•使用上面概述的修改协议,可以使用Zymobiomics™DNA/RNA小型RNA小型RNA小型RNA小型RNA稳定器收集的人类粪便样品可以成功处理DNA稳定剂。•修改的协议可产生高产量和良好的DNA质量。•实时PCR证明了标准协议的修改不会影响下游分析。分离的DNA不含任何抑制剂。
•样品来源 - 细菌,真菌,原生动物,病毒,病毒,线粒体和宿主DNA和RNA与≤50mg的土壤,哺乳动物/植物/种子,5-20 mg(湿重1)的真菌/细菌细胞,生物细胞,生物纤维,生物纤维,水和瑞巴群有效分离。•样品均质化 - Zymobiomics™创新裂解系统确保对微生物细胞壁的完全裂解和准确的微生物分析,无偏见。分别提供裂解管(S6012-50)和96孔裂解架(S6002-96-7)。•样品保存 - DNA/RNA Shield™裂解细胞,使核酸酶和感染剂失活,是在环境温度下样品存储和运输的理想选择。•大小 - DNA和总RNA,包括小/microRNA(≥17nt)。
•样品来源 - 细菌(包括内生孢子),真菌,原生动物,藻类,病毒,线粒体和宿主DNA从≤50mg的哺乳动物粪便中有效分离,≤100mg土壤和5 - 20 mg(湿型)细菌/fungal Cells 2,fungal cells 2,pairms&watermms and watermms和pater。•珠子跳动系统 - 创新的Zymobiomics™裂解系统可以使微生物细胞壁的完全均质化/破坏和准确的微生物DNA分析,无偏见。为了确保无偏裂解,建议使用Zymobiomics™微生物社区标准(请参阅附录C)对每个珠饰装置进行校准。•DNA纯度 - 高质量,无抑制剂DNA用Zymobiomics™DNase/RNase无水水洗脱,适合所有下游应用,包括PCR和下一代测序。
• 样本来源 — 从 ≤ 200 mg 的哺乳动物粪便、≤ 250 mg 的土壤和 50 – 100 mg(湿重)的细菌/真菌细胞 2、生物膜和水 3 中有效分离细菌(包括内生孢子)1、真菌、原生动物、藻类、病毒、线粒体和宿主 DNA。• 珠磨系统 — 创新的 ZymoBIOMICS™ 裂解系统可以完全均质化/破坏微生物细胞壁,并准确进行微生物 DNA 分析,无偏差。为确保无偏差裂解,建议使用 ZymoBIOMICS™ 微生物群落标准(见附录 C)校准每个珠磨设备。• DNA 纯度 — 用 ZymoBIOMICS™ 无 DNase/RNase 水洗脱高质量、无抑制剂的 DNA,适用于所有下游应用,包括 PCR 和下一代测序。
。cc-by-nd 4.0国际许可证。是根据作者/筹款人提供的预印本(未经同行评审证明)提供的,他已授予Biorxiv的许可证,以在2021年9月4日发布的此版本中在版权所有者中显示预印本。 https://doi.org/10.1101/2021.09.09.03.458847 doi:biorxiv preprint
摘要背景:通过生物化学转化从可再生生物质中获得的生物燃料和增值生物化学品已引起广泛关注,以满足全球可持续能源和环境目标。异丁醇是一种四碳醇,具有许多优点,使其成为有吸引力的化石燃料替代品。运动发酵单胞菌是一种高效的厌氧产乙醇细菌,使其成为生物精炼厂的有前途的工业平台。结果:在本研究中,研究了异丁醇对运动发酵单胞菌的影响,并构建了各种生产异丁醇的重组菌株。结果表明,运动发酵单胞菌亲本菌株能够在低于 12 g/L 的异丁醇存在下生长,而浓度高于 16 g/L 会抑制细胞生长。运动发酵单胞菌中异丁醇生产需要整合编码 2-酮异戊酸脱羧酶的异源基因,例如来自乳酸乳球菌的 kdcA。此外,在由四环素诱导启动子 Ptet 驱动的含有 kdcA 基因的重组菌株中,异丁醇产量从接近零提高到 100–150 mg/L。另外,我们确定在表达 kdcA 的重组 Z. mobilis 菌株中过表达异源 als 基因和两个参与缬氨酸代谢的天然基因( ilvC 和 ilvD )可将丙酮酸从乙醇生产转移到异丁醇生物合成。这一工程将异丁醇产量提高到 1 g/L 以上。最后,确定了含有由 Ptet 驱动的合成操纵子 als - ilvC - ilvD 和由组成型强启动子 Pgap 驱动的 kdcA 基因的重组菌株大大提高了异丁醇产量,最高滴度约为 4.0 g/L。最后,异丁醇生产受到通气的负面影响,通气较差的烧瓶中会产生更多的异丁醇。结论:这项研究表明,kdcA 与合成异源操纵子 als - ilvC - ilvD 的过度表达对于将丙酮酸从乙醇生产中转移出来以增强异丁醇的生物合成至关重要。此外,这项研究还提供了一种利用缬氨酸代谢途径在 Z. mobilis 中生产其他丙酮酸衍生生物化学物质的策略。关键词:Zymomonas mobilis、生物燃料、异丁醇、代谢工程、丙酮酸衍生生物化学物质、2-酮异戊酸脱羧酶 (Kdc)