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揭示 Crispr-Cas9 技术在纠正 SCD 基因突变方面的治疗潜力
摘要 镰状细胞病是一种遗传性疾病，由 HBB 基因突变导致正常血红蛋白被异常血红蛋白取代而引起。对于这种疾病，只有少数暂时的、对症高效的治疗方法；因此，迫切需要找到更有效的永久性治疗方法。已经考虑进行一项实验，使用 CRISPR-Cas9 基因编辑技术编辑导致镰状细胞病的 HBB 基因突变。我们从 SCD 患者中纯化了 HSC，然后使用 CRISPR-Cas9 系统编辑 HBB 基因。通过 HPLC 检测编辑后的细胞的血红蛋白生成情况，并通过 PCR 检测突变状态。我们还描述了功能分析和涉及临床前动物的研究，以测试编辑后的 HSC 的功效。HPLC 和 PCR 分析的结果显示健康个体和 SCD 患者的血红蛋白谱不同。对患者 HSC 的 CRISPR-Cas9 编辑的计算机模拟分析预测，治疗后，正常血红蛋白可能会从 8.2 g/dL 增加到 10.2 g/dL。预计编辑后的 HSC 将表现出 30-50% 的基因校正效率，并产生具有正常形态和增强的抗镰状细胞的红细胞。本文描述的工作概述了通过基因突变的直接作用，CRISPR-Cas9 对 SCD 治疗的治疗增强作用的转变。尽管这种技术已显示出巨大的前景，但需要进一步优化递送方法、脱靶效应和转化为临床试验。这些发现强调了对用于治疗 SCD 等遗传疾病的基因编辑方法的进一步研究。
![b'figure 1。类似药物的小分子与miR21结合。我们基于共同的2--（（5-（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶素2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，我们合成了一系列密切相关的化合物。两种称为45（a）和52（b）的化合物在中间NM范围内具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出显着降低的亲和力（5-10倍差）（C）。进行了1d 1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m的小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的50 mM脱位Tris的小分子，以及250 mm nacl，50 mm kcl，50 mm kcl和2 mm kcl和2 mm mmmgcl 2。随着量增加的小分子与RNA结合，1 h线宽增加，NMR峰高度相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低计算结合小分子的比例。曲线的饱和度为1，表明存在具有子-UM亲和力的主要单位位点。相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过拟合数据](/simg/a\a5e6054f458942da9d0fd315e2dff3ce571b5880.webp)
b'figure 1。类似药物的小分子与miR21结合。我们基于共同的2--（（5-（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶素2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，我们合成了一系列密切相关的化合物。两种称为45（a）和52（b）的化合物在中间NM范围内具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出显着降低的亲和力（5-10倍差）（C）。进行了1d 1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m的小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的50 mM脱位Tris的小分子，以及250 mm nacl，50 mm kcl，50 mm kcl和2 mm kcl和2 mm mmmgcl 2。随着量增加的小分子与RNA结合，1 h线宽增加，NMR峰高度相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低计算结合小分子的比例。曲线的饱和度为1，表明存在具有子-UM亲和力的主要单位位点。相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过拟合数据
