摘要:尽管有多种共价蛋白质修饰,但很少有用于定量细胞中蛋白质生物结合的技术。在这里,我们描述了一种通过与Halotag共价键形成在纤维素蛋白生物偶联中量化的新方法。这种方法利用不自然的氨基酸(UAA)诱变选择性地在蛋白质表面上安装小而生物串管的反应性手柄。我们利用了反电子二极管的快速动力学和高选择性 - 评估四嗪苯丙氨酸(TETF)与紧张的反甲环烯 - 氯酸酯(STCO-CA)(STCO-CA)和跨循环链烯(TETR-caclecten)(TETR-CATRE)的反应(TETF)与TETRECANE(TETRE)(TETER-CARORE(TETRE)。生物缀合后,叶绿素配体暴露于释放酶标记,以通过简单的蛋白质印迹分析直接定量生物缀合。我们证明了该工具的多功能性,以快速,准确地确定不同UAA/氯烷烃对的生物缀合效率以及对不同蛋白质的不同位点(包括EGFP和雌激素相关的受体ERR)的不同位点。■简介
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