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医学基因工程
“ Breakthrough”是大多数医生，研究人员和受人尊敬的记者都避免了一个词。但是，来自格拉斯哥的约翰·保罗教授最近使用它来描述在对药物研究协会讲话时的基因工程。他可能是对的。遗传操作主要仅在过去十年中开发，是将细胞的遗传物质的过程：从一个细胞的一个例子中更改基因（DNA的序列），将人类细胞包插入另一个细胞，通常是细菌，并且可以发挥作用。已经使用这些技术人类胰岛素，生长激素和干扰素是由细菌细胞产生的。已经获得了洞察力，其中已经获得了基本细胞功能，肿瘤病毒的行为以及某些遗传疾病的机制。这些新想法影响了各种生物学工作。他们的影响很快就会到达全科医生，他们应该能够开出细菌制造的人类胰岛素。尽管这些技术非常复杂，但基因工程的原理足够简单，可以理解任何医生。有三个问题要提出：首先，准备适当的基因；其次，将它们插入“影响”的生物体中，以便它们在生物体中复制；第三，为了确保插入的基因表达 - 那就是影响生物实际上会产生编码的蛋白质。段，该酶是自然存在的酶，这些酶在定义的点上裂解DNA链。替代地，可以合成小基因：可以在实验室中组合核酸，目前可以合并到最高约100个组成碱的长度，或者可以从Messen-Gerger RNA的模板中合成少量DNA，从而通过反向转录酶产生的Messengerger RNA的模板（可以通过某些tumor ver verse dna vere vera）来制作dna。使用质粒和噬菌体将段插入有效的有机体中 - 通常是大肠杆菌。质粒是细菌中发现的小包DNA，可以从一种细菌传递到另一种细菌。他们以医生的能力转移抗生素耐药性而闻名。通过使用适当的酶，可以将外源DNA的切片插入质粒中包含的DNA中。质粒进入细菌细胞，同时存在
提供基因组编辑试剂：RNP 还是质粒？ - NET
当该技术首次被发现时，需要构建质粒载体来表达 Cas 酶和 gRNA，因为长合成 RNA 非常昂贵且不广泛可用。转染的质粒将利用细胞的转录和翻译机制来产生 Cas 蛋白和 gRNA。然而，现在大量数据表明这种方法效率低下，并且会产生很高的脱靶效应。将 Cas 蛋白和 gRNA 作为核糖核蛋白 (RNP) 复合物递送是一种有效且经过验证的方法，与质粒表达载体相比具有多种优势。
识别指南（GRNA）
第1天：转染。将GRNA - 黎病毒质粒与病毒包装质粒一起转染到HEK293T细胞中。第2天：第一批病毒的收获。早上用新鲜培养基代替转染介质，并在8小时后收集第一批细胞上清液。第3天：第二批和第三批病毒的收获。分别在清晨和午后收集细胞上清液。使用45μm的孔滤器过滤慢病毒上清液，以去除所有剩余的细胞碎片。立即使用它或等分病毒存储在-80°C下。3。病毒感染。
diatom nitzschia captiva的遗传转化方法
内共生症在海洋环境中是一种广泛且在生态上具有重要意义的现象。这些内共生伙伴如何发展为具有新细胞器的有机体，仍然是未知的，需要调查现代共生体。dinotoms，具有进化中间硅质质体的dinoflagellates，被认为是研究细胞器发生的出色模型，因为它们在连续三个但不同的阶段保持了。努力了解宿主的鞭毛藻 - 结合硅藻的关系受到了共生的任何一个成员的遗传转化方法的限制。为了解决这种缺陷，我们修改了现有的硅藻生物和共轭转化方法和硅藻nitzschia captiva的冷冻保存方案，这是kleptoplastic dinotom dinotom dinotom dinotom dinotom duinotom durinskia capensis的重要猎物。Through the use of Phaeo dactylum tricornutum, Cylindrotheca fusiformis, and native Nitzschia captiva diatom designed plasmids, we suc cessfully express and target EGFP to the cytosol, mitochondria, and plastids of N. captiva, and visualize these organelles inside D. capensis in vivo, allowing specific labeling and tracking of摄入后的细胞器和蛋白质。此外，我们尝试利用CRISPR/CAS9来瞄准引入的EGFP基因，但找不到成功基因编辑的证据。
