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多路复用时分辨荧光共振能量转移超高通量筛选测定法，用于靶向SMAD4 – SMAD3 – DNA复合物
转化的生长因子-BETA（TGFβ）信号通路在建立免疫抑制性肿瘤微环境中起着至关重要的作用，使抗TGFβ剂成为癌症免疫疗法的重要领域。然而，针对上游细胞因子和受体的当前抗TGFβ药物的临床翻译仍然具有挑战性。因此，小分子抑制剂的发展特异性靶向TGFβ途径的下游主调节器SMAD4，将采取一种替代方法，具有明显的抗TGFβ信号传导的替代方法。在这项研究中，我们介绍了在超高通量筛选（UHTS）1536孔板格式中基于细胞裂解物的多路复用时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）测定。该测定法可以同时监测SMAD4和SMAD3之间的蛋白质 - 蛋白质相互作用，以及SMADS及其共识DNA结合基序之间的蛋白质-DNA相互作用。多路复用的TR-FRET分析表现出高灵敏度，从而使单氨基酸分辨率下的Smad4-Smad3-DNA复合物进行了动态分析。此外，多路复用的UHTS分析证明了筛选小分子抑制剂的鲁棒性。通过对FDA批准的生物活性化合物库进行试验筛选，我们将gambogic Acid和Gambogenic Acodic鉴定为潜在的HIT化合物。这些概念验证的发现强调了我们优化的多重TR-FRET平台的大规模筛选的实用性，以发现针对SMAD4-SMAD3 – DNA复合物作为新型抗TGFβ信号剂的小分子抑制剂。
肿瘤相关的巨噬细胞：癌症的潜在治疗策略和未来前景
在癌症患者中描述了识别表达TGF-β的免疫调节细胞的转化生长因子-β（TGF-β）特异性T细胞的抽象背景。TGF-β衍生的肽疫苗接种调节肿瘤微环境，并在胰腺癌动物模型（PC）中显示出临床作用。TGF-β-表达调节细胞在PC中尤其升高，并且可能阻止对免疫检查点抑制剂（ICI）的临床反应。因此，在本研究中，我们研究了TGF-β特异性T细胞免疫在用ICI治疗的PC患者中与放疗中2阶段2阶段研究（CHOCKPAC）合并的重要性。Methods Immune responses to a TGF- β -derived epitope entitled TGF- β -15 as well as epitopes from Clostridium tetani (tetanus) and influenza were measured in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) with interferon- ɣ enzyme-linked immunospot assays.PBMC。相关性。生存。TGF -β-15特异性T细胞被分离并扩展并检查，并通过流式细胞仪识别自体调控免疫细胞。对32例患者的PBMC结果分析了对TGF-β衍生的标题为TGF -β-15的免疫反应。与患有弱或无TGF-β特异性免疫反应的患者相比，治疗开始时具有强大TGF-β特异性免疫反应的患者具有更长的不良进展和总生存期。这在多元分析中仍然很重要。弱和强TGF -β特异性反应的患者对病毒抗原的反应相似。此外，我们表明来自临床响应者的TGF -β特异性T细胞特异性反应并裂解自体的调节性免疫细胞。最后，模仿TGF -β-15疫苗接种，我们表明在体外用TGF -β-15表位反复刺激增强了对TGF -β-15的免疫反应。结论强大的TGF -β-15特异性免疫反应与PC患者ICI/放射治疗后的临床益处和改善的生存率有关。重要的是，
应用 CRISPR 技术解析水牛黄体中 EGR1 在前列腺素 F2 alpha 诱发的黄体退化中的功能作用
