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使用马铃薯 X 病毒载体中的非间隔 sgRNA 阵列工程进行高效的 Cas9 多重编辑
基于成簇、规则间隔、短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas) 的系统彻底改变了许多生物体（包括植物）的基因组编辑。植物中的大多数 CRISPR-Cas 策略依赖于使用农杆菌进行遗传转化来提供基因编辑试剂，例如 Cas 核酸酶或合成向导 RNA (sgRNA)。虽然 Cas 核酸酶是编辑方法中的恒定元素，但 sgRNA 是靶向特异性的，通常需要筛选过程来识别最有效的 sgRNA。植物病毒衍生载体是将 sgRNA 快速有效地递送到成年植物中的一种替代方法，因为病毒具有基因组扩增和系统运动的能力，这种策略称为病毒诱导的基因组编辑。我们对马铃薯病毒 X (PVX) 进行了改造，以构建一种可在成年茄科植物中轻松表达多个 sgRNA 的载体。使用基于 PVX 的载体，本氏烟基因被有效靶向，在组成性表达化脓性链球菌 Cas9 的转化株系中产生近 80% 的插入/缺失。有趣的是，结果表明 PVX 载体允许表达不间隔 sgRNA 阵列，在成年植物组织中几天内实现高效的多重编辑。此外，可以从受感染组织或受感染植物种子再生的植物中获得无病毒编辑的后代，这些后代表现出高遗传双等位基因突变率。总之，这种新的 PVX 载体可以轻松、快速和高效地表达 sgRNA 阵列以进行多重 CRISPR-Cas 基因组编辑，并将成为跨不同植物物种（尤其是茄科作物）进行功能基因分析和精准育种的有用工具。
利用“全内”技术在肝细胞中进行离体/体内基因编辑...
肝脏是细胞和基因治疗以及基因编辑的首选器官，因为遗传性疾病众多且常常危及生命。已证明酪氨酸血症小鼠作为模型生物的 HDR 可以纠正该疾病，尽管不诱导 DSB 的同源重组效率非常低（Paulk 等人，2010 年；Junge 等人，2018 年）。在类似的小鼠模型中，通过流体动力学 DNA 注射（Yin 等人，2014 年）和非病毒 Cas9 mRNA 与腺相关病毒 (AAV) 载体介导的 HDR 模板递送相结合（Yin 等人，2016 年）证明了 CRISPR/Cas9 介导的表型拯救。AAV 载体已成为肝脏的基因递送载体，据报道在人体临床试验中具有令人印象深刻的治疗效果（Nathwani 等人，2014 年）。最近，在一个载体上编码化脓性链球菌 Cas9 (SpCas9) 表达盒，在另一个载体上编码引导 RNA (gRNA) 和修复模板的双 AAV 载体系统的应用，逆转了新生小鼠鸟氨酸转氨甲酰酶基因的突变 ( Yang et al., 2016 )。这种体内基因编辑工具在两个载体上的分段归因于 AAV 的拟议包装尺寸限制，即 4.9 kb ( Grieger and Samulski, 2005 ) 至 5 kb ( Wu et al., 2010 )。两种不同的 AAV 载体共同递送是可行的，每种载体编码所需成分的一部分，这些成分在细胞内通过转剪、同源重组或内含肽重新结合（ Truong 等人， 2015 ），但在体内发生率较低（ Xu 等人， 2004 ）。
胞嘧啶基础编辑器针对马铃薯原生质体中的基因组编辑进行了优化
在这项研究中，我们生成并比较了三个针对马铃薯（卵巢结核）制成的胞苷碱基编辑器（CBE），该量子量其最多赋予了原生质体池中所有等位基因的43％C-T转换。早些时候，基因编辑的马铃薯植物是通过聚乙烯二烯介导的CRISPR/CAS9转化原生质体的转化而成功产生的。在一项研究中，通过用内源性马铃薯ST U6启动子替换U6-1启动子的标准拟南芥，从而获得了3 - 4倍的编辑效率。在这里，我们使用了这种优化的构建体（SP Cas9/ st u6-1 :: grna1，Target GRNA序列GGTC 4 C 5 TTGGAGC 12 AAAAAC 17 TGG）用于生成CBES量身定制的马铃薯，并测试了用于C-T碱基编辑的CBES在Granule-Bounchase-bound starch synthase 1 Gene中的C-T碱基编辑。