XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search SystemcDNA
crispr/cas9介导的血友病小鼠模型
血友病A（HA）是由凝血因子VIII（FVIII）引起的一种常见出血疾病，长期以来一直被认为是基因治疗研究的有吸引力的靶标。然而，全长F8 cDNA不能通过腺相关病毒（AAV）向量能够充分包装。作为引起严重HA的第二大突变，F8内含子1反转（INV1）是由内骨体内重组引起的，因此大多数F8（外显子2-26）未转录。从理论上讲，可以通过整合启动子和外显子1。为了在体内测试此策略，我们通过删除F8的启动子区域和外显子1来生成HA小鼠模型。供体DNA和CRISPR/SACAS9被包装到AAV载体中，并静脉注射到HA小鼠中。治疗后，恢复F8表达并缩短了激活的部分凝血蛋白时间（APTT）。我们还比较了两个肝脏特异性启动子和两种整合供体向量。使用活性启动子时，所有处理过的小鼠都在尾盘挑战中幸存下来。这是一个体内基因修复策略的第一个报告，有可能治疗HA患者的复发突变。
针对乳腺癌发育中的芳基烃受体信号通路
ucd-pymt，产生显性阴性蛋白，该蛋白特异性抑制了由Charles Vinson（NCI，Bethesda，MD，MD，USA）提供的C/EBP成员的DNA结合。根据制造商的说明，使用JetPEI（Polytransfection; Qbiogene，Irvine，CA，美国）进行瞬态转染。允许转染进行16小时，并用1 nm TCDD或0.1％DMSO（对照）处理细胞24小时，然后再诱导凋亡或用TCDD处理TCDD进行RNA表达分析。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。 16小时后，用1 nm TCDD或0.1％DMSO（对照）处理4小时。将细胞裂解，并使用Luminometer（Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡）使用荧光素酶报告基因测定系统（Promega Corp.，Madison，WI）测量荧光素酶活性。 使用Bradford染料测定法（Bio-Rad Laboratories，Inc。，Hercules，CA）将相对光单元标准化为蛋白质浓度。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。16小时后，用1 nm TCDD或0.1％DMSO（对照）处理4小时。将细胞裂解，并使用Luminometer（Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡）使用荧光素酶报告基因测定系统（Promega Corp.，Madison，WI）测量荧光素酶活性。使用Bradford染料测定法（Bio-Rad Laboratories，Inc。，Hercules，CA）将相对光单元标准化为蛋白质浓度。
话题：基因操控
基因克隆是指分离目标 DNA 序列以复制多个副本的过程。目标基因被分离（通过 PCR），然后插入质粒载体（通过消化和连接）。质粒载体能够在宿主细胞内自主复制，确保序列被克隆。重组载体可用于创建转基因生物 (GMO)，进而可用于生产大量治疗性蛋白质（生物制药）。基因克隆的过程涉及多个步骤：•用聚合酶链式反应（PCR）分离和扩增目的基因（和质粒载体）•如果要将基因整合到细菌细胞中，则需要 cDNA 拷贝（逆转录）•用相同的特异性限制性酶（平端或粘端）消化基因和质粒载体•通过将目的基因连接到质粒载体（使用 DNA 连接酶）来创建重组质粒•通过凝胶电泳将重组质粒与正常质粒（没有目的基因）分离•通过载体递送方法（例如电穿孔）将重组质粒引入靶细胞•在抗生素培养基中培养细胞以选择修饰细胞（只有带有质粒的细胞才具有抗生素抗性）
通过电子邮件和www.regulations提交。
Jaina Nian农业营销服务美国美国农业部2055-S，停止0201 1400独立大街，华盛顿特区，华盛顿特区，20250-0201，以电子方式提交给www.gregulations.gov.gov dockement.gov dockegration.gov dockement.gov dockement.gov dockement。与植物相关的IP系统的一面适当保留其对具有重要效用，新颖性和非显性的发明的法定专利垄断。您是否担心与植物相关的IP或与植物有关的技术领域的专利质量？如果您有疑问，请解释一下。 ）和＃8（请分享您对新植物品种的不同形式的IP保护的看法以及如何适当促进新品种开发种质的机会。请在可能的情况下分享细节，并提供建议的改进，以确保农民和育种者获得种质的途径进行品种开发。 ）来自USDA-AMS案例查询。回答问题5。在美国，对自然法则，自然现象和抽象思想的专利性有一个司法例外。近年来，关于医学诊断和治疗的基因专利权利已有重大裁决。最值得注意的是最高法院对无数遗传学的决定（569 U.S. 579）和Mayo（566 U.S. 66）。无数结论的基因组DNA的一致决定无法获得专利。在这种情况下的推理是有意义的，因为基因组序列永远不会与其本地环境隔离，并且“技术”是识别而不是制造的。尽管有这项裁决和长期存在的司法豁免，但在传统繁殖和选择中赋予的植物中，包括公用事业专利在内的专利保护，包括公用事业专利。在其本土环境中对基因的表征尚不可专利，但这是商业种子育种公司提供大多数美国农民的寡头垄断的标准做法。美国农业部（USDA）如何与美国专利商标局（USPTO）合作，以确保植物遗传学的公用事业专利申请遵循无数的裁决？值得注意的是，对排除中间序列（cDNA）的DNA合成副本的豁免是无数的。但是，这种豁免不适用于涵盖通过传统育种赋予的天然性状的大多数植物效用专利应用，因为选择和表达该性状/发明仅基于天然的基因组DNA序列。对于非传统方法（例如生物技术），最高法院裁定了“人造”序列的雕刻，这些序列被引入植物的基因组中，因为这些序列是合理的（例如，含有基于cdna的质粒 - 含有质粒的合成构建体/表达量的质粒的转基因作物）。然而，这显然与与传统育种相关的本地特征的专利明显不同，因此应通过截然不同的镜头来查看这两者。
adipor1和adipor2的表达...