摘要背景：PGF2α 对于诱导黄体退化至关重要，而黄体退化又会降低孕酮的产生。早期生长反应 (EGR) 蛋白是 Cys2-His2 型锌指转录因子，与细胞增殖、存活和凋亡密切相关。在给予黄体溶解剂量的 PGF2α 后，观察到 EGR1 的快速升高。EGR1 参与许多基因的转录激活，包括 TGFβ1，它在黄体退化过程中起着重要作用。方法：本研究在水牛黄体细胞中进行，旨在更好地了解 EGR1 在 PGF2α 诱导的黄体退化过程中对 TGFβ1 转录激活的作用。培养水牛中期黄体的黄体细胞，并用不同剂量的 PGF2α 处理不同时间。分析了编码孕酮生物合成途径内酶 (3βHSD、CYP11A1 和 StAR)、Caspase 3、AKT 的 mRNA 相对表达以确认黄体溶解事件的发生。为了确定 EGR1 是否通过诱导 TGFβ1 表达参与 PGF2α 诱导的黄体退化，我们使用 CRISPR/Cas9 敲除了 EGR1 基因。结果：本实验确定了黄体细胞中的 EGR1 蛋白表达是否对 PGF2α 治疗有反应。对 EGR1 和 TGFβ1 mRNA 的定量分析显示在 PGF2α 诱导后 12 小时水牛黄体细胞中显著上调。为了验证 PGF2α 通过 EGR1 依赖机制刺激 TGFβ1 表达的作用，我们敲除了 EGR1。用 PGF2α 刺激 EGR1 切除的黄体细胞，观察到 EGR1 KO 不调节 PGF2α 诱导的 TGFβ1 表达。在 PGF2α 处理的 EGR1 KO 黄体细胞中，与维持 12 小时的 PGF2α 处理的野生型黄体细胞相比，Caspase 3 的 mRNA 表达显着增加。我们还研究了 EGR1 对类固醇生成的影响。用 PGF2α 处理的 EGR1 KO 黄体细胞与用 PGF2α 处理的野生型黄体细胞相比，孕酮浓度或 StAR mRNA 表达均无显着差异。结论：这些结果表明，EGR1 信号传导并不是在调节 PGF2α 诱导的 TGFβ1 信号传导以进行黄体溶解中发挥作用的唯一因素。关键词：水牛，黄体，EGR，CRISPR/Cas9，黄体溶解
miR-145膀胱癌中的信号轴
在泌尿膀胱癌（UBC）的患者中，经常观察到高肿瘤复发，需要预后和药物反应的生物标志物。化学耐药性和随后的癌症复发是由肿瘤引发细胞的亚群（即癌症干细胞（CSC））驱动的。然而，化学疗法诱导的CSC富集中的潜在分子机制在很大程度上尚不清楚。在这项研究中，我们发现在吉西他滨治疗期间lncRNA-low表达在肿瘤中（lncRNA-let）在化学抗性的UBC中被下调，并伴有CSC群体的富集。敲低LNCRNA-LET增加了UBC细胞的干性，而LNCRNA-LET延迟的吉西他滨诱导的肿瘤复发的强迫表达。此外，通过LNCRNA-LET启动子中的SMAD结合元件（SBE），通过吉西他滨治疗诱导的TGFβ /SMAD信号传导过度激活TGFβ /SMAD信号的过度激活LNCRNA-LET。因此，降低的lncRNA-LET增加了NF90蛋白稳定性，进而抑制了miR-145的生物发生，随后导致了由升压水平HMGA2和KLF4升高的CSC的积累。用TGFβRI的临床相关特异性抑制剂LY2157299用LY2157299处理吉西他滨耐药的异种移植物，使它们敏感到吉西他滨，并显着降低了体内肿瘤性的。值得注意的是，TGFβ1的过表达，加上LNCRNA-LET水平降低和miR-145的水平预测UBC患者的预后不良。总的来说，我们证明了吉西他滨诱导的TGFβ1通过增强癌细胞的干性促进UBC化学耐药性，使lncRNA-LET/NF90/miR-145轴失调。TGFβ1/lncRNA-let/miR-145的组合变化在UBC结果中提供了新的分子预后标记。因此，针对此轴可能是治疗UBC患者的一种有希望的治疗方法。
海报 2780
• 自然杀伤 (NK) 细胞是先天免疫系统的强大效应器，可以直接识别和杀死肿瘤细胞，因此使其成为癌症细胞疗法的有吸引力的选择。 • 由于 NK 细胞存活所需的关键细胞因子（例如白细胞介素 15 (IL-15)）水平低，以及肿瘤内在免疫抑制机制（例如肿瘤微环境中高水平的转化生长因子 β (TGFβ)）缺乏持久性，导致 NK 细胞效力降低。1 此外，当 NK 细胞活化后 CD16 被切割时，NK 细胞发挥抗体依赖性细胞毒性 (ADCC) 的能力会受损。2 Editas 专有的基于 AsCas12a 的基因编辑方法用于修改 iNK 细胞，以克服这些生物学限制并增强 NK 细胞功能。 • 我们假设，细胞因子诱导的 SH2 蛋白 (CISH) 基因（IL-2/IL-15 信号的负调节剂）和 TGFβ 受体 2 (TGFβR2) 基因的 DKO 会改善 NK 细胞效应功能，并使其对 TGFβ 介导的抑制产生抵抗力。此外，我们假设，膜结合 IL-15 (mbIL-15) 和 CD16 进入 NK 细胞的 DKI 会延长 NK 持久性，并在与 ADCC 诱导的肿瘤靶向抗体（如曲妥珠单抗）结合时增加细胞毒性。
