓝色菌落则在 1,100 bp 处显示条带。阳性对照显示三条不同的条带,而阴性对照没有。淀粉酶筛选显示野生型大肠杆菌和 CRISPR 编辑的大肠杆菌有相似的透明区。在发酵 15 天期间,pH 8.4 为野生型大肠杆菌的生长提供了最有利条件,pH 7.0 为 CRISPR 编辑的大肠杆菌的生长提供了最有利条件。温度和 pH 值测定表明,野生型和 CRISPR 编辑的大肠杆菌在 45ºC 和 pH 7 下均表现出相似的最大淀粉酶活性,酶产量没有显着差异。这些结果表明 lacZ 基因对大肠杆菌中的淀粉酶产生没有显着影响。 DOI:https://dx.doi.org/10.4314/jasem.v28i10.5 许可证:CC-BY-4.0 开放获取政策:JASEM 发表的所有文章均为开放获取文章,任何人都可以免费下载、复制、重新分发、转发、翻译和阅读。版权政策:© 2024。作者保留版权并授予 JASEM 首次出版权。本文的任何部分均可未经许可重复使用,但必须引用原始文章。引用本文为:MINARI, J. B; NWOSU, GE; DADA, I. S; ABDULAZEEZ, DO (2024)。使用马铃薯皮(Ipomea batata)作为酶源,分离和表征由 CRISPR-Cas 9 编辑的 LacZ 基因和未编辑的大肠杆菌产生的淀粉酶。应用科学与环境管理杂志 28 (10) 2981-2989 日期:收到日期:2024 年 7 月 7 日;修订日期:2024 年 8 月 15 日;接受日期:2024 年 8 月 19 日出版日期:2024 年 10 月 5 日关键词:CRISPR Cas9 基因编辑、lacZ 基因、大肠杆菌、马铃薯皮发酵、淀粉酶理想的代谢催化剂是酶,它通过明确定义的途径提供各种内源性生化反应。(Singh 等人,2019 年)。由于酶存在于所有自然界物种中,包括植物、动物、和微观微生物,它们可用于工业用途。此外,在受控情况下,各种微生物酶被识别
hatzimanolis,精神分裂症患者衍生的嗅觉神经元干细胞中的橡木失调的循环RNA是与细胞迁移和亚细胞组织相关的疾病相关性状的基础
2-苯基乙醇以其玫瑰般的气味和抗菌活性而闻名,通过苯基丙酮酸脱羧酶(PDC)和醛还原酶的顺序反应通过外源苯基丙酮酸合成。我们首先靶向ARO10,这是酿酒酵母的苯基丙酮酸脱羧酶基因,并鉴定出合适的醛还原酶基因。大肠杆菌转化体中ARO10和YAHK的共表达在批处理培养中产生1.1 g/L的2-苯基乙醇。我们假设PDC活动可能有瓶颈。利用基于计算机的酶进化来增强产量。与野生型ARO10相比,在ARO10(ARO10 I544W)中引入氨基酸取代(ARO10 I544W)稳定了苯基丙酮酸底物的芳族环,增加了2-苯基乙醇的产量4.1倍。培养ARO10 I544W表达大肠杆菌的培养2.5 g/l的2-苯基乙醇,在72小时后,葡萄糖的产量为0.16 g/g。这种方法代表着显着的进步,迄今为止使用微生物从葡萄糖中获得了2-苯基乙醇的最高收率。培养ARO10 I544W表达大肠杆菌的培养2.5 g/l的2-苯基乙醇,在72小时后,葡萄糖的产量为0.16 g/g。这种方法代表着显着的进步,迄今为止使用微生物从葡萄糖中获得了2-苯基乙醇的最高收率。
Access Microbiology 是一个开放的研究平台。预印本、同行评审报告和编辑决定可在本文的在线版本中找到。收到日期:2023 年 10 月 11 日;接受日期:2024 年 6 月 26 日;发布日期:2024 年 7 月 17 日作者隶属关系:1 美国陆军作战能力发展司令部化学生物中心,8908 Guard St. E3831,Gunpowder,MD 21010,美国;2 Excet Inc. 6225 Brandon Ave #360,Springfield,VA 22150,美国。*通信:Nathan D. McDonald,Nathan.d.mcdonald5.civ@army.mil 关键词:CRISPR-Cas9;基因组工程;脂质 A;脂多糖。缩写:KDO,3-脱氧-d-甘露-辛-2-乌洛索;LOS,脂寡糖;LPS,脂多糖;PAM,原间隔区相邻基序。本文的在线版本提供了两个补充图。000723.v3