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用低亲和力荧光指示剂测量神经元钙和钠信号的空间和时间方面
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开发用于高内涵筛选的 CRISPR/Cas9 介导荧光报告基因人类多能干细胞系
摘要：应用 CRISPR/Cas9 系统将荧光蛋白敲入人类多能干细胞 (hPSC) 中的内源性目的基因，有可能促进基于 hPSC 的疾病建模、药物筛选和移植疗法优化。为了评估荧光报告 hPSC 系用于高内涵筛选方法的能力，我们将 EGFP 靶向内源性 OCT4 基因座。产生的 hPSC–OCT4–EGFP 系表达与多能性标记物一致的 EGFP，并且可以适应多孔格式以进行高内涵筛选 (HCS) 活动。然而，在长期培养后，hPSC 暂时失去了 EGFP 表达。或者，通过将 EGFP 敲入 AAVS1 基因座，我们建立了稳定且一致的 EGFP 表达 hPSC–AAVS1–EGFP 系，该系在体外造血和神经分化期间保持 EGFP 表达。因此，hPSC–AAVS1–EGFP 衍生的感觉神经元可适应高内涵筛选平台，该平台可应用于高通量小分子筛选和药物发现活动。我们的观察结果与最近的发现一致，表明在 OCT4 基因座进行 CRISPR/Cas9 基因组编辑后会出现高频率的靶向复杂性。相反，我们证明 AAVS1 基因座是 hPSC 中的安全基因组位置，具有高基因表达，不会影响 hPSC 质量和分化。我们的研究结果表明，应应用 CRISPR/Cas9 整合的 AAVS1 系统来生成稳定的报告 hPSC 系以用于长期 HCS 方法，并且它们强调了仔细评估和选择应用的报告细胞系以用于 HCS 目的的重要性。
使用 CRISPR/Cas9 系统和双链 DNA 供体标记荧光报告基因蛋白
Sylvain Geny、Simon Pichard、Alice Brion、Jean-Baptiste Renaud、Sophie Jacquemin 等人。使用 CRISPR/Cas9 系统和双链 DNA 供体标记带有荧光报告基因的蛋白质。Arnaud Poterszman。多蛋白复合物，2247，Springer；Humana，第 39-57 页，2021 年，分子生物学方法，978-1-0716-1125-8。�10.1007/978-1-0716-1126-5_3�。�hal-03092017�
荧光纳米传感器油漆揭示了在单个释放位点从神经元释放的多巴胺释放的异质性
神经递质多巴胺是从称为静脉曲张的离散轴突结构中释放出来的。它的释放在行为中至关重要，并且与普遍的神经精神疾病有关。现有的多巴胺检测方法无法检测和区分离散的多巴胺释放事件与多个静脉曲张。这阻止了对离散静脉曲张种群中多巴胺释放的理解。使用近红外荧光（980 nm）多巴胺纳米传感器“油漆”（andromeda），我们表明动作电位引起的诱发的多巴胺释放是高度异质的，并且还需要分子启动。使用仙女座，我们可以在具有高时间分辨率（15张图像/s）的单个成像场中同时以多巴胺能静脉曲张的形式可视化多巴胺释放。我们发现，多巴胺释放的“热点”是高度异质性的，仅在所有静脉曲张的17％处被检测到。在缺乏Munc13蛋白的神经元中，在电刺激过程中废除了多巴胺释放的神经元，这表明多巴胺释放需要囊泡启动。总而言之，仙女座揭示了多巴胺释放的时空组织。
通过增强发色团填充的计算设计生成明亮的单体红色荧光蛋白
同时为定向进化更亮的变体提供了新模板。荧光蛋白的亮度被定义为它们的摩尔消光系数与量子产率的乘积，它们分别是它们的发色团吸收光的能力和将吸收光转换成发射光的效率。虽然增加这两个性质中的任何一个都会成比例地增加亮度，但是人们还不太了解 RFP 结构的变化如何有益地影响它们的消光系数，这使得通过合理设计预测有益突变变得复杂。另一方面，已知荧光团的量子产率与它们的构象灵活性直接相关，8 – 10 因为运动会将吸收的能量以热量而不是光子的形式耗散。对于荧光蛋白，研究表明，通过亚甲基桥的扭转，发色团对羟基苯亚甲基部分的扭曲会导致非辐射衰减。10,11 因此，应该可以通过设计突变来限制对羟基苯亚甲基部分的构象灵活性，从而提高 RFP 亮度，从而提高量子产率。在这里，我们使用 Triad 软件 12 进行计算蛋白质设计，以优化暗淡单体 RFP mRojoA（量子产率 = 0.02）中发色团口袋的包装，我们假设这会使发色团变硬，从而提高量子产率。为此，对发色团对羟基苯亚甲基部分周围的残基进行了突变
