在获得患者的知情同意书并根据赫尔辛基宣言后,从CLL患者那里获得了外周血。研究得到剑桥郡研究伦理委员会的批准(07/MRE05/44)。通过在高纤维高压层(Pan-Biotech)上离心,将单核细胞从肝素化的血液中分离出来。Cells were harvested and cultured in RPMI 1640 (Gibco), supplemented with 10% fetal bovine serum, penicillin/streptomycin 50 U/mL, sodium pyruvate 1 mM, L-glutamine 2 mM, L-asparagine 20 mg/mL, 50 μ M 2-mercaptoethanol, 10 mM HEPES ( N -2-羟基乙基丙嗪-N'-2-乙磺酸)和最小必需的培养基非必需氨基酸(Gibco)。ZAP-70状态通过使用抗-ZAP-70抗体(Becton Dickinson Biosciences)使用细胞内染色来评估流量细胞仪。与同型对照相比,阳性细胞> 20%的样品被认为是ZAP-70阳性。阳性细胞> 20%的样品被认为是ZAP-70阳性。
慢性淋巴细胞性白血病(CLL)是小成熟B细胞的肿瘤,是成年人诊断出的最常见白血病。CLL包括两个主要子集,分别具有未分解的(U-CLL)或突变的(M-CLL)免疫球蛋白重链可变区域基因(IGHV),其起源分别来自圆膜前中心(GC)或GC CD5+ B细胞,分别是[1,2]。U-CLL或M-CLL状态的分类在临床上具有不同的预后,而突变状态的预后更好,平均总生存期为293个月,而U-CLL的预后则与较差的预后相关,并且生存期较短(平均OS = 95个月)[3] [3]。CLL通过在外周血中以≥5000µL的计数检测克隆CD5+ B淋巴细胞来诊断。在CLL诊断时,几乎所有患者在先天和适应性免疫反应系统中都有定量和定性缺陷[4,5]。先天免疫细胞,包括中性粒细胞,天然杀伤(NK)细胞和单核细胞具有功能缺陷。CLL患者的循环单核细胞增加了> 60%,但这种细胞与免疫抑制特性有关[6,7]。尽管对正常B细胞的刺激难治性,但单核细胞对Cll衍生的可溶性刺激表达了免疫抑制M2巨噬细胞类似的表型[6,8,9]。绝对CD4+和CD8+ T细胞计数在早期疾病中增加,但是这些数量随着疾病的进展而降低,尤其是辅助辅助活动显着受损[10]。晚期CLL中调节t(CD4+CD25+)细胞的膨胀有助于免疫抑制。b Cll淋巴细胞直接抑制