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使用 CRISPR 激活剂定制设计本氏烟叶中的代谢物组成
摘要基于 CRISPR 结构的转录调控因子扩展了我们重新编程植物内源基因表达的能力。它们的潜在应用之一是通过激活给定代谢途径中的选定酶来定制植物代谢组。使用之前描述的可多路复用的 CRISPR 激活剂 dCasEV2.1，我们测定了烟草叶中四种不同黄酮类化合物（即柚皮素、圣草酚、山奈酚和槲皮素）的选择性富集。在仔细选择目标基因和引导 RNA 组合后，我们为这四种代谢物中的每一种创建了成功的激活程序，每个程序激活 3 到 7 个基因，单个基因激活水平范围为 4 到 1500 倍。对每个多基因激活程序的黄酮类化合物谱进行代谢分析显示，目标代谢物及其糖基化衍生物的富集明显且具有选择性。值得注意的是，非目标代谢谱的主成分分析根据其活化处理清楚地区分了样品，而层次聚类将样品分成五组，对应于预期的四个高度富集的代谢物组和一个未活化的对照。这些结果表明，dCasEV2.1 是一种强大的工具，可以重新引导代谢通量以积累感兴趣的代谢物，为植物中代谢内容的定制设计打开了大门。
分子网络分析和乙基的抗菌潜力
药物发现中的挑战包括生物合成基因簇，这些基因簇在标准实验室培养条件下保持沉默。另一方面，重新发现已知化合物是不可避免的。因此，一种菌株模拟化合物（OSMAC）方法和分子网络分析目前适用于发现新的生物活性化合物。sinomcrobium sp。pap.21从在西巴布亚州康达瓦西湾收集的海洋沉积物中分离出来。然后，将细菌培养在五种不同的液体培养基（RL1，A1BFE+C，NB，LB和海水）中，并孵育4、5和7天。在每种培养基中分别使用乙酸乙酯（ETOAC）提取细菌培养物，然后进行孵育期，然后进行LC-HRMS测量。分析了总共45种乙酸乙酯提取物，以针对小叶片和大肠杆菌的体外抗菌活性进行体外抗菌活性。通过GNP的分子网络分析表明，三种假定的化合物具有抗菌特性。 来自A1BFE+C培养基中的 EtOAC提取物表现出针对Luteus的抗菌活性。 但是，它们都没有对大肠杆菌进行活跃。 共同，Sinomicrobium sp。 Pap.21产生的生物活性化合物表现出抗菌潜力，特别是针对革兰氏阳性细菌的生物活性化合物。 关键字：抗菌； lc-hrms;分子网络；奥斯马克； Sinomrobium sp。 Pap.21简介通过GNP的分子网络分析表明，三种假定的化合物具有抗菌特性。来自A1BFE+C培养基中的 EtOAC提取物表现出针对Luteus的抗菌活性。 但是，它们都没有对大肠杆菌进行活跃。 共同，Sinomicrobium sp。 Pap.21产生的生物活性化合物表现出抗菌潜力，特别是针对革兰氏阳性细菌的生物活性化合物。 关键字：抗菌； lc-hrms;分子网络；奥斯马克； Sinomrobium sp。 Pap.21简介EtOAC提取物表现出针对Luteus的抗菌活性。但是，它们都没有对大肠杆菌进行活跃。共同，Sinomicrobium sp。Pap.21产生的生物活性化合物表现出抗菌潜力，特别是针对革兰氏阳性细菌的生物活性化合物。关键字：抗菌； lc-hrms;分子网络；奥斯马克； Sinomrobium sp。Pap.21简介Pap.21简介