新颖的白蛋白结合光热药物ICG-IBA-RGD用于癌症的有针对性荧光成像和photothermal疗法
如今，随着人口迅速增长和全球衰老，癌症已成为人类死亡的主要原因。 1癌症的常规临床治疗方法，包括手术干预，化学疗法和放疗，仍然具有de neciencies。 手术治疗无法去除所有肿瘤细胞，有时甚至会导致肿瘤细胞的扩散。 由于缺乏肿瘤特异性城市，放疗和化学疗法都会在肿瘤治疗期间引起严重的局部或全身性影响。 2此外，在化学疗法辐射过程中，肿瘤组织或细胞也将对化学治疗药物和放射线具有抵抗力。 基于上述治疗方法的局限性光热疗法（PTT）是一种新型的非侵入性癌症治疗策略，由于其高效，易于操作，可忽略不可效应和良好的生物利用度，因此引起了广泛的关注。 3,4 PTT的核心是光热剂（PTA），可以将近红外（NIR）光转化为细胞毒性热，以杀死肿瘤细胞。 5重要的是，PTT可以忽略细胞抗性的影响，因为它通过诸如蛋白质变性和膜破裂等物理机制诱导细胞死亡。 6此外，它可以实现高精度，因为仅当将NIR光和PTA组合在一起时才产生热效应。 已经建立了广泛的效果，以开发多种类型的无机和有机PTA。 无机纳米材料，包括金纳米颗粒，7,8 sul nanoparticles，9,10和如今，随着人口迅速增长和全球衰老，癌症已成为人类死亡的主要原因。1癌症的常规临床治疗方法，包括手术干预，化学疗法和放疗，仍然具有de neciencies。手术治疗无法去除所有肿瘤细胞，有时甚至会导致肿瘤细胞的扩散。由于缺乏肿瘤特异性城市，放疗和化学疗法都会在肿瘤治疗期间引起严重的局部或全身性影响。2此外，在化学疗法辐射过程中，肿瘤组织或细胞也将对化学治疗药物和放射线具有抵抗力。基于上述治疗方法的局限性光热疗法（PTT）是一种新型的非侵入性癌症治疗策略，由于其高效，易于操作，可忽略不可效应和良好的生物利用度，因此引起了广泛的关注。3,4 PTT的核心是光热剂（PTA），可以将近红外（NIR）光转化为细胞毒性热，以杀死肿瘤细胞。5重要的是，PTT可以忽略细胞抗性的影响，因为它通过诸如蛋白质变性和膜破裂等物理机制诱导细胞死亡。6此外，它可以实现高精度，因为仅当将NIR光和PTA组合在一起时才产生热效应。已经建立了广泛的效果，以开发多种类型的无机和有机PTA。无机纳米材料，包括金纳米颗粒，7,8 sul nanoparticles，9,10和
用NIR-I荧光免疫偶联物靶向颅内患者衍生的胶质母细胞瘤（GBM），以促进其图像引导切除
术中治疗的标准形式（即，白光照明下的肿瘤组织切除，WLI）。3,5在健康的脑组织中迅速迅速与非常低的细胞浓度的患病组织延伸以外的多个百分点，超出了非态性局部硬化性肿瘤质量，这显着地使任何形式的治疗部门都伴随着治疗的效果，尤其是在整个手术方面的影响（如果有帮助的情况下），因为该组织的差异（如果有帮助），因为该组织有帮助，因为这种疾病的范围是在质地上的差异）图像删除的术中和术中成像方式（即 ，图像未实时获取）。 此外， GBM表现出相当大的肿瘤内和间异质性，在生物学上也适应逐渐变化的化学疗法或静态抗性或静止。 6靶向脑部疾病，例如GBM，具有小分子或生物学疗法，因为存在Nicky Nicky半渗透的血脑屏障（BBB），因此正在挑战。 BBB表现出极低的溶质渗透性，这有助于维持脑稳态。 因此，术前和术后治疗3,5在健康的脑组织中迅速迅速与非常低的细胞浓度的患病组织延伸以外的多个百分点，超出了非态性局部硬化性肿瘤质量，这显着地使任何形式的治疗部门都伴随着治疗的效果，尤其是在整个手术方面的影响（如果有帮助的情况下），因为该组织的差异（如果有帮助），因为该组织有帮助，因为这种疾病的范围是在质地上的差异）图像删除的术中和术中成像方式（即，图像未实时获取）。GBM表现出相当大的肿瘤内和间异质性，在生物学上也适应逐渐变化的化学疗法或静态抗性或静止。6靶向脑部疾病，例如GBM，具有小分子或生物学疗法，因为存在Nicky Nicky半渗透的血脑屏障（BBB），因此正在挑战。BBB表现出极低的溶质渗透性，这有助于维持脑稳态。因此，术前和术后治疗
