©2022。此手稿版本可在CC-by-NC-ND 4.0许可下提供https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nc-nd/4.0/
。cc-by-nc-nd 4.0国际许可证(未经同行评审证明)获得的是作者/资助者,他授予Biorxiv授予Biorxiv的许可,以永久显示预印本。这是该版本的版权持有人,该版本于2024年8月26日发布。 https://doi.org/10.1101/2024.08.24.609500 doi:Biorxiv Preprint
在鸡中,原始生殖细胞 (PGC) 是基因敲入等高级基因组编辑的有效靶点。尽管已经建立了鸡 PGC 的长期培养系统,但仍有必要选择一种高效、精确的基因编辑工具来编辑 PGC 基因组,同时保持其对生殖系统的贡献能力。与传统用于生成敲入鸡的同源重组方法相比,成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR)/CRISPR 相关蛋白 9 (Cas9) 和 CRISPR 介导的精确整合到目标染色体 (CRIS-PITCh) 方法更胜一筹,因为供体载体更易于构建、基因组编辑效率高,并且不会选择目标细胞。在本研究中,我们利用 CRIS-PITCh 方法将荧光蛋白基因盒作为融合蛋白整合到鸡 PGC 的鸡血管同源物 ( CVH ) 基因座中,从而设计了敲入鸡 PGC。敲入 PGC 在体内和体外均表达荧光蛋白,便于对 PGC 进行追踪。此外,我们还表征了设计双敲入细胞系的效率。通过有限稀释获得敲入细胞克隆,并通过基因分型确认设计双敲入细胞系的效率。我们发现 82% 的分析克隆都成功敲入了两个等位基因。我们认为,从敲入 PGC 中生产模型鸡可用于各种研究,例如阐明鸡的生殖细胞命运和性别决定。
图 2:在 K-562 细胞中通过电穿孔优化 HDR 介导的报告基因敲入。A. LMNA -EGFP 供体质粒单独电穿孔,浓度增加,显示非特异性 EGFP 表达量较低。Cas9 蛋白:crRNA:tracrRNA 电穿孔,LMNA -EGFP 供体质粒浓度增加,显示 EGFP 表达相关增加。B. 放大倍数增加后,HDR 介导的敲入样本中 EGFP 表达的定位与 LMNA 的预期一致,位于细胞核中,并与 Hoechst 染色共定位。C. HDR 介导的敲入细胞群的流式细胞术分析显示,随着 DNA 供体质粒数量的增加,EGFP 表达增加高达 32%。单独 DNA 供体质粒对照的相应分析显示所有剂量的 EGFP 表达均低于 0.5%(未显示数据)。
摘要要维持细胞稳态并协调对特定刺激的适当响应,必须在整个细胞中整合信息,其中整个组织的网络是整个组织的网络,其中细胞器是至关重要的节点和膜接触位点是主要边缘。膜接触位点是两个或多个细胞器的细胞子域,并彼此相互作用。尽管已经确定了许多轨道间的联系,但其中大多数仍未完全表征,因此他们的研究是一种吸引人的研究领域。多亏了重要的技术计划,现在有许多工具可用或正在快速开发,因此很难选择哪种工具最适合回答特定的生物学问题。在这里,我们区分了研究细胞器接触位点的两种不同的实验方法。第一个旨在从形态学上表征膜接触的位点并确定所涉及的分子参与者,主要依赖于生化和电子显微镜(EM)相关的甲基化甲形成。第二种方法旨在了解特定接触的功能重要性,重点是时空细节。为此,接近驱动的荧光探针是选择的实验工具,因为它们允许在不同的细胞条件下或在不同的刺激下进行膜接触位点及其在活细胞中的动力学的迹象和定量。在这篇评论中,我们专注于这些工具,目的是突出它们的多功能性以及如何将其应用于膜接触研究。我们将广泛描述所有不同类型的近端驱动的液化工具,讨论它们的好处和缺点,最终提供了一些建议,以根据案例对案例进行选择和应用适当的方法,并获得最佳的实验结果。
摘要:荧光水凝胶是可移植生物传感器的候选材料,可用于护理点诊断,因为(1)与免疫色谱测试系统相比,它们具有更大的结合有机分子结合能力,该测试系统由三维水凝胶结构中的属性标记确定; (2)相比,荧光检测比对金纳米颗粒或染色乳胶微粒的比色检测更敏感; (3)可以调整凝胶基质的性能,以更好地兼容和检测不同的分析物; (4)可以使水凝胶生物传感器可重复使用,适合实时研究动态过程。水溶性纳米晶体被广泛用于体内和体内生物成像,并且基于这些的水凝胶允许将这些特性保存在整体复合大型结构中。在这里,我们回顾了基于纳米晶体获得分析物敏感的泛凝水的技术,用于检测荧光信号变化的主要方法,以及通过使用nanocrystals nanocrystals的表面配体通过溶液 - gel相变的无机水凝胶形成的方法。
。cc-by-nc-nd 4.0国际许可证。是根据作者/资助者提供的预印本(未经同行评审认证)提供的,他已授予Biorxiv的许可证,以在2021年2月16日发布的此版本中显示在版权所有的此版本中。 https://doi.org/10.1101/2021.02.15.431139 doi:Biorxiv Preprint
收到2024年3月14日; 2024年4月26日接受;于2024年5月24日出版作者分支:1澳大利亚微生物学研究所,悉尼科技大学,新南威尔士州锡德尼大学,2007年,澳大利亚。*信件:Solenne Ithurbide,Solenne。Ithurbide@umontreal。CA; Iain G. Duggin,Iain。Duggin@uts。Edu。Au关键字:Archaea; cetz;克隆向量;细胞骨架;荧光蛋白; ftsz。缩写:BSW,缓冲盐水; CFP,青色荧光蛋白; FP,荧光蛋白; GFP,绿色荧光蛋白; MC,多个克隆网站; ORF,开放阅读框; SLG,S层糖蛋白; wt,野生型; YFP,黄色荧光蛋白。†目前的地址:départementde Microbiologie,Infectiologie et immunologie,蒙特利尔大学,蒙特利尔大学,蒙特利尔,QC,加拿大,加拿大,地址:目前的地址:亚利桑那州立大学,亚利桑那州立大学,美国亚利桑那州凤凰城。本文的在线版本提供了五个补充数据和两个补充表。001461©2024作者
3 2022 年 3 月 16 日,第五巡回上诉法院 (No. 22-30087) 批准了联邦政府的紧急动议,要求暂缓执行对 2022 年 2 月 11 日在路易斯安那州诉拜登案中发布的初步禁令的上诉,编号 21-cv-1074-JDC-KK (WD La.)。根据第五巡回法院的命令,初步禁令不再有效,等待联邦政府对该禁令的上诉或进一步的法院命令。除其他事项外,初步禁令禁止该案的被告“采用、使用、视为具有约束力或依赖”温室气体社会成本的中期估计值(由温室气体社会成本跨部门工作组于 2021 年 2 月 26 日发布)来将减少温室气体排放的效益货币化。在没有进一步介入的法院命令的情况下,能源部已恢复其在禁令之前的做法,并在适当且法律允许的情况下提供货币化利益。