显微镜观察含 R 环的 DNA
摘要 R 环杂交和电子显微镜已用于测定克隆基因的细胞 RNA 浓度。在质粒 DNA 序列过量的情况下，所有互补 RNA 都被驱动到可通过电子显微镜分析的 R 环结构中。为测定特定 poly(A)+ RNA 的浓度，将质粒 DNA 每 2000-5000 个碱基对与三氧沙林和紫外线交联一次，以 DNA 序列过量的方式与各种已知量的总 poly(A)+ RNA 杂交，并通过用乙二醛处理来稳定 R 环。如有必要，可使用 Sepharose 2B 色谱法去除多余的未杂交 RNA，从而能够可视化较少的转录本。重建实验表明，通过电子显微镜测定含有特定 RNA 环的质粒 DNA 分子的比例可以给出总 poly(A)+ RNA 群体中特定 RNA 重量比例或浓度的准确值。这些方法还用于测定 TRT3 上与序列互补的五种 RNA 物种的浓度，TRT3 是一种重组 DNA 质粒，含有酵母组蛋白 2A 和 2B 基因以及另外三种非组蛋白基因。所描述的方法允许人们可视化丰富和非丰富转录本的 R 环结构，并通过确定含有 R 环的 DNA 分数来估计这些 RNA 物种的浓度。
印鼠客蚤唾液腺中的 FS48 通过阻断电压门控 K + 通道对 NCI-H460 细胞产生体外抗癌作用
电压门控钾通道在多种癌细胞（包括肺癌细胞）的细胞过程中发挥作用。我们前期鉴定并报道了一种来自印鼠客蚤唾液蛋白FS48，在HEK 293T细胞中检测时，其对K v 1.1-1.3通道表现出抑制活性。但FS48是否对表达K v 通道的癌细胞有抑制作用尚不清楚。本研究旨在通过膜片钳、MTT、划痕愈合、transwell、明胶酶谱、qRT-PCR和WB检测方法揭示FS48对K v 通道和NCI-H460人肺癌细胞的影响。结果表明，FS48虽然不能抑制NCI-H460细胞的增殖，但能以剂量依赖性方式有效抑制K v 电流、迁移和侵袭。此外，发现K v 1.1和K v 1.3 mRNA和蛋白质的表达显著降低。最后，FS48降低了MMP-9的mRNA水平，同时增加了TIMP-1的mRNA水平。本研究首次揭示了吸血节肢动物唾液衍生蛋白可以通过K v 通道抑制肿瘤细胞的生理活动。此外，FS48可以作为针对表达K v 通道的肿瘤细胞的靶向化合物。
通过硫糖导向的 Pd 催化不对称 C–H 活化合成轴手性双芳基硫糖苷
尽管联芳骨架在天然化合物和药用化合物 1 中非常普遍，但包含糖部分的结构仍然很少。作为天然存在的物质，一些糖功能化的联芳分子（图 1）已从海棠 2 、火棘（ 1 ） 3 繁缕（ 2 ） 4 和珍珠菜 5 中分离出来，这些植物的茎、树皮、果实和根一直被用于传统中药。化合物 3a,b 存在于云芝 6 和厚朴 7 中，而它们的合成同源物 3c 则被证明 8 是一种很有前途的分子，可用于开发一类新型抗抑郁药物。鞣花单宁是天然多酚，属于可水解单宁类，具有一个或多个六羟基联芳单元，围绕着一个中心葡萄糖核心。 9 其中，1951 年从马豆中分离出来的 corilagin 4 表现出了较强的抗肿瘤活性。10 1995 年，11 对一系列 ( -D-甘露吡喃糖基)联苯底物 5 抑制 E-、P- 和 L- 选择素-IgG 融合蛋白与 HL60 细胞表面表达的 sLex 结合的能力进行了测定。糖功能化联芳分子生物活性的多样性使得它们的硫代类似物成为设计新型生物活性联苯糖苷的主要候选物。事实上，硫糖可以用作糖模拟物，对化学和酶降解都更加稳定。在此背景下，我们最近报道了两种通过