b'figure 1。类似药物样的小分子与MIR21结合。我们基于常见的2--（（5-（5-（piperazin-1-基）吡啶-2-基）氨基）吡啶[3,4-D]吡啶蛋白-4（3H） - 一种结构，并分析了它们与PRE-MIR-21结合使用通用NMR ASSAIN 1，2。在NM中部范围内，称为45（a）和52（b）的两种化合物具有很强的结合活性。通过移动单个氮的位置产生的化合物（表1）显示出明显降低的亲和力（5-10倍差）（C）。1 H NMR配体检测到的滴定，以评估候选化合物的结合：将浓度的RNA添加到含有100 m小分子的溶液中，该溶液中含有50 mM pH 6.5的氘化TRI的缓冲液中的小分子，以及250 mm NACL，NACL，50 mm KCL，KCL和250 mm KCL和2 mmmmmmmmmgcl 2。随着增加量的小分子与RNA结合，1小时线宽增加，而NMR峰高相应降低。相对于内标（DSA），从峰高的降低降低来计算结合小分子的分数。曲线饱和为1的值表示存在具有子-UM亲和力的主要单位位点；相比之下，无关的RNA结合化合物Palbociclib以低得多的值饱和，并显示了几乎线性滴定曲线，这表明了非特异性结合（有关所有测试化合物的结构，请参见表1）。可以通过将数据点拟合到结合等温线来计算近似结合常数。化合物52的数据拟合对应于近似K d = 200 nm，而化合物45和49（表1）均具有K d = 600 nm。
procyanidin B1是KV10.1通道的一种新颖和特异性抑制剂，抑制了肝癌的演变
最近，我们和其他组表明，电压门控离子通道KV10.1通道的异常表达有助于多种肿瘤发生过程。有效的KV10.1选择性抑制剂，既是研究这种神秘通道的生理功能的药理工具，又是抗肿瘤药物开发的潜在潜在客户。在这项研究中，从葡萄种子中提取的天然化合物procyanidin b1被鉴定为一种有效的，特定的抑制剂，可以抑制以浓度依赖的方式抑制KV10.1通道（IC 50 = 10.38±0.87μm），但可以忽略其他含量，但可以忽略其他含量。 KCNQ1。证明procyanidin B1直接与KV10.1通道结合并抑制其电流，而不会增加细胞内Ca 2+。此外，发现KV10.1的C-Linker域中的三个氨基酸，I550，T552和Q557对于形成具有KV10.1通道的Procyanidin B1的结合袋至关重要。此外，procyanidin b1通过抑制KV10.1抑制肝癌细胞（HU-7细胞，HEPG2细胞）的迁移和增殖，但在KV10.1中不抑制kv10.1在kv10.1中持续表达的细胞系。接下来，我们测定了procyanidin B1对细胞系衍生异种移植小鼠模型的肿瘤抑制作用。我们的数据表明，15 mg/kg procyanidin B1可以显着抑制肿瘤的生长（HEPG2），抑制率约为60.25％。与顺铂相比，procyanidin b1对小鼠的正常代谢没有影响。目前的工作表明procyanidin b1是一种有效的肝癌抗肿瘤药物，并且还证实了KV10.1可以作为潜在的特异性药物靶标。
抗氧化活性和毒理学的毒理学意义
这项研究检查了雌性Wistar大鼠中Azanza Garckeana水提取物的抗氧化活性以及安全性。在随机分布28个女性Wistar大鼠（平均体重= 159.25±3.32 g）之后，分为四（4）个组，该组包含七个大鼠（A-D），每组含有7只大鼠（动物），每天给予A组的大鼠每天给予A组中的大鼠，而A. garckeana Fruf Pulp的水组则为或255岁，均为55岁的A. garckeana fulp and rats and rats and 255，MG和2500，res the in 125，和500 c。和D分别为21天。使用已建立的方法在大鼠上检查了一些抗氧化活性以及肾脏和肝功能指标。与对照相比，对测定的所有肝功能指标均未显示出显着（p> 0.05）的差异。与对照组相比，与对照组相比，肝酶的浓度显示肝丙氨酸氨基转移酶，肝脏天冬氨酸氨基转移酶，乳酸脱氢酶和肝磷酸磷酸酶没有显着差异（P> 0.05）。相反，所有肾脏功能指数在提取后均显示出显着增加（p <0.05），表明对肾功能的潜在影响。在肾脏和肝脏的水平上观察到显着降低（P <0.05），而肾脏和肾脏丙二醛则降低，而肾脏和肝超氧化物歧化酶以及肝马内醛显着升高（P <0.05）。总体而言，A。garceana的水性果肉提取物对所研究剂量时的肝脏指数没有破坏作用。但是，由于研究剂量的肾功能指数在肾功能指数中观察到的生化改变，可能对肾脏产生显着副作用。
铜绿假单胞菌对塑料的生物降解
储存的PAP（OGI/AKAMU）具有包括细菌在内的几种微生物。该研究的重点是鉴定与储存在房间和冷藏温度的PAP（OGI/AKAMU）相关的细菌。通过在无菌水中浸泡黄玉米（500 g）产生测定的PAP，并允许发酵72小时，然后用家用搅拌器磨碎，并用平纹细布筛分以获取PAP。子宫颈抹片分为两个相等的部分。一个部分存储在室温下，另一部分分别存储在冰箱中，分别为9天。每24小时，每个样品都被带到实验室进行检查。分别将串行稀释的PAP样品接种到De Man Rogosa和Sharpe琼脂，营养琼脂，甘露醇盐琼脂，沙门氏菌Shigella琼脂和MacConkey琼脂中，并在37℃孵育24小时。使用菌落计数器计数营养琼脂平板上的微生物菌落数量。对分离株进行了表型表征，并在主要的乳酸细菌上进行的分子鉴定。表型表征揭示了分离的细菌为乳酸杆菌，大肠杆菌，沙门氏菌sp。和金黄色葡萄球菌。分子表征证实了主要的细菌为乳杆菌FPS。在室温样品（±3.78cfu/ml）下，总细菌计数要多于冷藏温度（±0.41cfu/ml）。在室内回收的细菌与冷藏温度之间存在显着差异（p> 0.05）。获得的结果确认了储存PAP和冰箱温度的不安全的室温，可以更好地存储它们。
