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使用创新方法克隆和表达 UbiA 人类基因，在 PUAST 载体中生产重组蛋白
简介：Gal4/UAS 调控的转基因系统文库已被证明是一种强大的遗传系统，可用于识别基因和定义发育途径。该系统提供了宝贵的见解，强调了动物和人类之间的进化保守性。目标：本研究的目的是克隆、表达和表征 UbiA 基因。该研究提出了一种高效的基因克隆方法，使用 UbiA -pcDNA3 基因作为哺乳动物克隆的模型。然后将这些基因整合到果蝇的 PUAST 载体中，这是一种常用于生产重组蛋白的表达载体和真核细胞系统。材料和方法：从人细胞中分离 UbiA，并合成互补 DNA。根据 UbiA 基因序列设计寡核苷酸引物对，分别在正向和反向引物的 5' 端加入 XhoI 和 Xbal 限制位点。然后通过 PCR 扩增 UbiA 基因，克隆到 pcDNA3 质粒中，并对得到的重组质粒进行测序。随后将该基因亚克隆到PUAST载体中，在真核细胞系统中S2细胞中表达，通过Western印迹技术进行蛋白测定和验证。结果：通过菌落PCR和酶切验证UbiA基因克隆到PUAST载体中，通过酶切和基因测序验证克隆和亚克隆技术。克隆的UbiA基因与同源基因的同一性为99%。Western印迹结果表明纯化的蛋白为一条60kDa的单条带。结论：利用PUAST载体提供的真核表达系统可以实现更多UbiA基因的蛋白合成，该技术已被证明是一个合适的平台，可用于治疗学、药理学和疫苗开发等各种应用。
使用创新方法的Ubia人类基因的克隆和表达，用于PUAST载体中的重组蛋白质的产生
简介：被证明是GAL4/UAS调节的转基因的系统库，已被证明是识别基因和定义发育途径的强大遗传系统。该系统提供了有价值的见解，可以突出动物与人之间的进化保护。目标：这项研究的目的是克隆，表达和表征UBIA基因。该研究使用UBIA -PCDNA3基因作为哺乳动物克隆的模型提出了克隆基因的高效方法。然后将这些基因整合到果蝇的puast载体中，果蝇是一种表达载体和真核细胞系统，通常用于产生重组蛋白。材料和方法：从人类细胞中分离出UBIA，并合成互补的DNA。基于UBIA基因序列设计了一个寡核苷酸引物对，分别在正向和反向引物的5端掺入Xhoi和Xbal限制位点。然后通过PCR扩增UBIA基因，克隆到PCDNA3质粒中，并测序所得的重组质粒。随后，将基因sub clone到Puast载体中，并在S2细胞中以真核细胞系统表示。蛋白质的确定和验证是通过蛋白质印迹技术进行的。结果：通过酶菌落-PCR和酶消化实现了将UBIA基因克隆到Puast载体中的确认。克隆和子克隆技术通过酶消化验证，以及基因测序。克隆的UBIA基因与相同基因之间的身份呈现99％。，我们通过60 kDa大小的蛋白质印迹揭示了一种奇异的带纯化蛋白质。结论：通过使用PUAST载体提供的真核表达系统，可以实现更多蛋白质基因的蛋白质合成。该技术已被证明是一个合适的平台，可以在治疗，药理学和疫苗开发等各种应用中发挥作用。
Abrysvo，INN-呼吸道合胞病毒疫苗（双价，重组）
该药品需要接受额外监测。这将可以快速识别新的安全信息。请医疗保健专业人员报告任何疑似不良反应。有关如何报告不良反应，请参阅 4.8 节。 1. 药品名称 Abrysvo 注射用粉末和溶剂 呼吸道合胞病毒疫苗（二价，重组） 2. 定性和定量组成 重构后，一剂（0.5 mL）含： RSV 亚群 A 稳定的融合前 F 抗原 1.2 60 微克 RSV 亚群 B 稳定的融合前 F 抗原 1.2 60 微克（RSV 抗原）1 通过重组 DNA 技术在中国仓鼠卵巢细胞中产生的融合前构象稳定的糖蛋白 F 2。有关辅料的完整列表，请参阅第 6.1 节。 