首先，将链球菌CAS9转化为（D10A）Nickase（NCAS9）。接下来，来自人hapobec3a（A3a），大鼠（EVO_RAPOBEC1）（RA1）或Sea Lamprey（EVO_ PM CDA1）（CDA1）的三种胞质脱氨酶之一（cda1）与NCAS9和A尿素 - DNA Glycosylase融合了C-Encas9（CDA1）与每种模块化的链接。CBE的总体高度有效，A3A具有最佳的总体基础编辑活动，平均为34.5％，34.5％和27％的C-T转换为C4，C5和C12，而CDA1的平均基础编辑活动的平均基础编辑活性为34.5％，34％，34.5％，14.25％C4和C4，C4和C4，C4和C4，C4和C4，C4。ra1在C4和C5时表现出平均基础编辑活性为18.75％，19％的基础编辑活动，是唯一在C12时显示C-TO-T转换的基本编辑器。
摘要。 Babatunde OJ，Ogundare AO，Adebolu TT。 2023年。多种抗生素 - 抗抗菌抗菌的抗菌活性
摘要。Babatunde OJ，Ogundare AO，Adebolu TT。2023。longifolia叶提取物的抗菌活性对从尼日利亚阿库尔医院的医院的多种抗生素耐药细菌上进行的抗菌活性。Nusantara Bioscience 15：149-160。polyalthia longifolia（Sonn。）是一种观赏植物，据说在寻找新药物以治疗由多种抗生素耐药细菌（MAR）引起的感染时具有治疗性。研究了这种植物的叶子，以针对阿库尔（Akure）选定医院及其药理特性中的Fomites中的MAR分离的前瞻性抗菌活性。标准的微生物方法用于分离和鉴定来自富米特的细菌。椎间盘扩散，以测试其对用乙醇和水制成的常规抗生素和长叶叶叶叶叶提取物的敏感性。ciprotab®被用作抗菌测定期间的对照。因此，使用标准方法进行GC-MS分析以鉴定植物叶提取物中的化学物质。金黄色葡萄球菌（29.17％），甲链球菌（20.83％），铜绿假单胞菌（14.28％），大肠杆菌（14.28％），typhi（14.28％），typhi（12.5％）和klebbsiella syteriate（8.33％）（8.33％）。在这项研究中进行了取样。粗乙醇叶（100mg/ml）的粗乙醇叶提取物抑制了这些生物的生长，其对铜绿假单胞菌的影响最大，值为23.83±0.44 mm，这比对照抗生素（ciprofloxacin）的药物优越。对长叶叶叶叶菌的纯化叶提取物的GC-MS分析揭示了存在生物活性化合物，例如N-己二烷酸和Phytol等。研究表明，长叶叶枝的叶提取物可以抑制来自富米特的分离的MAR的生长，并增加cidal效应，并且随着浓度和暴露时间的增加而抑制增加。
使用...
摘要：细菌感染引起的疾病，尤其是耐药细菌引起的疾病威胁着全世界的人类健康。已经预测，早期诊断和治疗将有效降低由细菌感染引起的死亡率。因此，迫切需要开发有效的方法来早日检测细菌感染并尽快治疗它们。一些细菌可用于治疗细菌感染，例如大肠杆菌（大肠杆菌），金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，沙门氏菌spp，klebsiella spp，klebsiella肺炎幽门螺杆菌。使用纳米颗粒的纳米技术驱动的方法可以选择性地靶向并破坏细胞内的致病细菌，克服常规药物递送挑战。 纳米颗粒由于其独特的特性（例如高表面积与体积比率）以及用于靶向递送的功能化的能力而越来越有效地治疗细菌感染。 纳米颗粒，例如聚合物胶束，纳米注合体和金属纳米颗粒，可增强药物的生物利用度，稳定性和靶向，从而提高治疗有效性并最大程度地减少副作用。 关键词：细菌感染，药物输送，纳米颗粒，抗生素剂，药物靶向。使用纳米颗粒的纳米技术驱动的方法可以选择性地靶向并破坏细胞内的致病细菌，克服常规药物递送挑战。纳米颗粒由于其独特的特性（例如高表面积与体积比率）以及用于靶向递送的功能化的能力而越来越有效地治疗细菌感染。纳米颗粒，例如聚合物胶束，纳米注合体和金属纳米颗粒，可增强药物的生物利用度，稳定性和靶向，从而提高治疗有效性并最大程度地减少副作用。关键词：细菌感染，药物输送，纳米颗粒，抗生素剂，药物靶向。