开始之前要做的事情■将样品平衡到室温(15–25°C)。■将水浴或加热块加热到56°C以供步骤4使用。■在步骤11中平衡缓冲液或蒸馏水到室温。■确保根据第16页的说明准备了缓冲液AW1,Buffer AW2和Qiagen蛋白酶。■如果在缓冲液中形成沉淀物,请在56°C下孵育。
0.5 g称重为聚丙烯离心管(50 mL体积),并使用离子 - 脱位树脂类型的DNA提取和纯化试剂盒(Qiagen Genomic-TIP)提取DNA并纯化DNA。在样品中加入7.5 ml的G2缓冲液 *1和20μL-淀粉酶 *2,与涡旋混合器剧烈混合,并在37°C下孵育1小时。加入7.5 mL的G2缓冲液,200μl蛋白酶K*3和20μlRNASEA*4,搅拌直至样品保持在管的底部,并在50°C下孵育1小时。同时,将离心管反转2-3次以混合样品。接下来,在4°C下在5,000 x g处离心15分钟,然后将所得的上清液(在2 mL部分中)转移到五个2 ml管(总计10毫升) *5中,在4°C下在20,000 x g处离心15分钟。从每2毫升管中收集1 ml上清液,以提前用1 mL qBT缓冲液 *1平衡的Qiagen Genomic-TIP 20/g,并提前加载(总计5 mL)。然后用QC缓冲液 *1洗涤尖端3次,然后转移到新的离心管和预热的QF缓冲液
使用HSOP 461和HSOP 466(Spectratating GuideLine),使用T细胞的磁珠细胞分选 T细胞受体谱分型。 使用商业试剂盒(QIAGEN)的RNA提取以及遵循制造商的说明和内部标准操作程序HSOP499。 Reverse transcription for cDNA synthesis using commercial kit (Invitrogen) and in-house standard operating procedures HSOP 780 RT-PCR using HSOP 467 Fragment analysis HSOP 468 AutoMACS Pro (MiltenyiBiotec), GorScript TM First-Strand Synthesis System for RT-PCR (Promega), QiagenHot Star Taq DNA Polymerase, G Storm 4 PCR machine and Proflex机器,3500XL遗传分析仪(FSOP 491)。T细胞受体谱分型。使用商业试剂盒(QIAGEN)的RNA提取以及遵循制造商的说明和内部标准操作程序HSOP499。Reverse transcription for cDNA synthesis using commercial kit (Invitrogen) and in-house standard operating procedures HSOP 780 RT-PCR using HSOP 467 Fragment analysis HSOP 468 AutoMACS Pro (MiltenyiBiotec), GorScript TM First-Strand Synthesis System for RT-PCR (Promega), QiagenHot Star Taq DNA Polymerase, G Storm 4 PCR machine and Proflex机器,3500XL遗传分析仪(FSOP 491)。
可用于分离DNA(例如Qiagen dneasy套件)。研究人员应选择满足其特定需求的协议。有机提取方法(例如苯酚或Trizol)不应用于纯化总DNA,因为它们可以抑制文库制备过程中使用的酶,因此增加了文库制备失败的风险。如果使用基于苯酚或Trizol的方法是不可避免的(例如,要获得高分子DNA),应保证这些化合物的总去除(这意味着需要在提取后需要额外的清理步骤)。•为了获得最佳结果,请使用已快速冷冻的新鲜样品或样品
数量:5 µg 产品描述 人类神经束膜细胞基因组 DNA (HPNC gDNA) 是使用 Qiagen Allprep DNA/RNA Mini Kit 从早期传代人类神经束膜细胞中制备的。通过分光光度计和凝胶电泳测试基因组 DNA 的质量和纯度。基因组 DNA 可立即用于各种分析,包括:SNP 分析、DNA 甲基化分析、Southern 印迹和 PCR。ScienCell Research Laboratories 的基因组 DNA 对研究人员来说既方便又经济,因为它无需获取昂贵的组织来分离 DNA。质量控制
数量:5 µg 产品描述 人类神经束膜细胞基因组 DNA (HPNC gDNA) 是使用 Qiagen Allprep DNA/RNA Mini Kit 从早期传代人类神经束膜细胞中制备的。通过分光光度计和凝胶电泳测试基因组 DNA 的质量和纯度。基因组 DNA 可随时用于各种分析,包括:SNP 分析、DNA 甲基化分析、Southern 印迹和 PCR。ScienCell Research Laboratories 的基因组 DNA 对研究人员来说既方便又经济,因为它无需获取昂贵的组织来分离 DNA。质量控制
此概况说明了我们的Go Greener计划中的产品包含。该程序标识了Qiagen投资组合中的产品,这些产品与我们的传统产品相比更加环保。与标准面板相比,QIASEQ靶向DNA Pro面板通过切割移液步骤减少塑料废物,从而减少了需要减少68%的移液器尖端。所需的试剂数量也较低,尤其是对于索引板,它已经从两个单独的板转变为一个具有独特双索引(UDIS)的单个板。面板的稳定性有所改善,从7个月的保质期提高到12个月。
方法,将来自摩洛哥栽培树的单叶用于本研究。DNA提取。根据制造商的说明,使用Illumina Truseq套件构建了配对的测序库。该库是在配对端,2×150bp格式的Illumina Hi-Seq平台上进行排序的。用三件v0.33(Bolger,Lohse和Usadel 2014)修剪了所得FASTQ文件的适配器/引物序列和低质量区域。修剪序列由黑桃v2.5组装(Bankevich等人2012)随后使用Zanfona V1.0(Kieras 2021)进行完成步骤,以基于相关物种中保守的区域加入附加的重叠群。