抽象背景:CRISPR工具箱通过标记效应子域的快速扩展,以酶促无效CAS9(DCAS9)或Cas9 Nickase(NCAS9)导致了几种有希望的新基因编辑策略。最近的添加包括CRISPR胞嘧啶或腺嘌呤碱基编辑器(CBES和ABES)和CRISPR Prime编辑器(PES),其中脱氨酶或逆转录酶分别融合到NCAS9。这些工具在动物和植物模型中建模并纠正引起疾病的突变的巨大希望。但到目前为止,还没有广泛可用的工具可以自动化BE和PE试剂的设计。结果:我们开发了PNB Designer,这是一种基于Web的PEGR NAS设计的应用程序,用于BES,并指导RNA。PNB设计师使设计定位指向RNA的指南RNA针对跨越多个王国的变体或参考基因组上的单个或多个靶标的指南RNA。与PNB设计师一起,我们设计了PegrNA,以模拟所有已知疾病,从而导致Clinvar可用的突变。此外,PNB设计人员可用于设计指南RNA来安装或恢复SNV,用一个CBE和七个不同的ABE PAM变体扫描基因组,并返回最佳使用。PNB设计师可以在http://fgcz-shiny .uzh.ch.ch.ch/pnbde signe r/结论上公开访问:结论:使用PNB设计师,我们为CRISPR PE和BE Reagents创建了一种用户友好的设计工具,应该简化选择编辑策略和避免设计并避免设计并进行设计。
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骨髓增生性肿瘤 (MPN) 会导致血细胞(如红细胞增多症)或血小板(原发性血小板增多症)的过度生成。JAK2 V617F 是许多 MPN 中最常见的体细胞突变,但之前在小鼠中对这种突变的建模依赖于转基因过度表达,并导致不同的表型,在某些情况下,这些表型归因于表达水平。CRISPR-Cas9 工程通过精确修改原代细胞中的内源性位点,为建模和潜在治愈遗传编码疾病提供了新的可能性。我们在此开发了“无疤痕”的 Cas9 试剂,用于在永生化人类红系祖细胞 (HUDEP-2)、CD34+ 成人人类造血干细胞和祖细胞 (HSPC) 以及免疫表型长期造血干细胞 (LT-HSC) 中创建和逆转 JAK2 V617F 突变。我们发现与内源性 JAK2 V617F 等位基因相关的体外增殖没有明显增加,但与野生型细胞共培养揭示了突变提供的竞争性生长优势。即使在没有造血细胞因子信号传导的情况下,获得 V617F 等位基因也会促进红系祖细胞的终末分化。综上所述,这些数据与 MPN 的逐渐进展的表现相一致,并表明与转基因过表达模型相比,内源性获得性 JAK2 V617F 突变可能产生更细微的表型。
机构可以将任意数量或任意组合的这些学分添加到其 STARS 报告中,包括最多五个开放式创新学分(参见 IL 65 至 69),但用于计分的奖励积分最高为 10 分。这些奖励积分将添加到机构获得的总积分中。例如,如果机构在学术、参与、运营和规划与管理方面获得了 115 分(总分 250 分),那么获得 10 分 IL 积分将获得 125 分(总分 250 分),总分为 50 分。
目前,CRISPR/Cas9 的使用是植物(包括生物量作物杨树)精确基因组工程的首选方法。在杨树中传递 CRISPR/Cas9 及其成分的最常用方法是通过农杆菌介导的转化,除了所需的基因编辑事件外,还会导致稳定的 T-DNA 整合。在这里,我们探索了通过 DNA 包被的微粒轰击将基因编辑试剂传递到模型树 Populus tremula x P. alba 中,以评估其开发无转基因、基因编辑树的潜力,以及其在特定靶位整合供体 DNA 的潜力。使用优化的转化方法,有利于再生暂时表达所传递供体 DNA 上基因的植物,我们再生了不含 Cas9 和抗生素抗性编码转基因的基因编辑植物。此外,我们报告了供体 DNA 片段在 Cas9 诱导的双链断裂处频繁整合,为靶向基因插入提供了机会。
1 柑橘研究中心“Sylvio Moreira” - 农学研究所 (IAC),Cordeiro ´ polis,巴西,2 生物研究所,坎皮纳斯州立大学 (Unicamp),坎皮纳斯,巴西,3 甘蔗研究中心 - 农学研究所 (IAC),里贝朗普雷图,巴西,4 里贝朗普雷图医学院,圣保罗大学 (USP),里贝朗普雷图,巴西,5 坎皮纳斯农学研究所 (IAC) 咖啡中心,坎皮纳斯,巴西,6 Embrapa 咖啡,巴西农业研究公司,巴西利亚,联邦区,巴西,7 生物学系,哲学、科学与文学学院,圣保罗大学 (USP),里贝朗普雷图,巴西,8 遗传学系,路易斯·德·凯罗斯农业学院 (ESALQ),圣保罗大学 (USP),皮拉西卡巴,巴西
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