Even nanoparticles like Silver Nanoparticles (AgNPs), Gold Nanoparticles (AuNPs), Zinc Oxide Nanoparticles (ZnO NPs), Copper Nanoparticles (CuNPs), Iron Oxide Nanoparticles (Fe3O4 NPs), Chitosan Nanoparticles, Titanium Dioxide Nanoparticles (TiO2 NPs), Graphene Oxide纳米颗粒，二氧化硅纳米颗粒，聚合物纳米颗粒也对细菌感染的治疗也非常有用，因为它们可以封装抗生素或抗菌剂，以提供持续释放并靶向细菌感染（Xu等，2019）。
摘要。 Babatunde OJ，Ogundare AO，Adebolu TT。 2023年。多种抗生素 - 抗抗菌抗菌的抗菌活性
摘要。Babatunde OJ，Ogundare AO，Adebolu TT。2023。longifolia叶提取物的抗菌活性对从尼日利亚阿库尔医院的医院的多种抗生素耐药细菌上进行的抗菌活性。Nusantara Bioscience 15：149-160。polyalthia longifolia（Sonn。）是一种观赏植物，据说在寻找新药物以治疗由多种抗生素耐药细菌（MAR）引起的感染时具有治疗性。研究了这种植物的叶子，以针对阿库尔（Akure）选定医院及其药理特性中的Fomites中的MAR分离的前瞻性抗菌活性。标准的微生物方法用于分离和鉴定来自富米特的细菌。椎间盘扩散，以测试其对用乙醇和水制成的常规抗生素和长叶叶叶叶提取物的敏感性。ciprotab®被用作抗菌测定期间的对照。因此，使用标准方法进行GC-MS分析以鉴定植物叶提取物中的化学物质。金黄色葡萄球菌（29.17％），甲链球菌（20.83％），铜绿假单胞菌（14.28％），大肠杆菌（14.28％），typhi（14.28％），typhi（12.5％）和klebbsiella syteriate（8.33％）（8.33％）。在这项研究中进行了取样。粗乙醇叶（100mg/ml）的粗乙醇叶提取物抑制了这些生物的生长，其对铜绿假单胞菌的影响最大，值为23.83±0.44 mm，这比对照抗生素（ciprofloxacin）的药物优越。对长叶叶叶叶菌的纯化叶提取物的GC-MS分析揭示了存在生物活性化合物，例如N-己二烷酸和Phytol等。研究表明，长叶叶枝的叶提取物可以抑制来自富米特的分离的MAR的生长，并增加cidal效应，并且随着浓度和暴露时间的增加而抑制增加。
CRISPR Prime编辑的自动设计，用于56,000人的病原变体
Neoformans是真菌性脑膜炎的最常见原因，是一种基础性菌群单倍体发芽的酵母，具有完整的性周期。通过生物学转化和长长的同源臂，通过同源重组进行基因组修饰是可行的，但是该方法是艰巨而不可靠的。最近，多个小组报道了使用CRISPR-CAS9作为生物学的替代方案，但仍然有必要使用长期的HOMOLOG ARM，从而限制了该方法的实用性。由于在先前研究中使用的链球菌CAS9衍生物在Neoformans中没有选择用于表达，因此我们设计，合成并测试了全梭状芽胞杆菌（C. neoformans）的全念珠菌（CNO）Cas9。我们发现，CAS9仅带有常见的Neoformans密码子和共有的C. Neoformans内含子以及TEF1启动子和终结器以及核定位信号（CNO Cas9或“ CNOCAS9”）可靠地可靠地在C. Neoformans菌株中可靠地编辑基因组。此外，使用带有短（50bp）同源臂的供体来完成编辑，这些捐赠者附着于标记DNA上，这些供体与合成的寡核苷酸和PCR扩增一起产生。我们还证明，先前的CNOCAS9稳定整合进一步增强了转移和同源重组效率。重要的是，这种操作不会影响动物的毒力。我们还建立了一个通用标记的模块，该模块具有密码子优化的荧光蛋白（Mneongreen）和一个串联的钙调蛋白结合肽-2X标志标签，允许对蛋白质进行本地化和纯化研究，以对相应的基因进行简短授权的重新构造对相应的基因进行修改。这些工具使Neoformans中的短体系基因组工程能够。
