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An-High-Throughput-hethods-tgf-β-信号 -
上皮到间质转变（EMT）是一个细胞分化过程，上皮细胞会失去许多上皮特征，同时获得间充质，成纤维细胞样性质，从而导致细胞 - 细胞接触降低和运动性降低。虽然被认为是正常胚胎发育所需的基本过程，但EMT被认为是由恶性上皮肿瘤采用的，以促进其转移扩散。刺激EMT的中心是生长因子配体的TGF-β超家族，它主要通过TGF-β/SMAD信号通路引起受体介导的反应。在这些途径中，受体介导的SMAD（R-SMAD）蛋白是主要下游效应子分子，其活性通过受体介导的磷酸化调节。配体诱导的受体活化的大小和持续时间影响SMAD磷酸化的水平，进而影响下游细胞反应的大小。本研究描述了在TGF-β诱导的EMT的细胞模型中定量评估对TGF-β/SMAD途径激活的生化和细胞反应的高通量方法。使用二维和三维（球形）模型，在不同水平的生物学复杂性（生化，细胞和多细胞）中检查了途径激活的效果。总的来说，这些方法能够全面评估TGF-β/SMAD途径激活，该途径可与高通量分析平台相提并论。
径向神经胶质通过整合素A V B 8 -TGF B 1信号促进小胶质细胞发育
小胶质细胞多样性来自固有的遗传程序与环境衍生的信号之间的相互作用，但是这些过程如何在发育中的大脑中展开和相互作用尚不清楚。在这里，我们表明在径向胶质祖细胞中表达的径向胶质胶质表达的整联蛋白β8（ITGB8）激活了小胶质细胞表达的TGF B 1，允许小胶质细胞发育。在这些祖细胞中，ITGB8的域限制缺失建立了互补的区域，其发育中被阻止的“变形障碍”小胶质细胞持续到成年。在没有自分泌TGF B 1信号传导的情况下，我们发现小胶质细胞采用了类似的畸形表型，从而导致神经运动症状与ITGB8突变小鼠几乎相同。相比之下，缺乏TGFβ信号传感器SMAD2和SMAD3的小胶质细胞具有较小的极化表型，相应地相应的严重神经运动功能障碍。最后，我们表明，非典型（独立于SMAD的）信号传导部分抑制了疾病和发育相关的基因表达，为在损伤或疾病背景下采用小胶质细胞发育信号通路提供了令人信服的证据。
衰老和免疫力中的TGF-β途径
作为生物年龄，它们会经历逐渐的细胞和分子变化，并伴随着许多生理功能的下降。因此，它们对年龄相关疾病和状况的敏感性增加（López-Otín等，2013; Son等，2019; Melzer等，2020）。衰老领域中的许多基本发现都来自于小型自由生命的线虫C.秀丽隐杆线虫（Murphy and Hu，2013年）的研究。秀丽隐杆线虫已被用作模型有机体数十年来，由于其寿命短，大约3周，尺寸小，透明的身体，易于实验的实验室维护，遗传障碍和保守的生物学途径（Brenner，1974; C.秀丽隐杆线虫测序联盟，1998年）。大约83％的秀丽隐杆线虫蛋白质组具有人类同源物（Lai等，2000），超过50％的人蛋白质编码基因在秀丽隐杆线虫中具有同源物（Sonnhammer和Durbin，1997; Kuwabara and Durbin; Kuwabara和O'Neil，2001; Harris等，2004; Harris等，2004）。胰岛素/IGF-1样信号通路（IIS）是调节秀丽隐杆线虫寿命的第一个途径。Div>随后发现编码唯一胰岛素/IGF-1样受体（Kimura等，1997）的突变，与Wildtype（WT）相比，寿命增加了一倍（Kenyon等，1993）。在秀丽隐杆线虫中的进一步研究揭示了调节衰老的其他途径的作用，包括AMP激活的蛋白激酶（AMPK）和雷帕霉素（MTOR）的机械靶标（Zhang等，2020）。此外，转化生长因子β（TGF-β）途径正在成为寿命和健康衰老的调节剂，需要进一步研究。面临衰老最大程度影响的系统之一是免疫系统，其中与年龄相关的下降称为免疫衰老。这种下降表现出感染易感性的增加，疫苗接种反应降低以及癌症和自身免疫性疾病的风险增加。导致哺乳动物这些生理的潜在变化是：免疫细胞库减少，细胞内在缺陷对淋巴细胞的固有缺陷以及增加的炎症（Akha，2018）。衰老和免疫力可以通过共同的分子机制来调节，例如IIS，TGF-β，MTOR和核因子Kappa B（NF-κB）
TGFβ 作为 TNBC 的临床可转化疗法...
