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通过单基因穿越转基因的monokaryons
ganoderic酸（气体）是Ganoderma lucidum的主要功能成分。这项研究旨在繁殖新的G. lucidum菌株，其含量增加了单个气体。通过原生质体的形成和再生，成功地从二卡罗菌C. lucidum cgmcc 5.0026中成功分离出了两种与兼容的单子菌株G. 260125和G. 260124。分别在单障G. 260124和G. 260125菌株中分别表达了玻璃体血红蛋白基因（VGB）和小矛烯合酶基因（SQS）。交配导致形成了新的杂种二卡罗菌G. lucidum菌株SQS-VGB。配偶SQS-VGB菌株的基体中Ganoderic酸（GA）-T，GA-ME和GA-P的最大含量分别为23.1、15.3和39.8μg/g/g干重（DW），比大于lucidum 5.0026中的 与G. lucidum 5.0026中的SQS-VGB菌株相比，在配偶SQS-VGB菌株的基因体中，小孢子和1.75倍的含量分别增加了2.35倍和1.75倍。 此外，在配合的SQS-VGB菌株中，SQS和羊毛醇合酶基因（LS）的最大表达水平分别增加了3.23-和2.13倍。 总而言之，我们通过整合基因工程和一单声道交叉，开发了一种新的G. lucidum菌株，具有较高的基因中的单个气体含量。与G. lucidum 5.0026中的SQS-VGB菌株相比，在配偶SQS-VGB菌株的基因体中，小孢子和1.75倍的含量分别增加了2.35倍和1.75倍。 此外，在配合的SQS-VGB菌株中，SQS和羊毛醇合酶基因（LS）的最大表达水平分别增加了3.23-和2.13倍。 总而言之，我们通过整合基因工程和一单声道交叉，开发了一种新的G. lucidum菌株，具有较高的基因中的单个气体含量。与G. lucidum 5.0026中的SQS-VGB菌株相比，在配偶SQS-VGB菌株的基因体中，小孢子和1.75倍的含量分别增加了2.35倍和1.75倍。此外，在配合的SQS-VGB菌株中，SQS和羊毛醇合酶基因（LS）的最大表达水平分别增加了3.23-和2.13倍。总而言之，我们通过整合基因工程和一单声道交叉，开发了一种新的G. lucidum菌株，具有较高的基因中的单个气体含量。
基因编辑治疗遗传性皮肤病的挑战
摘要：遗传性皮肤病包括多种遗传性皮肤病，其中许多是单基因的。遗传性皮肤病的严重程度各不相同，会导致早发性癌症或危及生命的皮肤损伤，而且治愈方法很少。因此，临床需要具有治愈潜力的单一干预治疗。在这里，我们讨论了用于治疗遗传性皮肤病的新兴基因编辑领域，探索了用于纠正致病突变的 CRISPR-Cas9 和同源定向修复、碱基编辑和主要编辑工具。我们特别关注编辑效率的优化、脱靶编辑的最小化以及潜在未来疗法的交付工具。完善这些因素中的每一个对于将基因编辑疗法转化为临床环境都至关重要。因此，这篇评论文章的目的是为旨在开发遗传性皮肤病基因编辑方法的研究人员提出重要的考虑因素。
分析Alx1的DNA结合特性，Alx1是棘皮动物中骨骼生成的进化保守调节剂
alx1是一种含同源域的转录因子，是棘皮动物中骨骼生成的高度保守调节剂。在海胆中，ALX1在分化胚胎原代间充质细胞（PMC）中起着核心作用，并积极调节这些细胞表达的大多数生物矿化基因的转录。ALX1基因通过重复而产生，并通过41 - 氨基酸基序（D2域）获得了与其旁系同源物（ALX4）不同的骨骼发育功能。alx1和alx4含有谷氨酰胺-50成对型同源域，它们在体外优先与alindromic结合位点相互作用。染色质免疫沉淀测序（CHIP-SEQ）研究表明，ALX1在体内与腔植物和一半位点结合。