前列腺癌疗法：
基于小分子放射性二辨偶联物的成像程序靶向纤维细胞激活蛋白（FAP）最近已成为诊断多种肿瘤的强大工具。然而，放射性标记的FAP靶向剂的治疗潜力是由于它们在肿瘤病变中的短暂停留时间所致。在这项工作中，我们介绍了Bioncofap的发育和体内表征，Bioncofap是一种新的二聚体FAP结合基序，具有延长的肿瘤停留时间和有利的肿瘤与器官比率。方法：对重组人FAP测定了bioncofap及其单价Oncofap类似物的结合正确。对177个Lu-Oncofap-Dotaga（177 Lu-oncofap）和177 lu-bioncofap-dotaga（177 lu-bioncofap）进行了临床前实验，对带有FAP阳性HT-1080肿瘤的小鼠进行了。结果：Oncofap和Bioncofap显示出对溶液中重组人FAP的比较，但二价bioncofap更加平静地与固定固体支撑固定的靶标结合。在一项比较生物分布研究中，177 lu-bioncofap表现出比177 lu-oncofap的肿瘤摄取更稳定，长时间的肿瘤摄取（分别为20 vs. 4个百分比注射剂量/g，在注射后24小时）。值得注意的是，177 lu-bioncofap表现出较低的肾脏摄取的有利的肿瘤与器官比率。当以治疗剂量对肿瘤小鼠进行治疗剂量时，均表现出有效的抗肿瘤效率。结论：177 lu-bioncofap是对癌症的放射性治疗的有前途的候选者，具有良好的体内肿瘤与器官比率，较长的肿瘤停留时间和有效的抗癌效率。
原位缺失揭示了拟南芥中细胞内免疫受体基因及其共表达基因表达的调控成分
图 8 LHY1 和 bHLH28 在 SNC1 表达调控中的作用。（a）来自 DAP-seq 数据库的 SNC1 基因座中两个转录因子 LHY1 和 bHLH28 的结合。这是从浏览器图像中重新绘制的。结合用彩色块表示，高度代表检测到的结合水平。（b）野生型或 bon1 中突变体 bhlh28 和 lhy1 的生长表型。植物在 22°C 下 16 小时/8 小时光照下生长。（c）通过定量实时聚合酶链反应 (qRT-PCR) 测定 bhlh28 和 lhy1 单突变体和双突变体与 bon1 的相对 SNC1 表达。肌动蛋白被用作参考基因，并将表达水平与 Col-0 进行比较。显示的是三次生物学重复的平均值，误差线表示标准差。不同字母表示基因型之间的统计学显著差异（p < 0.05，学生 t 检验）。（d）LHY1-GFP 和 bHLH28-GFP 与 SNC1 启动子区的染色质免疫沉淀 (ChIP)-qPCR 分析。分别在“A”位点和“B”位点（如 a 所示）检测到 LHY1-GFP 和 bHLH28-GFP 的结合。显示了两个独立生物学重复的数据。“N”位点（如 a 所示）是 SNC1 基因体上的一个区域，在 DAP-seq 数据库中未检测到 LHY1 或 bHLH28 的结合信号。“GFP”是用抗 GFP 抗体孵育的样品，“NoAb”是不含抗 GFP 抗体的样品。不同字母表示通过单因素方差分析（ANOVA）得出的基因型间统计学差异具有显著性（p < 0.05）[彩色图可在 wileyonlinelibrary.com 上查看]
GAM-COVID-VAC（ADV5/ADV26 COVID-19疫苗）对内皮功能，凝结和血小板激活的生物标志物的影响
COVID-19疫苗在控制Covid-19大流行方面起着关键作用。 尽管总体认为是安全的，但Covid-19疫苗接种与罕见但严重的血栓形成事件有关，主要发生在腺病毒载体疫苗的背景下。 需要更好地理解疫苗诱导的高凝性和血栓性状态的机制，以改善疫苗安全性。 We assessed changes to the biomarkers of endothelial function (endothelin, ET-1), coagulation (thrombomodulin, THBD and plasminogen activator inhibitor, PAI) and platelet activation (platelet activating factor, PAF, and platelet factor 4 IgG antibody, PF4 IgG) within a three-week period after the first (prime) and second (boost) doses of GAM-COVID-VAC，ADV5/ADV26 VECTORED COVID-19疫苗。 