综述 从肿瘤到骨：生长因子受体是癌症转移的关键因素
本综述文章探讨了生长因子与骨转移之间的复杂关联，生长因子在几种恶性肿瘤（即乳腺癌、前列腺癌、肺癌和肾癌）的发展中起着至关重要的作用。我们讨论的重点是生长因子的关键受体，包括表皮生长因子受体 (EGFR)、转化生长因子-β (TGF β )、血管内皮生长因子受体 (VEGFR) 和成纤维细胞生长因子受体 (FGFR)。这些受体对于细胞活动（包括生长、分化和存活）至关重要，在癌症扩散以及肿瘤与骨环境之间的相互作用中起着重要作用。我们讨论了骨转移的潜在机制，特别强调了生长因子受体与骨微环境之间的相互作用。EGFR信号传导特别增强了破骨细胞的发展过程和溶骨性病变的形成，尤其是在乳腺癌和肺癌中。TGF β受体通过释放TGF β在溶骨性和成骨性转移中发挥作用，TGF β吸引癌细胞并促进骨重塑。这是前列腺癌扩散到骨骼的关键因素。FGFR和VEGFR分别在骨形成和肿瘤血管生成过程中的功能突出了这些相互作用的复杂性和多样性。该综述强调了针对这些受体的靶向治疗可以中断肿瘤发展和骨退化周期。治疗方法包括关注 VEGF/VEGFR、EGF/EGFR、FGF/FGFR 和 TGF β /TGF β R 通路。这些包括各种化合物，例如小分子抑制剂和单克隆抗体，它们已显示出干扰肿瘤诱导的骨骼改变的潜力。本文讨论了临床试验和临床前模型，深入了解了各种治疗方法的有效性和局限性。最后，本研究简明而全面地总结了目前关于骨转移生长因子受体的知识和治疗策略。这突出了理解肿瘤扩散到骨骼的微环境中生长因子受体信号传导的重要性，以及使用靶向疗法来增强骨转移癌症患者治疗效果的可能性。骨转移治疗的进步取决于专门针对恶性肿瘤和骨骼之间复杂关系的治疗方法的开发。
表皮生长因子增强的新型转化生长因子：从非肿瘤组织中分离
摘要 表皮生长因子 (EGF) 可诱导非肿瘤大鼠肾成纤维细胞在细胞培养中发生转化表型，这些转化表型是从成年小鼠的许多非肿瘤组织（包括颌下腺、肾脏、肝脏、肌肉、心脏和大脑）中分离出来的。它们与之前描述的从肿瘤细胞中分离出来的转化生长因子 (TGF) 类似，具体如下：它们可通过酸/乙醇提取，并且是酸稳定的低分子量 (6000-10,000) 多肽，需要二硫键才能起作用，并且它们会导致非肿瘤指示细胞的锚定非依赖性生长，而这些细胞在没有它们的情况下不会在软琼脂中生长。从雄性小鼠的颌下腺中对这些 TGF 进行部分纯化，结果表明它们不同于 EGF。与之前描述的细胞外 TGF 不同，但与来自肿瘤细胞的某些细胞 TGF 一样，它们通过 EGF 增强其促进锚定非依赖性生长的能力。颌下腺 TGF 蛋白的等电点接近中性。在 Bio-Gel P-30 上进行色谱分析，然后进行高压液相色谱分析，总纯化率达到 22,000 倍。在 EGF 存在下进行测定时，最纯化的蛋白质在 1 ng/ml 的软琼脂中具有诱导生长的活性。这些数据进一步证明了肿瘤形成可能是由非肿瘤生化过程的定量而非定性改变引起的。我们最近描述了 (1) 从几种肿瘤小鼠组织（包括由莫洛尼肉瘤病毒 (MSV) 转化的成纤维细胞和最初由化学致癌物诱导的可移植膀胱癌）中分离和表征一组低分子量、酸稳定性多肽（称为转化生长因子 (TGF)）。这些多肽是可通过酸/乙醇提取的细胞内蛋白质。类似的细胞外转化多肽，称为肉瘤生长因子 (SGF)，是由 De Larco 和 Todaro (2) 从培养的 MSV 转化小鼠成纤维细胞的条件培养基中首次分离出来的。最近报道了几种其他细胞外转化多肽，它们来源于人类 (3) 和动物 (4) 来源的肿瘤细胞。所有这些多肽在应用于培养的未转化、非肿瘤指示细胞时都会引起以下一系列变化，这些变化为 TGF 提供了一个操作性定义：(i) 单层细胞密度依赖性生长抑制的丧失；(ii) 单层细胞过度生长；(iii) 细胞形状改变，导致指示细胞呈现肿瘤表型；(iv) 获得锚定独立性，从而能够在软琼脂中生长。未转化的非肿瘤细胞不会在软琼脂中形成逐渐生长的菌落，并且培养细胞的这种不依赖锚定的生长特性与体内肿瘤的生长具有特别高的相关性（5-7）。
玛丽·乔斯·古尔曼斯博士教授...