CYP2J13双镍酶质粒（M）：SC-432940-NIC
双镍酶质粒被视为“许可产品”，应按照www.scbt.com/limitedlicense上规定的有限许可使用。购买此产品向买方购买了不可转让的使用权的产品，以及仅用于购买者在其实验室中进行的研究目的的所有重复和衍生品（无论买方是学术还是营利性实体）。买方不能出售或以其他方式转移（a）本产品（b）使用此产品或其组件制成的材料或（c）将其组件或其组件制成的材料或以其他方式使用本产品，其组件或使用此产品或其组件制造的材料或材料出于商业目的。
在抗氨基糖苷耐药葡萄球菌金黄色葡萄球菌中的氨基糖苷修饰酶（AME）的分子表征：伊朗东北部的一项横断面研究
靶标和结合渗透性降低，（iv）突变（7）。通过氨基糖苷修饰酶（AMES）对抗生素失活是对氨基糖苷耐药性的主要机制（8,9）。 AME由几个基因在细菌物种之间水平转移，从而产生其他细菌耐药机制（10）。 对氨基糖苷的抗性主要由五类AME介导，如下所示：Aminoglycoside-6'-N-N-乙酰基转移酶/2'' - O- o-磷酸溶质转移酶[AAC（6''）/APH（2''）]由AAC（6'）/APH（6'）/APH（2'）/aph（2''）Gene; Aminoglycoside-3'-o-磷酸磷酸化酶III [APH（3'）-III]由APH（3'）-IIIA基因编码；氨基糖苷-4'-o-磷酸磷酸化酶i [ant（4'） - i]由ant（4'） - ia基因编码；由ANT（9） - I基因编码的氨基糖苷-9-O核苷酸转移酶I [ANT（9）-i]和ANT（6） - I Gene编码的ANT（9） - I基因和氨基糖苷-6-O-Nucleotidyltransferase I [ANT（6）-I]。 在葡萄球菌中，蚂蚁（4'） - i，aac（6'）/aph（2''）和aph（3'）-III分别是影响毒霉素，庆大霉素和卡纳米霉素的最常见的AME（11）。 双功能AME AAC（6'） / aph（2英寸）赋予对除链霉素以外的几乎所有氨基糖苷的抗性（12）。< / div> The aac(6')-Ie/aph(2")-Ia (also named aacA - aphD ) gene has been located on the plasmids, transposons such as Tn 4001 (in S. aureus ), Tn 5281 (in enterococci), and Tn 4031 (in S. epidermidis ) and the other mobile genetic elements, increasing the aminoglycoside resistance and the对其他化合物的抗性（13） 在欧洲，亚洲和南美国家中报道了高级庆大霉素耐药性（HLGR）的增加。 材料和方法通过氨基糖苷修饰酶（AMES）对抗生素失活是对氨基糖苷耐药性的主要机制（8,9）。AME由几个基因在细菌物种之间水平转移，从而产生其他细菌耐药机制（10）。对氨基糖苷的抗性主要由五类AME介导，如下所示：Aminoglycoside-6'-N-N-乙酰基转移酶/2'' - O- o-磷酸溶质转移酶[AAC（6''）/APH（2''）]由AAC（6'）/APH（6'）/APH（2'）/aph（2''）Gene; Aminoglycoside-3'-o-磷酸磷酸化酶III [APH（3'）-III]由APH（3'）-IIIA基因编码；氨基糖苷-4'-o-磷酸磷酸化酶i [ant（4'） - i]由ant（4'） - ia基因编码；由ANT（9） - I基因编码的氨基糖苷-9-O核苷酸转移酶I [ANT（9）-i]和ANT（6） - I Gene编码的ANT（9） - I基因和氨基糖苷-6-O-Nucleotidyltransferase I [ANT（6）-I]。