3. 药物形式 注射用粉末和溶剂。粉末为白色。该溶剂是无色透明液体。 4. 临床特点 4.1 治疗指征 Abrysvo 适用于： • 在怀孕期间进行母亲免疫接种后，为从出生到 6 个月大的婴儿提供针对呼吸道合胞病毒 (RSV) 引起的下呼吸道疾病的被动保护。请参阅第 4.2 和 5.1 节。 • 对 60 岁及以上的个人进行主动免疫，以预防由 RSV 引起的下呼吸道疾病。该疫苗的使用应符合官方建议。 4.2 用法用量和给药方法 用法用量 孕妇应在妊娠第 24 至 36 周之间注射单剂量 0.5 mL（请参阅第 4.4 和 5.1 节）。
重组-DNA技术 - 一个动力 - 遗传 -
重组DNA技术在遗传指纹识别中发现了宝贵的应用，尤其是在法医和医学领域。DNA指纹识别可鉴定细菌或病毒病原体的来源，从而促进疾病暴发的研究和遏制。在生物恐怖袭击的情况下，例如在美国臭名昭著的炭疽事件，DNA指纹在追踪病原体的起源中起着重要作用。同样，在医学疏忽案件中，该技术已被用来将人类免疫缺陷病毒（HIV）（HIV）等疾病的传播与特定的医疗保健提供者联系起来。此外，在食源性疾病爆发期间，DNA指纹有助于识别污染的来源，从而允许有针对性的干预措施确保公共安全（Black WJ，1989）。
流感A（H3N2）谱系细胞培养衍生的候选疫苗病毒1或重组疫苗抗原，用于疫苗的开发和生产
流感 A(H3N2) 谱系细胞培养衍生的候选疫苗病毒 1 或重组疫苗抗原，用于开发和生产用于 2024-2025 年北半球流感季节的疫苗。世卫组织全球流感监测和应对系统 (GISRS) 的世卫组织合作中心 (CC) 已使用认证细胞系（如 MDCK 33016 PF a、NIID-MDCK b）分离人流感病毒。世卫组织 CC 还对细胞培养的候选疫苗病毒 (ccCVV) 进行抗原和基因分析。除非另有说明，这些 ccCVV 已通过针对符合世卫组织建议 2 的细胞培养繁殖原型病毒的双向血凝抑制 (HI) 或病毒中和 (VN) 测试。世卫组织 CC 尚未对这些 ccCVV 进行任何其他测试（包括外来因子）。国家或地区监管部门通常会批准每个国家使用的流感疫苗的生产、成分和配方 3 。制造商应咨询相关国家或地区监管部门，了解使用这些 ccCVV 进行流感疫苗生产的适用性。
RNase抑制剂 - 重组
描述：RNase抑制剂是一种重组蛋白，它完全抑制了包括RNase A，B和C在内的广泛的真核RNase，它通过以1：1的比率与高亲和力（4 x 10 -14 m）抑制RNase。它不抑制RNase I，T1，T2，H，U1，U2和CL3。此外，RNase抑制剂没有对聚合酶或逆转录酶活性的抑制作用，因此可用于cDNA合成和一步性RT-PCR反应。RNase抑制剂的鼠版本缺乏在人类版本中鉴定出的一对半胱氨酸，因此它显着提高了对氧化的耐药性。
重组 DNA 技术
重组 DNA 技术摘要 检查或合并来自一个或多个生物体的 DNA 片段的过程称为重组 DNA 技术。这涉及将所需的 rDNA 插入目标细胞的基因组或将其引入宿主细胞进行复制。随着动物生物技术的进步，重组 DNA 技术彻底改变了农业产业。通过使用 rDNA 技术，可以控制基因学习新任务并翻译成感兴趣的植物和动物细胞。作为 rDNA 技术的一部分，从生物体中分离目标基因或 DNA 片段，连接到适当的克隆载体，然后将重组载体引入增殖宿主细胞。最后，分离和表征克隆的基因或 DNA 片段。食品行业、农业、环境、医学研究以及植物和动物生物技术是 rDNA 技术的主要应用领域。每个 rDNA 项目都必须遵守国家众多监管机构制定的严格法规和标准。尽管存在安全问题，但围绕遗传信息、人类基因组编辑和转基因物种的伦理问题仍然存在。关键词：分离、基因组 DNA。
重组青霉素G的定点诱变...