乙酰杆菌中的基因组工程内源性CRISPR/CAS系统，乙酰杆菌和梭状芽胞杆菌自动乙醇
乙细菌可以通过将CO 2转换为工业相关的化学物质和燃料的能力来在净零中发挥重要作用。对该潜力的全面开发将依靠有效的代谢工程工具，例如基于链球菌的链球菌CRISPR/CAS9系统的工具。然而，试图将含Cas9的载体引入木质杆菌的尝试不成功，这很可能是由于Cas9核酸酶毒性的毒性，并且存在内源性a。Woodii限制的识别位点 - cas9 Gene中的Modiiii限制（R -M）系统。作为替代方案，本研究旨在促进将CRISPR/CAS内源系统作为基因组工程工具的开发。因此，开发了一个Python脚本，以自动化杂质的邻近基序（PAM）序列的预测，并用于识别A. woodii I型I型I-B CRISPR/CAS系统的PAM候选。分别通过干扰测定和RT-QPCR在体内表征识别的PAM和本地领导者序列。由本机领导者序列，直接重复和足够的间隔者组成的合成CRISPR阵列的表达，以及用于同源重组的编辑模板，成功地导致了300 bp和354 bp的生成Pyre和Pye和PheA的架子内缺失。为了进一步验证该方法，还产生了3.2 kb的HSDR1缺失，以及在PHEA基因座的荧光激活和吸收转换TAG（快速）报告基因的敲入。同源臂长度，细胞密度和用于转化的DNA量显着影响编辑的效率。随后将设计的工作流应用于梭状芽胞杆菌的I型I-B CRISPR/CAS系统，从而使Pyre的561 bp框架内缺失具有100％的编辑效率。这是使用其内源性CRISPR/CAS系统的A. woodii和C.自身乙烷的基因组工程的第一个报告。
crispr-cas9：超越生殖系的生物伦理争论
CRISPR-Cas9 系统在其自然状态下被认为是细菌和古菌中存在的一种抵抗噬菌体再感染的免疫形式 (2)；而在其人工形式下，它是一种设计简单、使用简单、效率高的基因编辑工具 (10)。 1987 年，通过对大肠杆菌（Escherich, 1885）的核苷酸进行测序，首次发现了后来被称为 CRISPR 区域的重复同源 DNA 序列（11）。 21世纪初，它的一些生物学功能被确定（12），然后，这些区域与一组Cas基因相关。 2005 年和 2007 年，这些回文结构针对病毒再感染的免疫作用得到了实验验证（13），一年后，指导抗病毒防御的 RNA 链（crRNA）的参与被联系起来（14）。 CRISPR-Cas9 的基本成分主要在化脓性链球菌 (Rosenbach 1884) 中被描述，这要归功于 Doudna 和 Charpentier (1) 的工作，他们当时建议通过重新设计 Cas9 复合物将其用作基因组编辑工具。后
英国贸易和投资委员会
在对哥特防线战役期间的 1,000 处伤口进行调查后发现，最初脓毒症的病原体是金黄色葡萄球菌。化脓性链球菌（溶血性链球菌）很少发现。CCS 手术前伤口的感染发生率约为 51%。在运输过程中未受干扰的伤口中，在 CCS 仅通过手术治疗时，49% 被感染，23% 发生脓毒症；通过手术和磺胺粉治疗，感染率分别为 43% 和 11%；通过手术和青霉素-磺胺噻唑粉治疗，感染率分别为 25% 和 7%。5 到 10 天后在基地医院检查时。因此，单纯手术并不能完全清除新伤口的感染。其效果是使伤口处于最佳状态以处理残留的感染。局部应用磺胺具有抑菌作用；因为尽管感染细菌仍然存在，但其活性被抑制，因此脓毒症的发生率降低。同样应用的青霉素磺胺噻唑粉末更有效；因为使用后，大约一半感染伤口中的感染球菌被破坏，脓毒症的发生率同样低。在所有化疗组中，在 CCS 12 小时内手术的伤口感染发生率低于 12 至 24 小时内手术的伤口。受伤到抵达基地医院之间的时间长短对感染率没有显著影响。在 CCS 和基地医院之间重新包扎过的伤口比未经包扎的伤口感染率更高。缝合的结果说明了在 CCS 通过手术和化疗控制感染的重要性。缝合时伤口中存在化脓性菌会对结果产生不利影响。未感染这些菌的伤口，无论看起来干净还是肮脏，80% 到 85% 都能获得 I 级愈合；而被感染的伤口，即使看起来干净，成功率也较低。在伤口局部使用青霉素时，伤口中存在对青霉素有一定耐药性的葡萄球菌并不影响缝合的结果。