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定量分析和优化哺乳动物细胞中位点特异性蛋白生物结合
摘要：尽管有多种共价蛋白质修饰，但很少有用于定量细胞中蛋白质生物结合的技术。在这里，我们描述了一种通过与Halotag共价键形成在纤维素蛋白生物偶联中量化的新方法。这种方法利用不自然的氨基酸（UAA）诱变选择性地在蛋白质表面上安装小而生物串管的反应性手柄。我们利用了反电子二极管的快速动力学和高选择性 - 评估四嗪苯丙氨酸（TETF）与紧张的反甲环烯 - 氯酸酯（STCO-CA）（STCO-CA）和跨循环链烯（TETR-caclecten）（TETR-CATRE）的反应（TETF）与TETRECANE（TETRE）（TETER-CARORE（TETRE）。生物缀合后，叶绿素配体暴露于释放酶标记，以通过简单的蛋白质印迹分析直接定量生物缀合。我们证明了该工具的多功能性，以快速，准确地确定不同UAA/氯烷烃对的生物缀合效率以及对不同蛋白质的不同位点（包括EGFP和雌激素相关的受体ERR）的不同位点。■简介
kifc1：在RB阳性三阴性乳腺癌患者中使用阿霉素治疗的可靠预后生物标志物与Abemaciclib结合使用
摘要。背景/目标：非洲裔美国人（AA）患者的三阴性乳腺癌（TNBC）患病率和复发风险最大。先前已显示了RB阳性TNBC细胞（MDA-MB-231）中的阿霉素（Dox）和Abemaciclib（Abe）协同作用，以及RB阴性TNBC细胞（MDA-MB-468）中的拮抗作用。在这里，我们评估了类似驱动蛋白样蛋白1（KIFC1）作为TNBC中RB状态的DOX+ABE组合的种族特异性预后生物标志物。材料和方法：在AA种群中搜索TNBC预后生物标志物的文献。MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞在72小时内暴露于四个治疗组：1）对照（不含药物的培养基），2）DOX在MDA-MB-231（0.565μm）中的50％抑制浓度下，单独使用MDA-MB-231（0.565μm）和MDA-MB-4-468（0.121μm），和468（0.121μm），和2μmMM（2μm）每个单元线中的相应浓度。KIFC1蛋白表达和时间变化在MDA-MB-231细胞中使用Western blot进行了定量。结果：KIFC1，Kaiso和Annexin A2是文献 - 鉴定出AA特异性TNBC预后生物标志物。kifc1与其他提出的生物标志物无关，
补充信息
补充图 S5。olslc38a4 (SAT) 的消除对青鳉幼虫表型、上皮 Na + 通量和蛋白质表达的影响。 (A)，青鳉 Sat 与商用抗 SLC38A4 抗体免疫原肽（针对人类 SLC38A4 的合成肽；序列同源性：74%；ab58785；Abcam Cambridge，英国）的推断序列比对。Western blot 分析 SAT 消除对 Sat 变体蛋白质表达的影响。分别应用了 6 dpf 青鳉幼虫匀浆（从 FW 中的野生型、20‰ SW 中的野生型和 20‰ SW 中的 Sat 变体中收集），并表明商用抗 SLC38A4 抗体可以检测到来自不同青鳉幼虫样本的蛋白质，预期分子量大小约为 56 KDa。 (B) 野生型 (Wt) 和 1 ng SAT MO 注射青鳉胚胎在 20‰ SW 条件下的光学显微镜图像。 (C) 淡水 (FW) 环境下，与野生型和假对照青鳉幼体相比，SAT MO 注射对 6 dpf 青鳉幼体 Na + 通量的影响。值以平均值 ± SD 表示，并使用 Student's t 检验进行比较。当 p < 0.05 时，认为存在显著差异。
NH-硫胺 - UCL发现 - 伦敦大学学院
图2 NHS对ATP动力学的影响。 （a）NHS诱导1（代表n = 6）的二聚化。 （b）暴露于NHS（1μm）viatmrm（20 nm）荧光的SH-SY5Y细胞中的Δψm评估。 （c）条形图量化线索 - 膜电位（Δψm）。 数据显示为平均值±SEM（n = 14）。 * p <0.05，如所示。 （d - e）由Liuminometer记录的代表性痕迹在用线粒体靶向（MIT）和凝结核酸（Cyt）荧光素酶转染的SH-SY5Y细胞中，并用荧光素（100μm）灌注。 在高原上，将用NHS（1μm）挑战细胞，并监测动力学（n = 9）。 （F - G）SH-SY5Y细胞被PGIPZ GFP标记的载体稳定转染（如第2节所述），如果通过（F）中的Western blot分析确认了1个下调。 （g）条显示了1个表达的变化，将1个表达归一化为β-肌动蛋白水平，并表示为平均值±SEM（n = 9）。 * p <0.05，如所示。 （H）响应NACN和IAA处理的MGG荧光变化的代表性痕迹。 （i）条显示了在NaCN（1 mM）和IAA（2 mM）存在下，用NHS1μm处理18-H处理后对应于ATP耗竭的MGG荧光的变化。 数据归一化为未处理的细胞，并表示为平均值±SEM（n = 11）。 * p <0.05，如所示。 * P <0.05，如所示明显不同图2 NHS对ATP动力学的影响。（a）NHS诱导1（代表n = 6）的二聚化。（b）暴露于NHS（1μm）viatmrm（20 nm）荧光的SH-SY5Y细胞中的Δψm评估。（c）条形图量化线索 - 膜电位（Δψm）。数据显示为平均值±SEM（n = 14）。* p <0.05，如所示。（d - e）由Liuminometer记录的代表性痕迹在用线粒体靶向（MIT）和凝结核酸（Cyt）荧光素酶转染的SH-SY5Y细胞中，并用荧光素（100μm）灌注。在高原上，将用NHS（1μm）挑战细胞，并监测动力学（n = 9）。（F - G）SH-SY5Y细胞被PGIPZ GFP标记的载体稳定转染（如第2节所述），如果通过（F）中的Western blot分析确认了1个下调。（g）条显示了1个表达的变化，将1个表达归一化为β-肌动蛋白水平，并表示为平均值±SEM（n = 9）。* p <0.05，如所示。（H）响应NACN和IAA处理的MGG荧光变化的代表性痕迹。（i）条显示了在NaCN（1 mM）和IAA（2 mM）存在下，用NHS1μm处理18-H处理后对应于ATP耗竭的MGG荧光的变化。数据归一化为未处理的细胞，并表示为平均值±SEM（n = 11）。* p <0.05，如所示。* P <0.05，如所示（j和k）然后，用NHS1μM处理后，根据（J）NaCn或（K）IAA评估MGG荧光的增加。
水稻热休克蛋白60-3B通过淀粉颗粒生物合成维持高温下的雄性生育能力
高温对水稻 (Oryza sativa) 的雄性育性有有害影响，但水稻雄配子体免受高温胁迫的机制尚不清楚。在这里，我们分离并鉴定了一种热敏感的雄性不育水稻突变体——热休克蛋白 60-3b (oshsp60-3b)，它在最适温度下表现出正常的育性，但随着温度升高育性降低。高温会干扰 oshsp60-3b 花药中花粉淀粉颗粒的形成和活性氧 (ROS) 清除，导致细胞死亡和花粉败育。与突变体表型一致，OsHSP60-3B 在热休克反应中迅速上调，其蛋白质产物定位于质体。至关重要的是，OsHSP60-3B 的过表达增强了转基因植物花粉的耐热性。我们证实 OsHSP60-3B 与质体中的粉质胚乳 6 (FLO6) 相互作用，FLO6 是水稻花粉中淀粉颗粒形成的关键成分。Western blot 结果表明，高温下 oshsp60-3b 花药中的 FLO6 水平显著降低，表明当温度超过最佳条件时，OsHSP60-3B 是稳定 FLO6 所必需的。我们认为，在高温下，OsHSP60-3B 与 FLO6 相互作用，调节水稻花粉中的淀粉颗粒生物合成，并降低花药中的 ROS 水平，以确保水稻雄配子体正常发育。
自主机器人的收敛性有限
Abstract A distributed algorithm A solves the Point Convergence task if an arbitrarily large collection of entities, starting in an arbitrary configuration, move under the control of A to eventually form and thereafter maintain configurations in which the separationbetweenallentitiesisarbitrarilysmall.Thisfundamentaltaskinthestandard O BLOT modelofautonomousmobile entities has been previously studied in a variety of设置，包括完整的可见性，确切的测量（包括距离和角度）以及实体的同步激活。我们的研究涉及最小的假设，在这些假设下，可以保证以这种方式融合的实体，具有有限和未知的可见度范围，可见度范围有限且不明显不精确。我们提出了一种在这些约束下运行的算法，该算法解决点收敛，对于在两个或三维空间中移动的实体，并具有任何有限程度的异步。我们还证明，在类似的逼真的约束下，但无限的异步，通常不可能在平面中的点收敛，这是基于自然假设，即算法在初始配置中维持存在的实体之间维持（可见的）连接性。我们称这种变体称为凝聚力融合，可以区分自主移动实体控制的有限和无限异步的力量，解决了一个长期存在的问题，一个长期存在的问题是否同步安排的实体是否比异步计划更强大。
