默认情况下,将RNase H处理的RNA结构折叠为RNA结构,以创建用于DNA聚合酶I(pol I)的底物以启动DNA复制。反义RNA是由重叠基因产生的,如果允许该基因与RNA底漆相互作用,则会诱导不启动DNA复制的替代折叠。由于反义RNA的浓度与质粒副本成正比,因此作为拷贝控制负反馈回路。(b)10
图6。LC-MS数据来自RNase H消化。 (a)覆盖的寡核苷酸和十分封闭的离子色谱图的覆盖。 div> decaped(红色迹线)与封顶(蓝色痕迹)的比率在理论值的4%之内。 (b)样品中检测到的寡核苷酸最丰富的电荷状态(第8)的同位素峰。 (c)在样品中检测到的十分消化产物中最丰富的电荷状态(第7)的同位素峰包膜。 将前五峰进行平均,以生成用于测量丰度的提取的离子色谱图。 色谱图和光谱是在自由式软件1.8.2中生成的。LC-MS数据来自RNase H消化。(a)覆盖的寡核苷酸和十分封闭的离子色谱图的覆盖。div> decaped(红色迹线)与封顶(蓝色痕迹)的比率在理论值的4%之内。(b)样品中检测到的寡核苷酸最丰富的电荷状态(第8)的同位素峰。(c)在样品中检测到的十分消化产物中最丰富的电荷状态(第7)的同位素峰包膜。将前五峰进行平均,以生成用于测量丰度的提取的离子色谱图。色谱图和光谱是在自由式软件1.8.2中生成的。
描述Thermo Scientific™First Strand cDNA合成试剂盒是一个完整的系统,用于有效合成mRNA或总RNA模板的第一链cDNA。该试剂盒使用M-Mulv逆转录酶,与AMW逆转录酶相比,RNase H活性较低。酶在37°C下保持活性,适合于9 kb的cDNA合成。套件提供的重组Thermo Scientific™Ribolock™RNase抑制剂可有效保护RNA在高达55°C的温度下免于降解。该套件均配有寡核(DT)18和随机己酯引物。随机六聚体引物与非特异性结合,并用于合成总RNA种群中所有RNA的cDNA。寡(DT)18底漆选择性地向poly(a)RNA的3末端退火,仅从poly(a)尾mRNA中合成cDNA。基因特异性底漆也可以与试剂盒一起使用,以从指定序列中进行质合。与该系统合成的第一链cDNA可以直接用作PCR或实时PCR中的模板。它也是第二链cDNA合成或线性RNA扩增的理想选择。可以将放射性和非放射性标记的核苷酸纳入第一个链cDNA,以用作包括微阵列在内的杂交实验的探针。
描述Thermo Scientific™Transcriptaid™T7高收益转录套件设计用于来自含有T7 RNA聚合酶启动子的DNA模板的高产量在体外转录。该套件含有50 µL反应的试剂。取决于转录长度,每个反应在2小时内从1 µg模板中产生约150 µg RNA(图1),比常规体外转录反应中可实现的10倍。可以扩大反应以产生毫克量的全长RNA。该套件提供了用于转录反应,转录物加载和分析凝胶的所有组件。转录辅助酶混合物含有T7 RNA聚合酶,可方便地用重组Thermo Scientific™Ribolock™RNase抑制剂进行预混合,以确保RNA转录的完整性。dnase I,无RNase,用于有效去除转录反应后模板DNA。包括2x RNA载荷染料溶液为了方便RNA载荷。Thermo Scientific™Riboruler™RNA梯子,高范围,即用凝胶上的RNA尺寸和定量量化的辅助工具。ntps在单个管中提供,以合成非放射性标记的探针或限制的RNA的灵活性。
化学和解决方案。氯化镁(MGCL 2),碳酸氢铵(NH 4 HCO 3),L-甘氨酸,Trizma®碱基,Tween-20,乙醇胺(EA),N-(3-二甲基氨基氨基丙基)-N'-乙基甲基二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二酰基(EDC) bovine serum albumin (BSA), sodium hydroxide, sodium chloride, 4-morpholineethanesulfonic acid monohydrate (MES), hydrochloric acid, formic acid (FA), streptavidin-alkaline phosphatase from Streptomyces avidinii conjugate (Strep-ALP) and lysozyme from chicken egg white were purchased from Merck (意大利米兰)。磷酸钾(KH 2 PO 4),二氯磷酸二硫酸氢钾(K 2 HPO 4),磷酸钠二迪巴斯二硫酸二硫代十二碳水化酸盐(Na 2 HPO 4·12H 2 O),氯化钾和无rnase含水量和无RNase水的含量是从Carlo Erba(Cornaredo Erba(Cornaredo)(Cornaredo)(Cornaredo)(Cornaredo)(Cornaredo),Milan,Milan,Milan,Milan,Milan,Italan,Italan,Italy。氢喹酮双磷酸(HQDP)由Metrohm Italiana(Origgio,意大利Varese)提供。通过Milli-Q Element A10系统(Millipore,旧金山,加利福尼亚州,美国)获得了去离子水,并用于缓冲溶液制备。缓冲溶液的组成如下。无RNase缓冲液用于所有RNA适体的实验中。