为了解决这种明显的差异并探索D2结构域的功能，我们使用了与SP-MTMMPB关联的内源性顺式调节模块，SP-MTMMPB是一个编码PMC特定金属蛋白酶的基因，用于分析ALX1的DNA结合特性。我们发现，Alx1在含有一半位点的TAAT上形成了二聚体复合物，该机制与众所周知的二聚体位点上的机制不同。我们使用转基因报告基因测定法分析了一半位点在体内的功能作用，并证明了两个具有部分冗余功能的位点对于SP-MTMMPB CIS-顺式调节模块的PMC特异性活性至关重要。最后，我们表明D2结构域在体外影响了Alx1的DNA结合特性，这表明该基序的免除可能促进了新的转录靶标的获取，并因此是一种新颖的发展功能。
遗传性皮肤病的基因替代疗法
大疱性表皮松解症 (EB) 是一种遗传性皮肤病，其特征是在轻微的机械创伤下，皮肤和粘膜上就会形成大面积的水疱和病变。这种疾病是由编码对皮肤稳定性至关重要的蛋白质的基因突变引起的。这些蛋白质中的一种功能受损、减少或缺失会导致皮肤脆弱，因为真皮和表皮之间的连接性降低。目前，基因疗法是唯一有可能治愈这种严重起泡性皮肤病的治疗选择。两种有希望的基因疗法可能适用于 EB：基因替换和基因组编辑。虽然遗传性皮肤病的基因组编辑仍处于临床前阶段，但基因替换方法在临床上已取得进展，并已应用于少数患有连接性和营养不良性 EB 的患者。在这里，将“野生型”转基因通过病毒转导到皮肤干细胞中，然后自体移植矫正后的表皮片，导致稳定皮肤的再生。基于设计核酸酶的基因编辑策略的最新进展使得建立替代方案以恢复遗传性皮肤病中的基因功能成为可能。在遗传组合阻碍基于基因治疗的基因替换的情况下，这一点尤其正确。
遗传性皮肤病的细胞和基因联合治疗
细胞疗法是一种将干细胞移植到药物产品（ATMP）中的疗法，既可以原封不动地移植到细胞疗法中，也可以通过之前对其基因组进行修改（基因疗法）来移植。许多基于干细胞的细胞和基因疗法已经进入临床试验，涵盖了广泛的疾病，但只有少数获得了政府批准和注册，例如 Holoclar（Pellegrini 等人，2018 年）和 Strimvelis（Aiuti 等人，2017 年）。因此，细胞和基因联合治疗正成为再生医学的核心资产，其目的是替换、设计或再生无法挽回的受损人体组织或器官，从而恢复其正常功能。在可能受益于这种组合的组织中，皮肤是最具吸引力的组织之一，原因有几个。表皮角质形成细胞可以通过普通的皮肤活检轻松收集（Rheinwald 和 Green，1975 年）。角质形成细胞培养物含有特征明确的干细胞，被定义为全克隆（Barrandon 和 Green 1987；Hirsch 等人 2017），长期以来一直被安全地用于在大面积全层皮肤烧伤中永久再生功能性表皮以挽救生命（Gallico 等人 1984；Pellegrini 等人 1999b；Ronfard 等人 2000；De Luca 等人 2006）。与造血系统一样，与更复杂的组织或器官不同，因此表皮培养物可以临床转化为临床环境。移植的培养表皮可以在患者的一生中轻松监测，如果发生任何不良事件，可以随时移除。最后，已经获得了关于成功和安全地使用转基因表皮培养物修复人类表皮以治疗特定遗传皮肤病——大疱性表皮松解症 (EB) 的确凿原理证据 (Mavilio 等人 2006 年；De Rosa 等人 2014 年；Siprashvili 等人 2016 年；Bauer 等人 2017 年；Hirsch 等人 2017 年)。多种严重的单基因皮肤病的鉴定（Tadini 等人，2015 年）使表皮成为细胞和基因联合治疗方法平台的有吸引力的候选对象，这可能会成为临床现实，这一目标已经通过转基因造血干细胞用于遗传免疫缺陷的基因治疗和 CAR-T 细胞（嵌合抗原受体-基因工程 T 细胞）用于 B 细胞的免疫治疗实现。