使用SNAP标签靶向香豆素的荧光记者
线粒体是细胞内活性氧（ROS）产生的主要部位。ROS是重要的sig nalling分子，但产生过多会导致细胞损伤和功能障碍。因此，准确确定线粒体内产生ROS的何时，方式和地点至关重要。以前，ROS检测涉及各种化学探针和荧光蛋白。这些仅由于分子在线粒体基质中的积累而有局限性，或者需要为每个不同物种表达新蛋白质。我们报告动态H 2 O 2在所有线粒体子室内具有惊人空间分辨率的变化。我们将自标记蛋白的特定靶向与新型H 2 O 2-反应性探针相结合。该方法是宽范围且灵活的，具有相同的表达蛋白质可加载带有不同染料和传感器的蛋白质。它为其他化学物种（除了ROS之外的其他化学物种）提供了一个框架，其在线粒体内的DY NAMICS尚不清楚，而无需设计新蛋白质。
生物物理学的年度综述下一代遗传编码的荧光生物传感器照亮细胞信号传导和代谢
进行高通量筛选。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。282 3.1。基于结构和计算信息的理性设计。。。。。。。。282 3.2。基于筛选的技术。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。284 4。生物传感器的新应用。。。。。。。。。。。。。。。。 div>。 div>285 4.1。 div>多重载体。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>285 4.2。 div> 超分辨率显微兼容的生物构成。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 287 4.3。 div> 在道态生理条件下的应用。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div>285 4.2。 div>超分辨率显微兼容的生物构成。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>287 4.3。 div>在道态生理条件下的应用。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>288 4.4。 div> 进一步的申请。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 289 5。 div> 结论。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div>288 4.4。 div>进一步的申请。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>289 5。 div>结论。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>290 div>
基于单克隆抗体的ELISA和ELISA和时间分辨的荧光免疫测定的玉米中黄曲毒素B1的定量确定
摘要：在这项研究中，开发了高度敏感的单克隆抗体（MAB），用于玉米和饲料中黄曲霉毒素B 1（AFB 1）的分解。还建立了间接竞争性酶联免疫吸附测定（IC-ELISA）和时间分辨荧光免疫测定法（TRFICA）。首先，合成了HAPEN AFB 1 -CMO，并与载体蛋白共轭，以制备用于小鼠免疫的免疫原。随后，使用Classical杂交瘤技术产生mAb。IC-ELISA的最低半最大抑制浓度（IC50）为38.6 ng/kg，线性范围为6.25–100 ng/kg。玉米和饲料中检测的极限分别为6.58 ng/kg和5.54 ng/kg，回收率范围从72％到94％。从样本处理到阅读，开发了TRFICA的检测时间仅大幅减少21分钟。此外，玉米和饲料的检测限度分别为62.7 ng/kg和121 ng/kg。线性范围为100–4000 ng/kg，回收率范围从90％到98％。总而言之，AFB 1 MAB的开发和用于高通量样品检测的IC-ELISA以及用于快速检测的TRFICA的IC-ELISA提出了可用于多功能AFB 1在不同情况下检测的强大工具。