单链DNA序列购自Biomers.net(德国ULM),而C80RNA序列是从代替(Carlo Erba,Carlo Erba,Milan,意大利)。所有的寡核酸均处于干燥状态,适当地等分以避免反复的冻结/解冻周期。在Milli-Q水中以DNA寡核素进行了冻干等分试样的重悬,而C80RNA的无RNase水中的水则达到了供应商建议的100μM终浓度。库存溶液存储在-20°C。MES缓冲液:25毫米ME(pH 5.0); Tris缓冲液:0.1 MTrizma®基础,5 mm MGCL 2(pH 7.4); TRIS-T缓冲液:0.1 MTrizma®基础,5 mm MGCL 2,0.05%w/vtween®20(pH 7.4); TRIS盐水缓冲液:20 mMTrizma®基础,5 mM MGCL 2,0.1 M NaCl(pH 7.4);含镁离子(PBS-MG 2+)的磷酸盐缓冲盐盐水:1.5 mm kH 2 PO 4,8 mm Na 2 HPO 4,137 mm NaCl,2.7 mm KCl,1 mm MGCL 2(pH 7.4);从Thermo Fisher Scientific(美国马萨诸塞州沃尔瑟姆)购买磷酸盐缓冲盐水(PBS)作为干燥粉末,其溶解后具有以下成分:0.1 m Na 2 HPO 4,0.15 m NaCl(pH 7.2); Tris甘氨酸钾(TGK)缓冲液:25 mMTrizma®基础,192 mm L-甘氨酸,5 mm K 2 HPO 4(pH 8.3)。
在接收P/N Cls157950:1小瓶40 µL SSDNA 7K 7K 7K梯子仅用于研究的情况下,在-25°C至-15°C下以-25°C至-15°C,仅用于研究用途,不用于诊断程序属性:无色解决方案,每瓶装:40 µL,总浓度:70 µL,NG/ng/ng。存储缓冲液组件:50 mm乙酸钾,20mm乙酸乙酸钾,10mm乙酸镁,20mm EDTA,〜6%甘油,pH〜7.8。存储:存储在-25°C至-15°C下。避免多个冻融周期。产品的等分试样可在2°C至8°C下最多存储一周。不要存放在无霜的冰箱中。处理:使用无DNase和无RNase试剂,DNA低结合管以及屏障移液尖端。融化说明:融化,最多可在37°C下完成,完全融化后几秒钟涡流,然后放在冰上。为避免多个冻融周期,请在无DNase和无RNase,DNA低结合管中制作等分试样,并具有典型的日常使用量。SSDNA 7K梯子在3个冻融周期后没有明显的稳定性损失。收到后的保质期:建议存储,直到在小瓶上指定到期为止。
In the version of the article initially published, in the “Effector-triggered immunity” sec- tion, the sentence now reading “Bacteria detect phage by monitoring transcription using a constitutively produced antitoxin ToxI, which is depleted when phage inhibit transcription, releasing the RNase ToxN that aborts phage infection” read “Bacteria link phage detection to cell death by monitoring transcription using组成性产生的抗毒素毒素,当噬菌体抑制转录,释放毒素并杀死细胞时会耗尽。”这已在本文的HTML和PDF版本中进行了纠正。
DNA聚合酶I(大肠杆菌)是一种固有的3´→5´(校对)和5´→3´核酸酶活性的不可用疗法的DNA聚合酶,此外还具有较低和非特异性核糖核酸酶H活性。5´→3´外核酸酶Acɵvity在生长的DNA链之前去除核驱动器,从而可以进行划痕 - 翻译。因此,DNA聚合酶I(大肠杆菌)不显示链脱位活性,可用于通过尼克翻译来标记DNA,并与DNase I或第二链cDNA合成,或与RNase H. DNA聚合酶I(E. coli)接受Modified nitified nucified Nucified Nucified Nicified Nicified Nicified Nicified 生物素 - ,二氧素蛋白,荧光标记的核苷酸)作为DNA合成的底物。生物素 - ,二氧素蛋白,荧光标记的核苷酸)作为DNA合成的底物。
由于用胰腺RNase治疗分离的核蛋白的结构作用不仅导致SedimentAtion系数和RNA含量的降低(33),而且还导致大小(5)。从病毒粒子中提取的 RNA显示出具有感染性所必需的显着二级结构的特性。 当将RNA制备加热后,然后快速冷却时,残留感染力I〜以盐浓度保留。 缓慢的冷却比快速冷却更有生存期。 这些条件不利于进行比较的脊髓灰质炎病毒RNA的存活(54)。 与其他Alphavirusee Hyperhromicity已被证明了RNA(WEE:TM = 57.5°C(57)JRNA显示出具有感染性所必需的显着二级结构的特性。当将RNA制备加热后,然后快速冷却时,残留感染力I〜以盐浓度保留。缓慢的冷却比快速冷却更有生存期。这些条件不利于进行比较的脊髓灰质炎病毒RNA的存活(54)。与其他Alphavirusee Hyperhromicity已被证明了RNA(WEE:TM = 57.5°C(57)J