使用ELISA测定法测定了从疫苗收集的血浆（n = 58）。 参与者根据其基线SARS-COV-2特异性血清学结果通过先前的Covid-19暴露进行分层。 我们观察到循环ET-1的主要后电机显着增加，与碱基相比，增强剂量后的水平持续。 ET-1剂量2之后的升高在没有事先COVID-19的疫苗中最为明显。 事先的covid-19也与剂量后1 PAI的轻度增加有关。 疫苗接种与第二次疫苗剂量后的ET-1升高有关，而没有看到包括PF4 IgG在内的其他生物标志物的明显改变。 COVID-19疫苗接种后持续的内皮激活的作用值得进一步研究。COVID-19疫苗在控制Covid-19大流行方面起着关键作用。尽管总体认为是安全的，但Covid-19疫苗接种与罕见但严重的血栓形成事件有关，主要发生在腺病毒载体疫苗的背景下。需要更好地理解疫苗诱导的高凝性和血栓性状态的机制，以改善疫苗安全性。We assessed changes to the biomarkers of endothelial function (endothelin, ET-1), coagulation (thrombomodulin, THBD and plasminogen activator inhibitor, PAI) and platelet activation (platelet activating factor, PAF, and platelet factor 4 IgG antibody, PF4 IgG) within a three-week period after the first (prime) and second (boost) doses of GAM-COVID-VAC，ADV5/ADV26 VECTORED COVID-19疫苗。使用ELISA测定法测定了从疫苗收集的血浆（n = 58）。参与者根据其基线SARS-COV-2特异性血清学结果通过先前的Covid-19暴露进行分层。我们观察到循环ET-1的主要后电机显着增加，与碱基相比，增强剂量后的水平持续。ET-1剂量2之后的升高在没有事先COVID-19的疫苗中最为明显。事先的covid-19也与剂量后1 PAI的轻度增加有关。疫苗接种与第二次疫苗剂量后的ET-1升高有关，而没有看到包括PF4 IgG在内的其他生物标志物的明显改变。COVID-19疫苗接种后持续的内皮激活的作用值得进一步研究。
酵母接种对碳浸渍葡萄酒中细菌发育的接种效果
摘要：碳浸渍（CM）Vinifientation是一种非常传统的方法，它允许在不大量设备投资的情况下节省能源，获得高质量的葡萄酒。由于其特殊性，CM酿酒意味着更高的微生物改变风险。这项工作研究了细菌种群沿碳浸渍葡萄酒的演变，随着有或没有酵母接种的阐述。以相同的方式研究了两种酵母菌接种的策略：“ Pied de Cuve”和活跃的干酵母（ADY）种子。为此，分析了三个条件：自发发酵（无接种），“ pied de Cuve”技术和ADY接种。对于每种条件，比较了两种酿酒方法：碳浸渍和命运和压碎的标准方法（DC）。在不同的发酵阶段遵循细菌进化（乳酸和乙酸细菌）。最后，分析了获得的葡萄酒（pH和挥发性酸度）。在CM产生的非接种葡萄酒中，观察到细菌种群的高发育（乙酸细菌的计数左右，约4.3 log cfu/ml），并且葡萄酒的葡萄酒值为挥发性酸度的高值（> 1.5 g/l），在接种的葡萄酸盐和0.5元素中没有发生。挥发性酸度）。因此，作为ADY种子的“ pied de Cuve”的控制似乎是避免CM vini拟合细菌改变的有效工具。
血清铁蛋白水平及其与妊娠糖尿病的关联
背景：如果在早期进行筛查和诊断，则可以预防GDM对母亲和孩子的长期影响。已经努力尝试确定可以预测GDM的临床和生化标记。铁蛋白，急性相反应物就是这样的蛋白质。这项研究是为了知道血清铁蛋白水平与怀孕的GDM之间是否存在关联。方法：2020年1月至2021年6月在ESIC-MC-PGIMSR OBG部门进行的前瞻性研究。388名满足纳入标准的妊娠妇女在获得知情的书面同意后被纳入研究，并在妊娠24至28周之间分析了母体血清铁蛋白，并经过统计分析。结果：两个群体人群特征均匹配，并且也与HB％相匹配，从而消除了贫血，这是研究的混杂因素。GDM组的平均血清铁蛋白水平为46.4 ng/mL，非GDM组的平均血清铁蛋白水平为37.3 ng/ml（p <0.001）。使用ROC（接收器操作员特征曲线）血清铁蛋白的切断值为34.7 ng/ml，CI为95％，灵敏度为71％，特异性为63％。结论：在这项研究中，妊娠24-28周的铁蛋白值> 34.7 ng/ml，患有GDM的风险为63％。因此，我们得出结论，升高的血清铁蛋白水平可以用作GDM预测的生化标记。关键词：妊娠糖尿病，血清铁蛋白，血红蛋白，炎症，急性相反应物