DNA模拟的空间控制的蛋白水解靶向Cyclind1-CDK4/6复合蛋白降解的嵌合体
图2。距离和方向依赖性的选择性和Cyclin D1-CDK4/6复合物的降解。（a）DTAC距离库的示意图。（b）Western印迹（WB）分析显示，在用指定的DTAC变体以指定浓度处理的U-251细胞中细胞周期蛋白D1和CDK4/6降解14小时。结果代表了三个独立实验。（c）与距离依赖性DTAC治疗后对照组相比，相对细胞周期蛋白D1，CDK4和CDK6水平的定量。显示的数据是三个独立实验的平均值±SD。（d）DTAC方向库的示意图。（e）WB分析显示，在指定浓度的U-251细胞中，用指定的方向变体（DTAC-V5至DTAC-V9）处理的U-251细胞中的细胞周期蛋白D1和CDK4/6降解，持续14小时。结果代表了三个独立实验。（f）与对照组相比，用方向依赖性DTAC进行对照组进行了相对细胞周期蛋白D1，CDK4和CDK6水平的定量。显示的数据是三个独立实验的平均值±SD。
赖氨酸乙酰转移酶Kat8
摘要：KAT8是一种赖氨酸乙酰转移酶，主要催化组蛋白H4（H4K16）的Lys16的乙酰化。KAT8失调与许多癌症类型的发展和转移有关，包括非小细胞肺癌（NSCLC）和急性髓样白血病（AML）。到目前为止，很少有KAT8抑制剂报道，其中没有一个显示选择性活动。基于KAT3B/KDAC抑制剂C646，我们开发了一系列N-苯基-5-吡唑酮衍生物，并将化合物19和34鉴定为低微摩尔KAT8抑制剂在KAT和KDAC面板上选择性的低微球Kat8抑制剂。Western印迹，免疫荧光和CETSA实验表明，这两种抑制剂均选择性地靶向细胞中的Kat8。19和34在包括NSCLC和AML在内的不同癌细胞系中表现出Microl摩尔抗增生活性，而不会影响非转化细胞的生存能力。总体而言，这些化合物是阐明Kat8生物学的宝贵工具，它们的简单结构使它们成为有希望的未来优化研究的候选人。
下一代Farnesylsylansferase抑制剂KO-2806，阻止多个节点的致癌信号传导，以增强KRAS G12的抗肿瘤功效
图3。NCI-H2122 KRAS G12C NSCLC CDX模型中KO-2806和Adagrasib结合使用的信号传导抑制。（a）在多个节点上抑制信号传导的示意图与FTI，KO-2806和KRAS G12C抑制剂Adagrasib的组合。NCI-H2122肿瘤，并使用（b）Western印迹和（c）免疫组织化学（IHC）分析。（b）KO-2806与AdagrasiB的组合导致HER3蛋白表达的大幅度降低，增强了对MAPK信号传导（ERK1/2和P90 RSK磷酸化）的抑制作用，增加了MTOR活性的抑制（S6和4EBP1磷酸化），以及对单个Cell Cycer Cyprant（RB Pranscratib）的抑制。（c）KO-2806与Adagrasib的组合导致细胞增殖标记Ki67的降低，而与单药adagrasib相比，凋亡标记裂解的caspase 3（CC3）的增加。此外，与单药Adagrasib治疗相比，HER3水平降低了，而HER2和EGFR水平的组合处理大多是没有变化的。halo用于IHC图像分析，并用n = 3量化H得分。
DNA 聚合酶μ兔多克隆抗体
产品名称 DNA Pol μ 兔多克隆抗体 宿主物种 兔 应用 WB;ELISA 物种交叉反应 人;大鼠;小鼠； 建议稀释度 Western Blot：1/500 - 1/2000。ELISA：1/40000。尚未在其他应用中测试。 免疫原 来自 DNA Pol μ 的合成肽。AA 范围：210-290 特异性 DNA Pol μ 多克隆抗体检测内源水平的 DNA Pol μ 蛋白。 制剂 含有 50% 甘油、0.5% BSA 和 0.02% 叠氮化钠的 PBS 液体。 储藏 储存于 -20°C。避免反复冻融循环。 蛋白质名称 DNA 指导的 DNA/RNA 聚合酶 mu 基因名称 POLM 细胞定位 细胞核。 纯化 使用表位特异性免疫原，通过亲和层析法从兔抗血清中亲和纯化抗体。克隆性 多克隆 浓度 1 mg/ml 观察到的条带 54kD 人类基因 ID 27434 人类 Swiss-Prot 编号 Q9NP87 别名 POLM；polmu；DNA 引导的 DNA/RNA 聚合酶 mu；Pol Mu；末端转移酶 背景催化活性：脱氧核苷三磷酸 + DNA(n) = 二磷酸 + DNA(n+1)。,辅因子：镁。,功能：似乎充当 Ig 变位酶，负责免疫球蛋白 (Ig) 基因超突变。,相似性：属于 DNA 聚合酶 X 型家族。,相似性：包含 1 个 BRCT