以往用化学方法生产抗生素的方法已经被一种更安全、更环保的方法所取代，即利用微生物作为宿主表达系统生产重组蛋白。为开发PGA的潜力，人们进行了不同阶段的研究，包括重组、基因表达、酶的分离纯化以及利用不同重组宿主进行酶活性测试。有报道称，从大肠杆菌和巨大芽孢杆菌中克隆和通过宿主细胞E. coli BL21(DE3)和DH5α生产重组PGA，并进行了许多优化。PGA的基因表达和分离是令人满意的，但该酶在酶促反应中的活性较低且尚未达到最佳[3]。PGA的低酶活性可能是由酶和底物的结合力较弱引起的。这一假设使我们找到了进一步提高酶活性的方法，即通过提高酶和底物之间的结合强度。
Abrysvo，Inn-Inn-呼吸综合病毒疫苗（二价，重组）
2由中国仓鼠卵巢细胞中的DNA重组方法产生。辅助物质的完整列表，请参见第6.1节。3。药物形式的粉末和溶剂，用于准备注射溶液。粉末是白色的。溶剂是一种透明的无色液体。4。详细的临床数据4.1使用Abrysvo疫苗的指示指示：•针对合成呼吸道病毒引起的下呼吸道疾病的被动保护（RSV，RSV，英语呼吸道合胞病毒）在怀孕期间母亲疫苗接种后从出生到6个月大的婴儿。参见第4.2和5.1点。•对60岁及60岁以上的人进行主动免疫免疫，以针对由RSV引起的下呼吸道疾病。应根据官方建议使用该疫苗。4.2剂量和施用孕妇剂量的剂量应在怀孕的24至36周之间给予0.5 ml的剂量（请参阅第4.4和5.1点）。
![ruconest®（C1酯酶抑制剂[重组]） - 事先授权/医疗必要性 - 联合医疗保健商业计划](/simg/d/d7abcee66a1b82c053a41440593cc0a9fcba8829.webp)
ruconest®（C1酯酶抑制剂[重组]） - 事先授权/医疗必要性 - 联合医疗保健商业计划
2。Maurer M，Magerl M，Ansotegui I等。国际WAO/EAACI遗传性血管性水肿管理指南 - 2017年修订和更新。过敏。2018年1月10日。3。wu，E。具有正常C1抑制剂的遗传性血管性水肿。in：uptodate，saini，s（ed），上升，马萨诸塞州沃尔瑟姆，2024年。4。Busse，P.，Christiansen，S.，Riedl，M。，Et。al。“美国HAEA医疗顾问委员会2020年遗传性血管性水肿的指南。”过敏和临床免疫学杂志。2020年9月5日。5。Maurer M，Magerl M，Betschel S等。 国际WAO/EAACI遗传性血管性水肿管理指南 - 2021年修订和更新。 过敏。 2022; 77（7）：1961-1990。doi：10.1111/all.15214Maurer M，Magerl M，Betschel S等。国际WAO/EAACI遗传性血管性水肿管理指南 - 2021年修订和更新。过敏。2022; 77（7）：1961-1990。doi：10.1111/all.15214