人类受试者:本研究的所有参与者均已获得或放弃同意接受治疗和公开发表。动物受试者:所有作者均已确认本研究未涉及动物受试者或组织。利益冲突:根据 ICMJE 统一披露表,所有作者均声明以下内容:付款/服务信息:所有作者均已声明未从任何组织获得所提交作品的财务支持。财务关系:所有作者均已声明他们目前或过去三年内与可能对所提交作品感兴趣的任何组织均无财务关系。其他关系:所有作者均已声明不存在可能影响所提交作品的其他关系或活动。
STTR计划的关键功能将其与小型企业创新研究(SBIR)计划区分开来是与研究机构合作的要求。虽然合作小型企业是正式获奖者并管理该项目,但合作研究机构可获得多达60%的奖励资金。STTR指南要求小型企业在项目上至少执行40%的工作,其中至少30%分包给了合作研究机构。剩余的30%可以分配给研究机构或其他研发分包商。
我们的治疗溶液也可用于治疗胃肠道问题,提供可注射的药物,管理疼痛并治疗许多其他症状状况。我们有一支优秀的专家和药剂师团队,他们致力于开发和创新新的药品。我们目前在管道中有一系列创新产品,我们的专家正在积极努力将它们推向市场。”这使句子更加简洁,并突出了公司对创新的承诺。
就社会、经济和公共卫生影响而言,精神和认知障碍是我们面临的最具挑战性的疾病之一。这一挑战在很大程度上源于它们的异质性和复杂性——异质性在于这些疾病在个体间的表现差异很大,复杂性在于缺乏客观的生物标志物,对潜在的神经生理机制的理解有限。与精神和认知障碍有关的网络通常包括前额叶区域(1,2),这是进化最快的区域,在非人类动物中建模尤其具有挑战性(3)。为了治疗性地调节这些功能失调的回路,我们必须全面了解它们的病理生理学。鉴于非侵入性方式的分辨率和特异性相对较低,在人类中完成这一“回路解剖”任务的最精确工具是电生理记录和颅内电极刺激。在这里,我们应用这种方法来研究一种常见且负担沉重的疾病——抑郁症的神经生理学基础(4)。
Arsène Mekinian,1 Lucie Biard,2 Dagna Lorenzo,3 Pavel I Novikov,4 Carlo Salvarani,5 Olivier Espitia,6 Savino Sciascia,7 Martin Michaud,8 Marc Lambert,9 José Hernández-Rodríguez,10 Nicolas Schleinitz,11 Abid Awisat,12 Xavier Puechal,13 Achille Aouba,14 Helene Munoz Pons,15 Ilya Smitienko,16 Jean Baptiste Gaultier,17 Le Mouel Edwige,18 Ygal Benhamou,19 Antoinette Perlat,18 Patrick Jego,18 Tiphaine Goulenok,20 Karim Sacre, 20 伯特兰·利奥热、21 诺兰·哈索尔德、22 乔纳森·布罗纳、23 维尔吉尼·杜弗罗斯特、24 托马斯·塞内、25 朱莉·塞吉耶、11 弗朗索瓦·莫里耶、26 萨宾·贝尔蒂耶、27 亚历山大·贝洛、28 法滕·弗里卡、29 纪尧姆·丹尼斯、30 亚历山大·奥德玛-韦尔杰、31 伊莎贝尔·科内-保特、22 塞巴斯蒂安·亨伯特、32 帕斯卡尔·沃耶-胡内、33 亚历山德罗·托梅莱里、3 埃琳娜·玛丽娜·巴尔迪塞拉、3 桑名昌孝、34 阿尔贝托·洛·古洛、35 瓦汉·穆库奇扬、36 阿泽丁·德拉尔、37 弗朗西斯·加什、8 皮埃尔Zeminsky、24 埃琳娜·加利、3 莫亚·阿尔瓦拉多、5 路易吉·博亚尔迪、5 弗朗西斯科·穆拉托雷、5 马蒂厄·沃蒂尔、2 科拉多·坎波奇亚罗、3 谢尔盖·莫伊谢耶夫、4 马特乌斯·维埃拉、38 帕特里斯·卡库布、38 奥利维尔·费恩、1 大卫·萨阿顿、38 法国高安网络
a 加拿大魁北克省蒙特利尔市罗莎琳和莫里斯·古德曼癌症研究所 b 加拿大魁北克省蒙特利尔市蒙特利尔大学医学院 c 加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学医学院实验医学部 d 加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学舒立克物理科学、生命科学和工程图书馆 e 法国蒙彼利埃大学蒙彼利埃地区癌症研究所医学肿瘤学系 f 法国蒙彼利埃大学法国国家健康与医学研究院、法国国家科学研究院 g 斯洛文尼亚卢布尔雅那肿瘤研究所放射治疗部 h 斯洛文尼亚卢布尔雅那大学医学院 i 美国纽约纪念斯隆凯特琳癌症中心医学部乳腺癌服务部 j意大利帕多瓦威尼托肿瘤研究所 IRCCS 肿瘤学 2 k 意大利帕多瓦大学外科、肿瘤学和胃肠病学系 l 意大利都灵大学和健康科学城医院神经科学系神经肿瘤学分部 m 瑞士苏黎世大学医院神经内科 n 德国慕尼黑路德维希马克西米利安大学第三医学部 o 荷兰尼沃海恩圣安东尼医院临床药学 p 杰拉德·布朗夫曼 加拿大魁北克省蒙特利尔麦吉尔大学医学与健康科学学院肿瘤学系 q 加拿大魁北克省蒙特利尔麦吉尔大学诊断放射学系 r 加拿大魁北克省蒙特利尔麦吉尔大学蒙特利尔神经病学研究所 s 加拿大魁北克省蒙特利尔麦吉尔大学犹太综合医院西格尔癌症中心戴维斯夫人研究所 t加拿大魁北克省蒙特利尔
