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通过双向启动子通过四环素共同调节两个基因活性通过双向启动子通过四环素共同调节两个基因活性
最近，我们描述了一个调节系统，该系统允许在较高的真核细胞系（1），植物（2）和动物（3,4）中严格控制单个基因活性。该系统的基本组件是（i）一个RNA聚合酶H最小启动子，放置在多个操作序列（TETO）的下游，其大肠杆菌tnjo Tetracycline抗性操纵子和（ii）TET抑制剂（TET）（TETR）和Simples Simples Simplex Virus Protein 16（vpp16（vp p p p）（ii）（ii）（ii）融合。在不存在四环素（TC）的情况下，TTA与TET算子结合以激活最小启动子的转录，而在TC存在下，它的关联并因此阻止了其转录激活。在TTA结合后，源自巨细胞病毒IE启动子（PHCMV，5）的最小启动子，并融合到七个TETO序列中，当在短暂性表达测定中进行比较时，在HELA细胞中的父启动子的明显强度达到了显着的强度（6）。TTA的高激活潜力及其结合位点在PHCMV*_1 [（1）中的排列；参见图ia]建议设计双向启动子，该设计将允许同时调节来自中心位置多个TETO序列的两个转录单元（图la）。这样的启动子对于多种实验方法应该有用。首先，它可以允许以化学计量量的两种基因产物的合成，这通常是产生异二聚体（或异源 - 寡聚）蛋白的先决条件。在这里，我们报告了双向启动子的构建（PBI-L;图第二，通过将不同效率的最小启动子融合到中心位置的TETO序列，可以在不同但定义的水平上共同调节两个基因产物。第三，通过在双向启动子的一侧整合适当的报告基因，可以通过报告基因函数来监测对不可读基因的调节。后一种可能性也可能有助于在细胞和有机水平上 - 筛选正确整合的表达单元，以控制感兴趣的基因。1a）表明，该启动子以定量方式共同调节了编码P-半乳糖苷酶和荧光素酶的两个报告基因。此外，我们描述了一个矢量系列，很容易允许将PBI-I用于各种目的。图1a所示的广义发散转录单元由基因X的双向启动子组成，然后是
DNA四链体
摘要 Sen 和 Gilbert [Nature, (1988) 334, 364- 366] 证实，来自人类免疫球蛋白开关区的富含鸟嘌呤的单链 DNA 能够自我结合形成稳定的四链平行 DNA 结构。拓扑异构酶 11 不会切割单链 DNA 分子。令人惊讶的是，当该 DNA 序列退火为四链结构时，该酶确实会切割相同的 DNA 序列。观察到的两个切割位点与该 DNA 分子与互补分子配对以形成正常 B-DNA 双链时发现的位点相同。这些切割被证实是蛋白质连接的，并且可以通过添加盐来逆转，这表明拓扑异构酶 11 的反应机制正常。此外，由互补寡核苷酸与四链结构结合而形成的八链 DNA 分子也被拓扑异构酶 11 切割，尽管该分子对限制性内切酶消化具有抗性。这些结果表明，单链 DNA 可能具有引导拓扑异构酶 11 到达结合位点的序列信息，但该位点必须以正确的方式进行碱基配对才能做到这一点。四链 DNA 分子能够作为酶的底物这一事实进一步表明，这些 DNA 结构可能存在于细胞中。
羟基二十碳四烯酸：一种细胞色素 P450 依赖性
摘要 当角膜微粒体在 NADPH 生成系统存在下与花生四烯酸一起孵育时，会形成四种极性代谢物（化合物 AD）。一氧化碳、SKF 525A 和抗细胞色素 c 还原酶抗体可抑制这些代谢物的合成。发现其中一种代谢物化合物 C 以剂量依赖性方式抑制角膜上皮中部分纯化的 Na+,K+-ATPase，ID5o 为 =50 nM。化合物 C 经薄层色谱和高效液相色谱纯化后，发现其具有紫外吸收光谱，最大吸光度在 236 nm 处，表明存在共轭二烯。使用正负离子化模式对衍生化合物 C 进行质谱分析，该化合物由特定标记的（[5,6,8,9,11,12,14,15-2H8J 花生四烯酸）和未标记的花生四烯酸的混合物合成。丰富的碎片离子与化合物 C 一致，化合物 C 是花生四烯酸的单氧衍生物，在二十碳烷主链的碳 12 处有羟基取代基；[2HgJ 花生四烯酸中的所有氘原子都保留在结构中。氧化臭氧分解产生的产物表明 20 碳链的 10 和 11 位置以及 14 和 15 位置的碳之间存在双键。因此，化合物 C 被定性为 12-羟基二十碳四烯酸。然而，只有 12(R) 异构体被发现是角膜上皮中 Na+,K+-ATPase 的抑制剂，这表明生物活性化合物 C 是 12(R)-羟基-5,8,10,14-二十碳四烯酸。这种在角膜中合成的 Na+,K+-ATPase 抑制剂可能在调节眼球透明度和人体房水分泌方面发挥重要作用。