响应性甲氧基聚乙二醇-硫
胶质母细胞瘤 (GBM) 是脑部最常见、侵袭性最强的原发性肿瘤，确诊患者的平均预期寿命仅为 15 个月。因此，迫切需要更有效的疗法来治疗这种恶性肿瘤。包括癌症在内的多种疾病都以高水平活性氧 (ROS) 为特征，这可能是 GBM 的标志，可作为靶向或从中受益。因此，可以利用药物与 ROS 响应分子的共价连接，旨在在相关病理环境中选择性释放药物。在这项工作中，我们设计了一种新的 ROS 响应性前药，通过使用美法仑 (MPH) 与甲氧基聚乙二醇 (mPEG) 通过 ROS 可裂解基团硫缩酮 (TK) 共价偶联，展示了自组装成纳米级胶束的能力。对聚合物前药和适当的对照进行了全面的化学物理表征，并对不同的 GBM 细胞系和“健康”星形胶质细胞进行了体外细胞毒性试验，证实了该前药对健康细胞（即星形胶质细胞）没有任何细胞毒性。将这些结果与非 ROS 响应性对应物进行了比较，强调了 ROS 响应性前药对表达高水平 ROS 的 GBM 细胞的抗肿瘤活性优于非 ROS 响应性前药。另一方面，将这种 ROS 响应性前药与 X 射线照射联合治疗人类 GBM 细胞可增强抗肿瘤效果，这可能与放射疗法有关。因此，这些结果代表了合理设计创新和定制的 ROS 响应性前药的起点，用于 GBM 治疗和与放射疗法联合使用。
评估白化病的抗氧化剂和抗菌潜力萨曼
Albizia Saman是Fabaceae家族的一棵树，自过去以来就一直用于人类医学。先前的研究报告了可能针对多种疾病的药物价值，这可能归因于其多样化的植物化学组成。因此，需要全面研究其针对单个病原体及其机制的功效。本研究是为了涵盖抗菌素，抗炎和抗氧化潜力的全面描述，并重点介绍了白色念珠菌。已经使用了各种微生物方法来测定萨曼提取物的抗菌电位，包括圆盘扩散，扩散，条纹板和各种稀释技术。各种模型在体外和体内测定了抗炎和抗氧化活性。A。萨曼提取物表现出针对已测试病原体C. bilicans的显着抗菌活性。它也有效的抗炎和抗氧化活性。A. 的植物化学筛选 萨曼叶提取物的植物化学筛选显示了几种重要的植物化学物质：单宁，生物碱，碳水化合物，皂苷，类黄酮，蛋白质，酚酚，苯酚和荷兰蛋白。 鉴于A.萨曼提取物的抗菌，抗炎和抗氧化特性，它在新的治疗剂的发展中具有巨大的潜力。 本研究的发现清楚地表明，可以利用Albizia Saman揭示该植物的传统用途，并发现新的治疗用途。A.萨曼叶提取物的植物化学筛选显示了几种重要的植物化学物质：单宁，生物碱，碳水化合物，皂苷，类黄酮，蛋白质，酚酚，苯酚和荷兰蛋白。鉴于A.萨曼提取物的抗菌，抗炎和抗氧化特性，它在新的治疗剂的发展中具有巨大的潜力。本研究的发现清楚地表明，可以利用Albizia Saman揭示该植物的传统用途，并发现新的治疗用途。
β-谷甾醇及其应用前景评估...
