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通过药物抑制 DNA-PK 和 ATR 实现膀胱癌细胞的有效放射增敏
摘要：本研究旨在分析药物抑制 DNA 损伤反应 (DDR) 靶点 (DNA-PK 和 ATR) 对不同分子/组织学亚型膀胱癌细胞系放射增敏的影响。将 DNA-PK (AZD7648) 和 ATR (Ceralasertib) 抑制剂应用于 SCaBER、J82 和 VMCUB-1 膀胱癌细胞系，我们发现了电离辐射 (IR) 的致敏作用，即随着 IR 剂量的增加，每种药物的 IC 50 都会转移到较低的药物浓度。与此一致，药物暴露会延缓 IR 诱导的 DNA 损伤后的 DNA 修复，这可通过中性彗星试验观察到。Western blot 分析证实了所分析的膀胱癌细胞系中靶向 DDR 通路的特异性抑制，即药物阻断了 Ser2056 位点的 DNA-PK 磷酸化和 Ser317 位点的 ATR 下游介质 CHK1。有趣的是，克隆形成存活试验表明，DDR 抑制与 IR 联合具有细胞系依赖性协同作用。根据 Chou-Talalay 方法计算有和没有 IR 的联合指数 (CI) 值，证实了药物和 IR 剂量特异性协同 CI 值。因此，我们提供了功能性证据，表明 DNA-PK 和 ATR 抑制剂专门针对相应的 DDR 通路，在纳摩尔浓度下延缓 DNA 修复过程。这反过来又会导致强烈的放射增敏作用并损害膀胱癌细胞的存活率。
核酸研究
图4 人类DNA与Vxj探针的Southern印迹杂交。用EcoRI消化人类l~7i，在0.7％琼脂糖凝胶上分级分离并转移到硝基纤维素滤膜上。滤膜上的DNA在37℃下在4X SSC/50％甲酰胺溶液中与仅含VX序列的pHVX6杂交。最后用65℃的2X SSC洗涤滤膜。泳道1，MC116（产生X的伯基特淋巴瘤）DNA；泳道2，BL2（产生X的伯基特淋巴瘤）DNA；泳道3，U266（产生X的人类骨髓瘤）DNA；泳道4，GM1056（产生X的人类淋巴母细胞）DNA；泳道5，SKO-007（U266 HPRT-）DNA；泳道6，CEM（人类T细胞淋巴瘤）DNA；泳道7，PA682（ic产生伯基特淋巴瘤）DNA；泳道8，JI（ic产生伯基特淋巴瘤）DNA；泳道9，Daudi（ic产生伯基特淋巴瘤）DNA；泳道10，DS178（ic产生伯基特淋巴瘤）DNA；泳道11，PAF（SV40转化的人成纤维细胞）DNA；泳道12，Colo 320（人结肠癌）DNA（31-32）。
初级研究员（博士后） - 全职（1,0）或...
初级研究员（博士后）：博士学位。在生物医学计划（药理学，毒理学，生理学或相关领域）中，或等效的学位（相当于ISCED 8级）；根据OP JAC的定义，成为初级研究人员，这是指获得其/她博士学位的研究人员。不超过7年前（例外）； h -index≥3; 高级研究员：博士学位在生物医学计划（药理学，毒理学，生理学或相关领域）中，或等效的学位（相当于ISCED 8级）； Hindex≥8; 在相关研究领域展示了出版活动：最小值。1撰写的首次出版物（最好是≥3），授予活动是一个优势； 研究和科学工作的先决条件； 使用小鼠和大鼠模型进行体内研究的经验，在包括原发性培养物在内的几种类型细胞的体外细胞研究； 具有分子分析方法的经验，尤其是定量RT -PCR，Western印迹，具有图像分析的免疫组织化学； 对英语的积极知识；捷克语作为优势； PC技能； 团队合作技能； 健康能力，道德完整性。
通过高通量测序检测外来 DNA...
尽管几种新型育种技术 (NBT) 的出现正在彻底改变农业生产过程，但尚未提供对其监管所需的技术信息。本文表明，高通量 DNA 测序可有效检测基因组编辑水稻中意外残留的外来 DNA 片段。本文提出了一种简单的 k 聚体检测方法，并通过一系列计算机模拟和实际数据分析进行了验证。数据显示，可以检测到 20 个核苷酸的短外来 DNA 片段，如果平均测序深度为 30 或更多，则忽略该片段的概率为 10 − 3 或更低，而错误命中数平均少于 1。该方法已应用于实际测序数据，并成功证明了外部 DNA 片段的存在和不存在。此外，我们的深入分析还发现了当前 DNA 测序技术的一些弱点。因此，为了进行严格的安全性评估，建议结合使用 k 聚体检测和另一种方法（例如南方印迹分析）。本研究的结果将为 NBT 产品的调控奠定基础，在 NBT 产品的生成过程中，外来 DNA 会被利用。
无细胞的DNA突变作为乳腺癌的生物标志物...