简单总结：特定/靶向疗法已被证明可有效治疗某些癌症。不幸的是，目前尚无针对三阴性乳腺癌 (TNBC) 的靶向疗法，这就是这种乳腺癌亚型与患者预后不良相关的原因。虽然人们非常关注新疗法的开发，但化疗后的心脏毒性问题却常常被忽视，尽管它是癌症幸存者死亡的主要原因。本综述旨在讨论 TGF- β 信号传导与其在调节心脏纤维化和重塑中的作用之间的联系，以及其在 TNBC 肿瘤进展、癌症干细胞富集、化学耐药性和复发中的作用。我们共同强调了调节 TGF- β 作为一种针对乳腺癌患者发病和死亡的两个最大原因的方法。
肿瘤相关的巨噬细胞：癌症的潜在治疗策略和未来前景
在癌症患者中描述了识别表达TGF-β的免疫调节细胞的转化生长因子-β（TGF-β）特异性T细胞的抽象背景。TGF-β衍生的肽疫苗接种调节肿瘤微环境，并在胰腺癌动物模型（PC）中显示出临床作用。TGF-β-表达调节细胞在PC中尤其升高，并且可能阻止对免疫检查点抑制剂（ICI）的临床反应。因此，在本研究中，我们研究了TGF-β特异性T细胞免疫在用ICI治疗的PC患者中与放疗中2阶段2阶段研究（CHOCKPAC）合并的重要性。Methods Immune responses to a TGF- β -derived epitope entitled TGF- β -15 as well as epitopes from Clostridium tetani (tetanus) and influenza were measured in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) with interferon- ɣ enzyme-linked immunospot assays.PBMC。相关性。生存。TGF -β-15特异性T细胞被分离并扩展并检查，并通过流式细胞仪识别自体调控免疫细胞。对32例患者的PBMC结果分析了对TGF-β衍生的标题为TGF -β-15的免疫反应。与患有弱或无TGF-β特异性免疫反应的患者相比，治疗开始时具有强大TGF-β特异性免疫反应的患者具有更长的不良进展和总生存期。这在多元分析中仍然很重要。弱和强TGF -β特异性反应的患者对病毒抗原的反应相似。此外，我们表明来自临床响应者的TGF -β特异性T细胞特异性反应并裂解自体的调节性免疫细胞。最后，模仿TGF -β-15疫苗接种，我们表明在体外用TGF -β-15表位反复刺激增强了对TGF -β-15的免疫反应。结论强大的TGF -β-15特异性免疫反应与PC患者ICI/放射治疗后的临床益处和改善的生存率有关。重要的是，
长的非编码RNA THBS1-AS1通过调节TGFBR1
心脏纤维化与心血管疾病的不良预后有关，导致心脏依从性降低，最终导致心力衰竭。最近的研究已经确定了长未编码RNA（LNCRNA）在心脏纤维化中的作用。然而，许多LNCRNA在心脏纤维化中的功能仍有待表征。通过在压力过载诱导的心脏纤维化的小鼠模型上进行全转录组测序和生物信息学分析，我们筛选了一个称为血小板素1反义1（THBS1-AS1）的关键LNCRNA，这与心脏纤维化呈正相关。体外功能研究表明，THBS1-AS1的沉默改善了TGF-β1对心脏成纤维细胞（CF）激活的影响，THBS1-AS1的过表达表现出相反的作用。一项机械研究表明，THBS1-AS1可以旋转miR-221/222来调节TGFBR1的表达。此外，在TGF-β1刺激下，miR-221/222或敲低TGFBR1的强制表达显着逆转了通过进一步CF激活引起的THBS1- AS1过表达。体内，活化CFS中THBS1-AS1的特异性敲低显着缓解了小鼠的横向主动脉收缩诱导的（TAC诱导的）心脏纤维化。最后，我们证明了人类THBS1-AS1也可以通过调节TGFBR1来影响CF的激活。总而言之，这项研究表明，LNCRNA THBS1-AS1是一种潜在的新型心脏纤维化调节剂，可以作为治疗心脏纤维化的靶标。
长的非编码RNA THBS1-AS1通过调节TGFBR1
