特异性和评论此mAb识别〜50KDA的蛋白质,该蛋白质被识别为神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)。它与其他中间丝蛋白没有交叉反应。GFAP在星形胶质体中特异性发现。GFAP是在中枢神经系统中定位良性星形胶质细胞和神经胶质起源的肿瘤细胞的非常流行的标记。对GFAP的抗体可用于区分大脑的转移性病变,并记录中枢神经系统外肿瘤的星形细胞分化。
亚培养物从粘附细胞中去除旧培养基,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。然后,使用1-2 mL对T25烧瓶完全覆盖细胞,T75烧瓶2.5 mL。让细胞在室温下孵育8-10分钟以将其分离。孵育后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合以重悬于它们,然后以300xg离心3分钟。丢弃上清液,将细胞重悬于新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
HK-CRISPR-CAP-H-MEGFP细胞系是一种为晚期基因编辑和荧光应用而设计的人类衍生模型。该细胞系基于亲本人类细胞系,并已使用CRISPR-CAS9技术进行了修改,以表达用单体增强的绿色荧光蛋白(MEGFP)标记的CAP-H(染色体相关蛋白H)基因。这种修饰允许CAP-H的精确可视化和跟踪,CAP-H是冷凝蛋白复合物的组成部分,对于细胞分裂期间的染色体凝结和稳定至关重要。MEGFP标签提供了强烈而稳定的荧光信号,这使该细胞系非常适合活细胞成像和基于荧光的测定。
由于融合蛋白NUP96-MEGFP的稳定表达而选择了该特定的克隆,并选择了数字195,并保留了U-2 OS系的典型特征,包括固体细胞骨架结构,这对于与癌细胞和转移的迁移有关的研究至关重要。使用CRISPR技术可确保基因的精确版本,从而最大程度地减少可能威胁实验结果完整性的脱靶效应。这意味着U-2 OS-Crispr-NUP96-MEGFP 195克隆在高分辨率成像技术和详细的细胞结构中特别有用,有助于细胞生物学,癌症研究和核转运现象的先进研究。
亚培养从相邻的细胞中去除旧培养基,并将其洗净,而PBS不含钙和镁。对于T25烧瓶,使用3-5 mL PBS,对于T75烧瓶5-10 ml。然后,使用1-2 mL对T25和2.5 ml平底物完全覆盖Accutase细胞,用于T75烧瓶。让细胞在室温下持续8-10分钟,将它们分开。孵育后,将细胞与10 mL培养基轻轻混合以再次悬挂,然后以300xg的速度将其提起3分钟。拒绝上清液,再次将细胞挂在新鲜的培养基中,然后将其转移到已经包含新鲜培养基的新瓶中。
亚培养从Adher细胞中去除旧培养基,并在没有钙和镁的情况下洗净PBS。用于T25烧瓶使用3-5 ml PBS和T75 5-10 ml烧瓶。然后,使用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶完全覆盖细胞,用于T75烧瓶。让细胞在室温下孵育8-10分钟以分开。孵育后,将细胞与10 ml培养基再次悬浮,然后在300xg洒3分钟。丢弃上清液,将细胞溶解在新鲜培养基中,然后将其转移到已经包含新培养基的新瓶中。
抽象的背景药理学自噬增强构成了预防或治疗大多数主要年龄相关疾病的临床上验证的策略。在此考虑的驱动下,我们在机器人化的荧光显微镜平台上对65,000种不同化合物进行了高含量/高吞吐量屏幕,以识别新型的自噬诱导剂。结果,我们报告了picropodophophlilin(PPP)作为自噬通量的有效诱导剂的发现,该诱导剂是在靶向上的作用,是胰岛素样生长因子-1受体(IGF1R)的酪氨酸激酶活性的抑制剂。因此,PPP失去了其在缺乏IGF1R或表达组成性活跃的Akt丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)突变体的细胞中的自噬刺激活性。使用对癌症的小鼠施用,PPP通过免疫原性细胞毒剂和程序性细胞死亡1(PDCD1(PDCD1,pd-1)的结合,提高了化学免疫疗法的治疗功效。当肿瘤对PPP不敏感或自噬不足时,这些PPP效应就会丧失。与化学疗法结合使用,PPP通过细胞毒性T淋巴细胞增强了肿瘤的浸润,同时还原了调节性T细胞。在人类三阴性乳腺癌患者中,IGF1R的激活磷酸化与抑制自噬相关,局部免疫力不利,预后不良。总结结论,这些结果表明,IGF1R可能构成一个新型且可吸毒的治疗靶标,用于与化学疗法结合进行癌症治疗。
1。新泽西州医学院的细胞生物学和分子医学系,罗格斯生物医学和健康科学,美国新泽西州纽瓦克2。犹他大学神经生物学和解剖学系,美国犹他州盐湖城3.AIX-MARSELILLE大学,CNRS UMR 7288,马赛发展生物学研究所,法国马赛4. 韦斯研究中心,吉林诊所,宾夕法尼亚州丹维尔市盖辛格诊所的分子和功能基因组学系5。AIX-MARSELILLE大学,CNRS UMR 7288,马赛发展生物学研究所,法国马赛4.韦斯研究中心,吉林诊所,宾夕法尼亚州丹维尔市盖辛格诊所的分子和功能基因组学系5。人类遗传学系,犹他大学,犹他州盐湖城,美国人类遗传学系,犹他大学,犹他州盐湖城,美国
(未通过同行评审认证)是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。该版本的版权持有人本版本发布于2023年5月15日。 https://doi.org/10.1101/2023.05.10.540284 doi:Biorxiv Preprint
亚培养消除了粘附细胞的古老介质,并用缺乏钙和镁的PBS洗涤它们。 div>对于T25烧瓶,使用3-5毫升PBS,对于T75烧瓶,使用5-10毫升。 div>然后用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶进行T75烧瓶的作用覆盖细胞。 div>让细胞在室温下孵育8-10分钟以释放它们。 div>孵化后,将细胞与10 ml培养基轻轻混合,以重悬于它们,然后离心至300xg 300倍。 div>丢弃上清液,将细胞重悬于凉爽的介质中,然后将其转移到已经包含新鲜手段的新瓶中。 div>