抽象背景：癌症是全球死亡的主要原因之一，也是伊朗死亡的第三大原因。被认为具有抗癌作用的蛋白质之一是脂联素激素。脂联素会导致编程的细胞死亡，防止细胞生长和增殖，并增加BCL2的表达水平。目的：这项研究的目的是测定胃癌患者中脂联素受体（adipor1和adipor2）基因的表达。材料和方法：在这种情况对照研究中，招募了42名胃癌患者和52名志愿者作为健康对照。提取总RNA。cDNA通过逆转录方法进行合成，并通过实时PCR进行表达分析。还通过ELISA测量脂联素的血清水平。结果：ADIPOR1和ADIPOR2的表达显着高于对照组（P = 0.02）。与正常控制相比，胃癌病例的血清脂联素显着降低（p = 0.03）。结论：我们发现adipor1和adipor2的表达水平较高。但是，胃癌中循环脂联素的水平较低。我们的研究表明，除脂联素的低水平外，adipor1和adipor2的表达可能在胃癌的发展和/或进展中起重要作用。
ezh2/hsulf1轴介导受体酪氨酸激酶信号传导以塑造软骨肿瘤进展
抽象的软骨肉瘤是软骨组织的主要癌症，能够改变高度侵略性，转移性和治疗难治性状态，导致预后较差，五年的生存率在11个月时进行了分化的亚型。目前，软骨肉瘤的手术切除是唯一有效的治疗方法，并且没有其他治疗选择，包括靶向疗法，常规化学疗法或免疫疗法，可用于这些患者。在这里，我们确定了涉及EZH2/SULF1/CMEM轴的信号途径，该方法有助于软骨肉瘤的恶性肿瘤，并为该疾病提供了潜在的治疗选择。一种非偏置的染色质免疫沉淀序列，cDNA微阵列分析和软骨肉瘤细胞系的验证，鉴定出硫酸酶1（SULF1）是最高的EZH2靶向基因，以调节软骨肉瘤的进展。过表达的EZH2导致软骨肉瘤细胞系中的Sulf1下调，这又激活了CMET途径。对CMET或遗传沉默的CMET途径的药物抑制显着降低了软骨肉瘤的生长并扩展了小鼠的存活。 在软骨肉瘤的患者样品中，进一步验证了EZH2/ SULF1/ CMET轴的调节。 结果不仅建立了促进软骨肉瘤恶性肿瘤的信号途径，而且还为进一步开发有效的靶向治疗治疗软骨肉瘤提供了挑战潜力。对CMET或遗传沉默的CMET途径的药物抑制显着降低了软骨肉瘤的生长并扩展了小鼠的存活。在软骨肉瘤的患者样品中，进一步验证了EZH2/ SULF1/ CMET轴的调节。结果不仅建立了促进软骨肉瘤恶性肿瘤的信号途径，而且还为进一步开发有效的靶向治疗治疗软骨肉瘤提供了挑战潜力。
通过LM98对CYR61和CTGF的转录调节：一种合成YAP-TEAD抑制剂，靶向胶质母细胞瘤细胞中含量性血管生成模拟
胶质母细胞瘤（GBM）是中枢神经系统的高度血管生成恶性肿瘤，抗拒标准的抗血管生成疗法，部分原因是称为血管生成的替代过程称为血管生成。与GBM杂乱无章的联系，河马信号通路的失调导致YAP/ TEAD的过表达，以及涉及治疗耐药性的几个下游效应子。对GBM化学耐药表型中的血管生成模拟和河马途径是否相交知之甚少。本研究旨在研究临床注释的GBM样品中河马途径调节剂的表达模式，研究其在体外参与有关血管生成模拟的介入。此外，它旨在评估该途径的药理靶向的潜力。对河马信号构件YAP1，TEAD1，AXL，NF2，CTGF和CYR61转录水平在低度GBM和GBM肿瘤组织中的转录水平。通过人U87，U118，U138和U251脑癌细胞系以及临床注释的脑肿瘤cDNA阵列中的实时定量PCR分析基因表达。使用特定的小干扰RNA进行瞬时基因沉默。血管生成模仿，三维
心脏基因治疗