先前已从皮肤活检中收获了原代真皮犬成纤维细胞。使用人类端粒酶逆转录酶 (hTERT) 对真皮犬成纤维细胞进行永生化,以从每个供体 (PDK4 野生型或 wt/wt、PDK4 杂合子或 wt/del、PDK4 纯合子或 del/del) 中创建永生化细胞系。这些细胞将在含有 10% 胎牛血清和 1% 抗生素抗真菌剂的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基的 6 孔板中接种和培养。将使用 QuickExtractTM DNA 提取溶液提取 DNA。将使用 Thermo Scientific NanoDropTM 1000 分光光度计对 DNA 进行分光光度定量。提取 DNA 后,将对 PDK4wt/wt 和 PDK4del/del 细胞中的 PDK4 基因进行 PCR 扩增。扩增后,将使用 DNA Clean & Concentrator™-25 试剂盒纯化 PCR 产物以进行裸 DNA 切割反应。兽医学学生将测试一种名为 KKH 的新酶,它是 Cas9 变体,可在不同的 PAM 或识别位点切割 DNA。我们使用计算方法确定 KKH 将在 PDK4 基因中所需的切割位点切割,从而有效地为插入双链寡脱氧核苷酸 (dsODN) 探针腾出空间。该 DNA 片段将通过同源重组将缺失的 16 个碱基对添加到基因中。已经设计了两个 dsODN,它们包含“丢失的外显子”序列以及与 DCM1 相关的缺失的 16 个碱基对,并将通过核转染反应测试它们是否掺入细胞 DNA 中。dsODN1 由 DCM1 突变两侧的 300 个碱基组成,dsODN2 由突变两侧的 350 个碱基组成。正向和反向引物组将由 Integrated DNA Technologies(IDT,美国爱荷华州科勒尔维尔)合成。将对每个引物组进行 PCR 梯度,退火范围为 dsODN1 的 55°C 至 67°C 和 dsODN2 的 54°C 至 64°C。目标是将缺失的 PDK4 片段插入切割的 DNA 中,并将在体内缺失 16 个碱基对的成纤维细胞中使用核转染试验进行测试。此后,将从细胞中提取 DNA 并评估整合效果。
粗体:血氧水平依赖性 SDF:侧流暗场 CLE:共聚焦激光显微内镜 DSA:数字减影血管造影 ICG-VA:吲哚菁绿视频血管造影 MDU:微血管多普勒超声 FUS:功能性超声 CEU:造影增强超声 声明:所有作者均已阅读并批准稿件,并同意以下要求:
o高风险血管手术时有脑缺血的风险(例如,主动脉弓,胸腔主动脉的手术,颈动脉内部切除术,颅内动脉内部畸形,支气管动脉畸形或乳化液或灌木囊肿的过程) with high risk of cord injury (e.g., spinal cord tumor, spinal fracture with cord compression, mechanical spinal distraction, correction of scoliosis surgery) o Other procedures with a high risk of potential injury to essential nervous system structures (e.g., Interventional neuroradiology, neuroma of peripheral nerve, leg lengthening procedure when there is traction on the sciatic nerve).术中神经生理学监测对脊柱的手术不符合上述标准,这在医学上不需要(例如标准的前宫颈椎间盘切除术和融合,宫颈椎间盘置换术)。腰部手术期间术中神经生理学监测不符合上述标准是不需要的(例如腰椎融合,椎板切除术,椎间盘切除术)。术中神经生理学监测在任何其他迹象上都不是医学上必需的,包括以下任何迹象:•监测硬膜外注射•在放射线消融/神经膜上监测•在放置脊髓刺激剂或肠内疼痛泵期间监测•监测。术中神经生理学监测在未达到上述标准时被视为研究。在前宫颈脊柱手术期间对复发性喉神经的术中神经生理监测不符合食管外科手术的标准,被认为是研究的。由于缺乏美国食品和药物管理局的批准,术中对视觉诱发电位的术中监测被认为是研究的,因此使用经颅磁刺激对运动诱发电位进行了术中监测被认为是研究的。
小鼠乳腺由导管树组成,导管树内衬上皮细胞,每个乳头顶端都有一个开口。上皮细胞在乳腺功能中起着重要作用,是大多数乳腺肿瘤的起源。将感兴趣的基因引入小鼠乳腺上皮细胞是评估上皮细胞基因功能和生成小鼠乳腺肿瘤模型的关键步骤。这一目标可以通过将携带感兴趣基因的病毒载体注射到小鼠乳腺导管树中来实现。注射的病毒随后感染乳腺上皮细胞,带来感兴趣的基因。病毒载体可以是慢病毒、逆转录病毒、腺病毒或腺病毒相关病毒 (AAV)。这项研究展示了如何通过小鼠乳腺导管内注射病毒载体将感兴趣的基因传递到乳腺上皮细胞中。携带GFP的慢病毒用于显示传递基因的稳定表达,携带Erbb2(HER2/Neu)的逆转录病毒用于显示致癌基因诱导的非典型增生性病变和乳腺肿瘤。