在补充表A4中详细描述了患者的临床病理学特征。这些患者的随访范围为3年至12年。所有接受他莫昔芬的患者患有稳定的疾病6个月至36个月，除了患有13个月的部分反应的患者。在初次诊断时，没有一个患者有远处转移。最初诊断和远处转移发生之间的中位时间为78个月（范围：29-124个月）。在转移性疾病开始治疗时，中位年龄为57岁（范围：52-72岁），绝经后8例。六名患者，包括一名绝经前患者，接受辅助化疗基于蒽环类药物（n = 2）或基于非Anthacyclineclineclineclinecline（n = 4）疗法。所有患者均具有ER阳性（> 10 fmol/mg的胞质蛋白；中位数50；范围17-412）原发性肿瘤，八个肿瘤是孕酮受体阳性（> 10 fmol/mg胞质蛋白；中位数76；范围23-635）。对HER2的Southern印迹分析可用于5种肿瘤，显示2种HER2扩增[1]。
无论 BRCA 突变如何，巴曲昔芬和 PARP 抑制剂在卵巢癌治疗中的协同作用
摘要。背景/目的：聚（ADP-核糖）聚合酶抑制剂（PARPis）是经证实可治疗乳腺癌基因（BRCA）突变卵巢癌的靶向疗法之一。由于大多数卵巢癌都是 BRCA 野生型，因此有必要扩大 PARPis 的使用范围。在本研究中，我们将 PARPi、他拉唑帕尼和 IL-6 抑制剂巴曲昔芬结合起来治疗人类卵巢癌细胞。材料和方法：用他拉唑帕尼和巴曲昔芬作为单一疗法或联合疗法治疗人类卵巢癌细胞系 SKOV3、UWB1.289（BRCA1-null）和 OV75。检查了治疗对细胞活力、迁移、生长和菌落形成的影响。使用蛋白质印迹法研究可能参与两种药物抗肿瘤作用的途径。结果：他拉唑帕尼和巴曲昔芬联合用药对所有研究的细胞系均表现出协同抑制细胞活力、细胞迁移、细胞生长和细胞集落形成的作用。p-AKT、c-myc、p-ERK、ERα 的表达受到抑制，而 γ-H2AX 的表达受到诱导。结论：PARP 和 IL-6 联合抑制可能是治疗卵巢癌的有效方法，与 BRCA 突变状态无关。
产品特性总结
灭活口蹄疫疫苗含有一种或多种适当的血清型，即 O 型、A 型、C 型、亚洲 1 型、SAT 1 型、SAT 2 型、SAT 3 型，并加入氢氧化铝/皂苷。疫苗的菌株和抗原含量经过配制，可为接种疫苗的动物提供流行病学相关的免疫力。给反刍动物接种疫苗可诱导产生针对口蹄疫病毒的抗体，从而减少接触病原体后的临床症状和死亡率。在最大有效载荷为四个月的时间内，在实验条件下连续 5 次给牛重复施用 AFTOPUR ALSAP 口蹄疫疫苗，每剂含有四种菌株中每种菌株的 16µg 146S 抗原，已证明不会诱导针对病毒非结构蛋白的抗体滴度，足以导致血清在酶联免疫电转移印迹分析测试中对非结构蛋白抗体呈阳性（诊断检测和疫苗标准手册 [2001] 口蹄疫，第 2.1.1 章。国际兽疫局，巴黎），与感染口蹄疫病毒的动物相比。
DNA复制叉速度在皮质神经发生中充当发动机
a，示意图，显示了MCMBP介导的组装，并将MCM3-7导出到核中，该核能形成新生的MCM，用MCM2作为恢复前复合物，并调节DNA复制叉速度。nls表示核定位信号。b，从顶端到基础位置的MCMBP的时空表达，从E12.5到E15.5。c，蛋白质印迹分析显示了皮质发育产前和产后阶段的MCMCBP表达模式。d，在P3处的CKO小鼠和同窝对照的代表性图像。红色星星指示CKO鼠标。e，（左图）MCMBP +/ +的背视图; EMX1-CRE和MCMBP FL/FL； EMX1-CRE（CKO）P4大脑。（右图）与同窝对照（CTRL）相比，CKO中的皮质区域显着降低。（平均，两尾未配对的t检验，ctrl：n = 7，cko：n = 5）。f，（左图）MCMBP +/ +和CKO P4脑的DAPI染色冠状切片。与同窝对照（CTRL）相比，CKO的皮质板厚度显着降低了皮质板厚度。（平均，两尾未配对的t检验，ctrl：n = 7，cko：n = 5）。g，MCMBP +/ +的P4脑中的层标记物BRN2，TBR1，LHX2和TLE4的免疫染色； EMX1-CRE和CKO。h，与同窝对照组（CTRL）相比，CKO的上层神经元显着降低。