摘要：尽管临床基因治疗取得了初步成功，已有几种产品获批用于临床，数百种产品正处于临床审批的最后阶段，但尚无一种基因治疗方法对心脏有效。本文，我们回顾了过去在几项心脏基因治疗临床试验中获得的经验，这些试验的目的是诱导缺血性心脏的治疗性血管生成，并尝试调节心力衰竭患者的心脏功能。对迄今为止取得的结果进行严格评估表明，心脏基因传递的效率仍然是阻碍成功的一大障碍，但也需要在建立更可靠的大型动物模型、选择更有效的治疗基因、更好地设计临床试验和更深入地了解心脏生物学方面寻求改进。我们还强调了心脏基因治疗发展中未来前景广阔的几个领域。特别是，从使用蛋白质编码 cDNA 进行基因添加研究到使用小 RNA 疗法调节基因表达的转变，以及精准基因编辑的改进，为心肌梗死后的心脏再生和遗传性心肌病的基因校正等应用铺平了道路，而这些应用直到十年前还无法实现。
果糖与葡萄糖：调节干细胞生长和通过补充糖的功能
试剂或资源源标识符化学品，肽和重组蛋白Puelink RNA Mini Kit Invitrogen 12183018A ISCRIPT™ISCRIPT™cDNA合成Kit Kit Biorad 1708840 Sybr™SELICS SYBR™SELECT MASTER MASTER MASTER MIST 4-12％，10井Genscript M00653胶原酶II Sigma C2-28-100MG DMEM（无葡萄糖）GIBCO GIBCO 11-966-025 FBS FISHER FISHER FISHER SCOCICILIFIC SH3010903 PENICILLIN SH30103 PhosSTOP Roche 4906845001 IBMX Sigma 410957 Insulin Sigma I5500 Indomethacin Sigma 405268 Triiodothyronine (T3) Sigma T6397 Dexamethasone Sigma 265005 Rosiglitazone Sigma PHR2932 LipidTOX deep red neutral lipid stain Fisher Scientific H34477超级阻止诱因37535抗体抗KHK Sigma HPA007040抗HIF1α（D2U3T）细胞信号传导14179抗PPARγ（C26H12）细胞信号2443 C/EBPα细胞信号8178 Anti-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-aint-EBPα细胞信号8178 Anti-al timnigin-αtubin tim-αtubin（38）细胞信号2250质粒和siRNA PVSV-G添加剂138479 PCL-ECO ADDGENE 12371 PBABE-NEOLARGE TCDNA ADDGENE 1780人HIF1A 3091 sirna accell drm-a-a-a-a-004018230001生物。n/a
符合欧洲药典第 2.6.7 章和 USP <77> 草案当前修订版本的新型支原体实时 RT-PCR 检测试剂盒
监管指南要求用于支原体污染检测的 PCR 试剂盒具有高灵敏度，而 DNA 靶标仅在生物体中以低拷贝水平存在，这种灵敏度呈上升趋势。这就是为什么传统的基于 DNA 的 PCR 在试图保持检测的稳健性和可靠性时逐渐达到极限的原因。实时逆转录 PCR 提供了一种克服此问题的智能解决方案。每个在 DNA 水平上可检测到的基因在目标生物体内也可作为转录本。特别是 16S rRNA 区域，一个高度保守的 rRNA 操纵子，是支原体检测的目标，在一个细胞内有多个 RNA 拷贝。RNA 水平上多个靶标的出现有助于用 PCR 检测较少数量的细胞。逆转录聚合酶使 RNA 拷贝可作为 cDNA 靶标，因此与基于 DNA 的基本 PCR 检测相比，可用的 PCR 靶标成倍增加。确实，这种方法无法对 PCR 结果进行任何定量解释，因为 16S rRNA 基因的 RNA 拷贝数非常灵活，但当涉及到需要“是”或“否”答案的质量控制问题时，定量输出不是必需的。这种方法特别简单，因为逆转录已经在 PCR 反应混合物中实施。