Marie-JoséGoumans教授是莱顿大学医学中心（LUMC）的心血管细胞生物学杰出教授。她为了解信号通路，尤其是TGFβ和BMP在心血管发育，功能和疾病中的作用做出了开创性的贡献。她的研究探讨了心脏发育，再生和心血管疾病背后的复杂机制，特别关注内皮细胞行为和祖细胞功能。她的实验室研究了BMP和TGFβ信号传导中的破坏如何有助于诸如肺动脉高压（PAH）等疾病及其在心脏再生中的功能。古尔曼斯教授于1999年在Hubrecht实验室获得博士学位，在那里她在早期小鼠发育过程中研究了TGFβ信号传导。在博士工作后，她在荷兰癌症研究所和瑞典乌普萨拉的路德维希癌症研究所进行了博士后研究。在这段时间里，她对内皮细胞如何解释和响应TGFβ信号传导的改变进行了关键发现。2003年，她被任命为乌得勒支大学医学中心的助理教授，在那里她开始开创有关心脏祖细胞及其心脏修复潜力的研究。自2012年任命LUMC以来，Goumans教授试图揭示TGF-β/BMP信号传导的复杂细节，不仅是心脏发育和再生的关键指南，而且还作为心血管疾病发作和发展的关键标志。在她的演讲中：“ BMP10的细节中的魔鬼：它如何发出信号，塑造心脏并标记心血管健康和疾病”，她将深入研究影响心脏功能和病理学的基本途径，对BMP10在心脏病方面有更深入的了解，既可以作为关键调节剂和诊断标记在心脏病健康中。
2023年报告根据反对强迫劳动和童工供应链法（加拿大）的战斗
引言该报告是由Via Rail Canada Inc.（“ Via Rail”）根据反对供应链法中强迫劳动和童工的战斗（“ ACT”）的作品，该法案旨在通过征收报告义务来实施加拿大国际承诺，以促进反对强迫劳动和童工的斗争。通过该法案被认为是“在加拿大或其他地方生产，购买或分配商品的政府机构”，因此遵守该法案中规定的相关报告义务。本报告介绍了通过铁路采取的行动，以防止和降低强迫劳动或童工在其供应链活动中使用的风险。通过HFR Inc. - Via Tgf Inc.（Via Rail的子公司TGF Inc。）将准备并发布自己的报告。
2025; 15（5）：1966-1986。 doi：10.7150/thno.103175研究论文TBX3塑造免疫抑制微环境并诱导免疫疗法抗性
背景：识别预测免疫疗法功效的生物标志物并发现联合疗法的新靶标是改善膀胱癌（BLCA）患者预后的关键要素。方法：首先，我们使用来自多个公共数据库的数据探索了正常和Pan-Cancer组织中TBX3的表达模式以及TBX3与免疫微环境之间的相关性。然后，我们组合了各种技术，包括大量RNA测序，单细胞RNA测序，高通量细胞因子阵列，功能实验，Procartaplex多重免疫测定和组织全景组织量化测定，以证明TBX3将Immunosupsporcement tamorsument（bla）塑造为bla s inrosement（bla）。结果：我们将TBX3确定为与BLCA中的免疫抑制微环境相关的关键因素。我们发现TBX3主要在恶性细胞中表达，其中TBX3高肿瘤细胞增加了TGFβ1的分泌，从而促进了与癌症相关的成纤维细胞（CAF）浸润，从而形成了一种免疫抗抑制性的微节流。我们进一步证明，TBX3通过与TGFβ1启动子结合来增强TGFβ1的表达，并阻止TGFβ1抵消TBX3的免疫抑制作用。此外，TBX3通过降低GZMB + CD8 + T细胞的比例来降低CD8 + T细胞的杀菌效率，并敲击TBX3与抗PD-1处理相结合的TBX3增加了CD8 + T细胞的浸润增加了VIVO中的CD8 + T细胞浸润和降低CAF。最后，我们发现TBX3预测了现实世界中免疫疗法队列和多个公共队列中的免疫疗法功效。我们还验证了TBX3 +恶性细胞与CD8 + T细胞之间的反比关系以及组织微阵列中与CAF的正相关关系。结论：总而言之，TBX3通过诱导免疫抑制微环境促进BLCA的进展和免疫疗法抗性，而靶向TBX3可以增强BLCA免疫疗法的功效。