摘要 β-谷甾醇是植物中最常见的生物活性植物甾醇之一。它具有消炎、抗氧化、免疫抑制和抗关节炎的作用。炎症与严重疾病有关，这种疾病已导致全球许多人死亡。研究发现，用于治疗炎症的大多数药物都会抑制免疫系统的功能。β-谷甾醇乙酸酯和 β-谷甾醇三醇由 β-谷甾醇合成，并对 2,2-二苯基-1-苦基肼 (DPPH)、2,2-偶氮双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸 (ABTS) 和过氧化氢进行抗氧化测试。此外，还用脂氧合酶、蛋白酶、白蛋白变性抑制和膜稳定化来测定炎症抑制。 β-谷甾醇及其合成产物的 DPPH 和 ABTS 性能结果相当，但 β-谷甾醇乙酸酯的过氧化氢清除活性高于 β-谷甾醇和 β-谷甾醇三醇。三种样品在脂氧合酶抑制方面无显著差异（P<0.05），但 β-谷甾醇三醇在 10 – 100 µg/mL 时具有更高的蛋白酶抑制率。此外，在 150 µg/mL 的测量中，β-谷甾醇乙酸酯在白蛋白变性抑制剂和膜稳定剂方面表现出明显更好的性能。β-谷甾醇合成产物的抗氧化和抗炎活性优于 β-谷甾醇。衍生物 β-谷甾醇对炎症和其他疾病具有增强的治疗效果。关键词：抗氧化剂，衍生物，炎症β-谷甾醇，合成 引言 当自由基与分子氧相互作用时，会产生活性氧，从而导致炎症。类风湿性关节炎、高血压、癌症、心脏病和炎症性肠病等许多疾病都与炎症有关，而炎症又会导致
原发性代谢调整的自然变化决定了模型中的铵耐性。
酶活性通过用500μl的提取缓冲液进行vig口摇（20％（v/v）甘油，1％triton X-100（v/v），50 mm hepes – koH（ph 7.5），10 mm mgcl 2，1 mm edta，1％triton x-100（v/v），1％Triton X-100（V/V），1％Triton X-100（V/V），1％Triton X-100（V/V），1％Triton X-100（V/V），1％Triton X-100（V/V），1％Triton X-100（V/V），1％Triton X-100（v/v），1％X-100（v/v），1％MM emMM MM E.酸，1 mm苯甲米丁，20μM亮肽素，0.5 mM DTT，1 mM苯基甲基磺酰基氟化物，10％聚乙烯基 - 丙吡咯烷酮（W/V）]。葡萄糖激酶（GK），FRUC TOKINAPE（FK），谷氨酸脱氢酶（GDH），磷酸烯醇丙酮酸羧化酶（PEPC），苹果酸脱氢酶（MDH），丙酮酸激酶（PK），总浓酸酯（CM），米尔酸酯（CS），米尔酸酯（CM），米尔酸酯（CM）通过分光光度法测定NADP依赖性的异戊酸脱氢酶（ICDH）酶，并用机器化的微孔板测定法测定（Gibon等人。，2004）。在25°C孵育后，NAD（P）H的演变在340 nm处被固定在340 nm处。通过循环反应在570 nm处测量了GDH的活性，涉及在存在醇脱氢酶和苯嗪硫代硫酸盐的情况下，涉及3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑四唑。cs ac ac titive。（2003）。通过检查生物标准（番茄叶提取物）的恢复，并确保提取物的稀释对活动的估计没有影响，如Bénard和Gibon（2016）所述，可以通过检查生物标准的恢复（番茄叶提取物）来验证。
与体内jetpei
静脉窦。注射后一天，荧光素酶信号只能在肺中检测到，仅在N/P比> 3中检测到（图1B）。在6、8和10（分别为6.4 x 10 4，5.0 x 10 4和3.9 x 10 4光子/s）的N/P比时，肺中的荧光素酶表达水平相似（图1B）。，解剖了包括肺在内的不同器官，并分析器官提取物以表达荧光素酶表达。用发光仪测量荧光素酶信号，并表示为每毫克蛋白质的相对光单位（RLU）。如图1c所示，在整个动物中的生物发光成像与肺提取物中的荧光素酶测定之间观察到了良好的相关性。然而，在器官提取物上进行的荧光素酶测定能够检测到整个动物成像未检测到的荧光素酶表达水平较低。如图1D所示，在器官解剖和均匀化后，使用荧光素酶测定法在脾，肝，肾脏和心脏提取物中确定荧光素酶表达。在脾脏，肾脏和心脏中，8和10的N/P比似乎给出的荧光素酶表达更高，而N/P比6。在肝脏中，8的N/P略优于其他N/P比。因此，应将DNA与体内 - JETPEI®比率和注射条件应适应靶向器官。共同表明，IVIS100成像系统能够检测到99％的发射荧光素酶信号，而其余的1％可以通过在器官提取物上执行的荧光素酶测定法确定。