引言心脏纤维化与心血管疾病的不良预后有关，是由急性或慢性刺激（例如心肌梗死和高血压）诱导的最重要的病理生理过程之一（1，2）。随着机械刺激，压力/体积超负荷，体液和其他病理因素，心脏成纤维细胞（CFS）增殖并转变为肌纤维细胞，导致细胞外基质（ECM）的分泌过多分泌，降低心脏合规性和心脏合规性和心脏稳定性和心脏重塑（最终）和最终的心脏失败（3）。当前，缺乏有效的CF激活和纤维化临床治疗方法。因此，发现心脏纤维化和阐明机制的关键分子对于心血管治疗具有很高的价值。新兴证据探索了长期的非编码RNA（LNCRNA）作为调节剂和各种心血管疾病的潜在治疗靶标（5-7）。lncRNA是一种非编码RNA类，长度超过200个核苷酸，可以通过蛋白质结合影响染色质结构和转录因子的功能（8）。lncRNA还通过其线性结构与microRNA（miRNA）或mRNA结合，影响mRNA翻译，剪接，降解和其他过程（9）。由于某些固有的困难，例如其保守主义，二级结构效应和细胞型特异性表达谱，只有少数具有与心脏纤维化相关的确定生物学功能的LNCRNA。但是，与心脏纤维化有关的关键LNCRNA仍有待确定。TGF-β信号通路通过调节细胞增殖分化和凋亡（10），在心脏纤维化中起着重要作用（10）。但是，TGF-β信号通路的广泛抑制剂，例如
以洞穴小泡为靶点，将针对 TGF-β 的双特异性抗体泵入患病肺部，可实现超低剂量治疗效果
长期以来，全身治疗中寻求的“灵丹妙药”对于大多数组织中的疾病靶点仍未实现，理论上是因为血管内皮阻碍了被动组织进入和完全靶向作用。我们设计了第一个“双精度”双特异性抗体，其中一个臂对可精确结合肺内皮并驱动主动递送，另一个臂对可精确阻断肺组织内 TGF- β 效应功能。靶向小窝进行跨内皮泵送已被证明对于在一小时内将大部分注射的静脉剂量精确递送到肺部以及在鼠肺炎模型中将治疗效力提高 1000 倍以上至关重要。超低剂量（μg/kg）可抑制炎症细胞浸润、水肿、肺组织损伤、疾病生物标志物表达和 TGF- β 信号传导。主动与被动经血管输送精准治疗的巨大优势揭示了一种新的有前景的药物设计、输送和治疗模式，可供推广和临床试验。
靶向小窝以将TGF-β的双特异性抗体泵入患病的肺中，使超剂量治疗功效2
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版本的版权持有人发布于2022年9月15日。 https://doi.org/10.1101/2022.09.12.507679 doi：Biorxiv Preprint
CRISPR 介导的 TGFBR2 敲除使人类卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞对 TGF-β 信号产生抗性
摘要 背景 卵巢癌 (OvCa) 患者 T 细胞浸润升高与生存率提高之间的相关性表明内源性肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL) 具有一定程度的抗肿瘤活性，可用于 OvCa 免疫治疗。我们之前优化了一种体外 OvCa TIL 扩增用于过继细胞疗法的方案，该方案目前正在我们机构的临床试验中进行测试 (NCT03610490)。在此成功的基础上，我们开始对 OvCa TIL 进行基因改造，以克服肿瘤微环境中存在的关键免疫抑制因素。在这里，我们介绍了在患者来源的 OvCa TIL 中 CRISPR/Cas9 介导的 TGF-β 受体 2 (TGFBR2) 敲除的临床前优化。方法 从四名患者手术切除的肿瘤样本中生成 OvCa TIL，并进行 CRISPR/Cas9 介导的 TGFBR2 敲除，然后进行快速扩增方案。全面评估了 TGFBR2 定向 gRNA 的 TGFBR2 敲除效率和脱靶活性。此外，还测定了 TGFBR2 敲除对 TIL 扩增、功能和下游信号传导的影响。结果在四个独立的 OvCa TIL 样本中测试的 5 个 gRNA 实现了从 59±6% 到 100%±0% 的 TGFBR2 敲除效率。TGFBR2 敲除的 TIL 对免疫抑制 TGF-β 信号传导具有抗性，表现为缺乏 SMAD 磷酸化、缺乏对 TGF-β 刺激的整体转录变化、在有和没有 TGF-β 的情况下促炎细胞因子的分泌同样强烈、并且在存在 TGF-β 的情况下细胞毒性增强。CRISPR 修饰本身不会改变 OvCa TIL 的体外扩增效率、免疫表型或 TCR 克隆多样性。对于临床转化而言，重要的是，对 CRISPR 脱靶效应的全面分析表明，我们前两个靶向 TGFBR2 的 gRNA 没有脱靶活性的证据。结论 CRISPR/Cas9 介导的基因敲除在患者来源的 OvCa TIL 中是可行且有效的，可使用临床可扩展的方法。我们实现了高效且特异性的 TGFBR2 敲除，产生了一种扩增的 OvCa TIL 产品，该产品对免疫抑制剂具有抗性