（均值，两尾未配对的t检验，BRN2，TBR1，CTRL：n = 8，cko：n = 5，lhx2，tle4，ctrl：n = 4，cko：cko：n = 4）。i，蛋白质印迹分析显示了E15.5，E16.5和P4 Cortex中MCMCBP表达的下调。（平均，两尾未配对的t检验，ctrl：n = 3，cko：n = 3）。J，MCMBP +/ +中的顶祖细胞标记物SOX2和中间祖细胞标记的免疫染色； EMX1-CRE和CKO从E12.5到E16.5。K，SOX2+细胞数分析表明，在E12.5处CTRL和CKO之间没有差异。但是，由于E13.5，Sox2+细胞显着降低并持续到E16.5。(mean, two-tailed unpaired t-test, E12.5, ctrl: n=5, cKO: n=4, E13.5, ctrl: n=4, cKO: n=3, E14.5, ctrl: n=5, cKO: n=5, E15.5, ctrl: n=6, cKO: n=4, E16.5, ctrl: n=6, CKO：n = 4）。l，EOMES+细胞数分析表明，在E12.5和E13.5处CTRL和CKO之间没有差异。但是，Eomes+细胞从E14.5显着降低到E16.5。(mean, two-tailed unpaired t-test, E12.5, ctrl: n=3, cKO: n=3, E13.5, ctrl: n=4, cKO: n=4, E14.5, ctrl: n=4, cKO: n=4, E15.5, ctrl: n=4, cKO: n=3, E16.5, ctrl: n=4, CKO：n = 3）。
circCacna1c 沉默可通过 miR-29b-2-5p/NFATc1 轴抑制 ISO 诱导的心脏肥大
摘要：病理性心脏肥大是心力衰竭的重要原因之一。环状RNA（circRNA）已被研究与心脏肥大有关；然而，circRNA调节心脏肥大的机制仍不清楚。在本研究中，我们在心脏肥大中发现了一种新的环状RNA，命名为circCacna1c。用盐酸异丙肾上腺素（ISO）处理成年雄性C57BL/6小鼠和H9c2细胞以建立肥大模型。我们发现circCacna1c在ISO诱导的肥大心脏组织和H9c2细胞中上调。Western印迹和定量实时聚合酶链式反应表明，沉默circCacna1c可抑制ISO诱导的H9c2细胞中的肥大基因表达。从机制上讲，circCacna1c 在双荧光素酶报告基因检测中与 miR-29b-2-5p 竞争性结合，而 miR-29b-2-5p 在 ISO 诱导的肥大性心脏组织和 H9c2 细胞中下调。miR-29b-2-5p 抑制活化 T 细胞的核因子、细胞质钙调磷酸酶依赖性 1 (NFATc1)，以控制肥大性基因表达。沉默 circCacna1c 后，miR-29b-2-5p 的表达增加，这通过抑制 NFATc1 表达来降低肥大性基因表达。总之，这些实验表明 circCacna1c 通过 miR-29b-2-5p/NFATc1 轴促进 ISO 诱导的病理性肥大。
克拉科夫内皮细胞会议 - JCET
蛋白质印迹分析显示，人类冠状动脉（≤30 岁、≥58 岁）和小鼠主动脉（3 周龄、65 周龄、109 周龄）中层蛋白 A/C 表达随年龄而下调。小鼠主动脉的流式细胞术分析显示，层蛋白 A/C 下调发生在内皮细胞 (EC) 和血管平滑肌细胞中，但不发生在外膜细胞中。EC 特异性层蛋白 A/C 消融（Ldlr-/- Lmnaflox/floxCdh5-CreERT2）的小鼠表现出出生后生长缺陷、动脉收缩压升高和寿命缩短。此外，这些小鼠的主动脉环显示内皮依赖性血管舒张功能受损，与 12 周龄对照组相比，野生型 114 周龄小鼠也观察到了这种情况。超声心动图研究显示，年轻和年老的 Ldlr-/- Lmnaflox/floxCdh5-CreERT2 小鼠均存在舒张功能障碍，这与心脏胶原沉积增加和血清 NT-proBNP 水平升高有关。高通量组学研究显示 Ldlr-/-Lmnaflox/floxCdh5-CreERT2 小鼠的几个生物过程发生了改变，表明存在内皮功能障碍，包括 Nos3 表达减少和一氧化氮信号通路中断。