在葡萄球菌中，蚂蚁（4'） - i，aac（6'）/aph（2''）和aph（3'）-III分别是影响毒霉素，庆大霉素和卡纳米霉素的最常见的AME（11）。双功能AME AAC（6'） / aph（2英寸）赋予对除链霉素以外的几乎所有氨基糖苷的抗性（12）。< / div>The aac(6')-Ie/aph(2")-Ia (also named aacA - aphD ) gene has been located on the plasmids, transposons such as Tn 4001 (in S. aureus ), Tn 5281 (in enterococci), and Tn 4031 (in S. epidermidis ) and the other mobile genetic elements, increasing the aminoglycoside resistance and the对其他化合物的抗性（13）在欧洲，亚洲和南美国家中报道了高级庆大霉素耐药性（HLGR）的增加。材料和方法本研究试图确定金黄色葡萄球菌和编码AMES和FEMA的临床分离株中抗生素耐药性的频率，AMES和FEMA是金黄色葡萄球菌在金黄色葡萄球菌中表达甲基甲基蛋白耐药性必不可少的，并且还参与了北极蛋白酶蛋白酶的葡萄球菌细胞Wall的生物合成。
HP1γ 双切口酶质粒 (h): sc-417205-NIC
双切口酶质粒被视为“许可产品”，应根据 www.scbt.com/limitedlicense 上规定的有限许可使用。购买本产品即向买方转让不可转让的权利，买方有权将所购买的产品数量以及所有复制品和衍生物仅用于买方在其实验室进行的研究目的（无论买方是学术实体还是营利实体）。买方不得向第三方出售或以其他方式转让 (a) 本产品 (b) 其组件或 (c) 使用本产品或其组件制成的材料，或以其他方式将本产品或其组件或使用本产品或其组件制成的材料用于商业目的。
什么是质粒DNA？质粒生产如何工作？
需要DNA：生产mRNA需要DNA模板。为此，生物制药行业使用plasmide。只有一小部分质粒DNA编码所需的蛋白质，例如SARS-COV-2的尖峰蛋白。大多数质粒将DNA带入所需的环形。这对于能够再现所需的DNA序列至关重要。
在微生物 CRISPR 干扰中使用缩短和随机 sgRNA 文库筛选新靶基因
摘要：CRISPR 干扰（CRISPRi）筛选已用于使用单分子向导 RNA（sgRNA）文库识别与特定表型相关的靶基因。在 CRISPRi 筛选中，包含原始靶标识别序列的随机 sgRNA 文库的大小很大（∼ 10 12 ）。在本文中，我们证明 sgRNA 中的靶标识别序列（TRS）的长度可以从原来的 20 个核苷酸（N 20 ）缩短到 9 个核苷酸（N 9 ），这仍然足以使 dCas9 抑制大肠杆菌木糖操纵子中的靶基因，无论其与启动子还是开放阅读框区结合。基于结果，我们构建了 TRS 长度 5′ 缩短的随机 sgRNA 质粒文库，并通过对从 Xyl − 表型细胞中纯化的 sgRNA 质粒进行桑格测序来识别木糖代谢靶基因。接下来，利用随机 sgRNA 文库筛选靶基因，以增强合成大肠杆菌细胞中紫色素的产生。通过分析深紫色菌落中 sgRNA 质粒中的 TRS 冗余度，选择了 17 个靶基因。其中，已知有 7 个基因（tyrR、pykF、cra、ptsG、pykA、sdaA 和 tnaA）可增加细胞内 L-色氨酸池（紫色素的前体）。17 个细胞中每个靶基因有一个缺失，紫色素的产量显著增加。这些结果表明，使用缩短的随机 TRS 文库进行 CRISPRi 可以简单且经济高效地进行基于表型的靶基因筛选。关键词：CRISPR 干扰、失活 Cas9、随机文库、缩短的 sgRNA、靶标识别序列、紫色素、基于表型的靶标筛选■简介