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构建CRISPR/CAS9载体沉默番茄CIF1基因 Dao Quang Ha 1, Nguyen Thi Bich Ngoc 1, Huynh Thi Thu Hue 1,2* 1 研究所
收到日期：2021 年 11 月 8 日 番茄 ( Solanum lycopersicum ) 是一种营养丰富的食物，含有各种次生化合物，对健康有很大益处。番茄果实的糖含量部分是通过调节和分解果实和发育过程中的蔗糖来控制的。细胞壁转化酶 (CWI) 将蔗糖水解成单糖并将其运输到细胞质中，这意味着番茄的糖含量受 CWI 调控。同时，由于这种基因抑制是由 CIF1 基因的产物诱导的，因此 CIF1 基因的失活可能会增强番茄中的糖合成。目前，CRISPR/Cas9 系统是一种最先进的技术，在基因编辑方面具有广泛的应用和高精度。在本研究中，设计了适合 CIF1 基因的 gRNA 来构建表达构建体。将 pRGEB31-CIF1G2 质粒中的该表达系统引入到 DH10B 大肠杆菌菌株中。随后，携带该表达系统的载体成功转移到EHA105农杆菌菌株中。进一步地，含有载体pRGEB31-CIF1G2的农杆菌株系可用于在基因编辑的Tiny-Tim番茄株系中产生所需性状。
讲义说明PPT 3 SO CRISPR/CAS9
Tumefaciens。这是一种地球细菌，其生活策略是基于修改寄主植物的。它进入植物细胞并通过植物中的植物插入，以便植物开始对细菌产生更多的营养（ppt 4中的形成更多）。植物科学家可以将细菌改为研究人员想要的基因。在这种情况下，一种编码Cas9和编码指南的基因的基因：t。然后，该植物将成为其携带这些赠送者的转移。如果您想要非变种生长，则可以通过未转换的转换来携带该植物，然后您必须跟踪审查和后代中的Cas9指南，并在以后的一代中选择通过编辑的植物，而不是Cas9和Guides的基因。
在裂殖壶菌属中开发一种有效的基因编辑工具并改善其脂质和萜类化合物的生物合成
Schizochytrium sp. HX-308是一种生长速度快、脂质含量高的海洋微藻，具有作为脂质化合物生物合成的微生物细胞工厂的潜力，开发高效的基因编辑工具，发现Schizochytrium sp. HX-308中脂质化合物生物合成的分子靶点具有重要意义。本研究在HX-308中开发了一种高效的基因编辑工具，由根癌农杆菌AGL-1介导。结果表明，随机整合效率达到100%，同源重组效率达到30%左右。此外，还设计了脂质和萜类化合物生物合成的代谢途径。首先，利用强组成型启动子在HX-308中过表达乙酰辅酶A c -乙酰转移酶。随着乙酰辅酶A c-乙酰转移酶的过表达，更多的乙酰辅酶A被用于合成萜类化合物，角鲨烯、β-胡萝卜素和虾青素的产量分别增加了5.4倍、1.8倍和2.4倍。有趣的是，饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸的产量也发生了变化。此外，利用同源重组敲除了催化β-氧化第一步的三种酰基辅酶A氧化酶基因。结果表明，在三个敲除菌株中脂质的产量增加。我们的结果表明，农杆菌介导的转化方法对于功能基因的研究以及将裂殖壶菌开发为生产高价值产品的强大细胞工厂将具有重要意义。
调查帕金森氏病和癌症之间共同遗传危险因素
（a）CRISPR/CAS9基因组编辑和重组成分组合在矢量中（请参阅材料和方法1），该材料和方法1）由A. tumefaciens递送至苹果叶条。该载体包含4个GRNA表达对靶DIPM1，DIPM4，HIPM和MLO基因的单位。转化后，将叶条带在补充卡纳米霉素和激素以进行再生的MS板上转移。（b）另外，通过粒子枪仅包含FRT位点之间的序列的编辑矢量的线性化片段。在这里，YFP的编码顺序在CAS9的5'上融合在一起，以检查成功交付并监视转换效率。（c）消除从编辑植物基因组中的编辑成分是通过热休克处理的激活FLP基因的表达
一种高效、可重复的农杆菌介导的观赏单子叶植物虎眼万年青的遗传转化方法
悬浮培养物对光照作出反应并开始分化，我们确定了光照后接种农杆菌的最佳时间。为此，将 O. dubium 细胞培养物在接种农杆菌前 0、5、10、15 和 20 天转移到光照下（图 3b）。接种农杆菌后，培养物在选择培养基中再生长十周。值得注意的是，虽然暗生长培养物的转化产生了两个转化子，但接种前 5、10、15 和 20 天暴露在光照下的培养物分别产生了 15、6、19 和 14 个卡那霉素抗性芽，其中 4、6、6 和 5 个芽（共 21 个芽）从第 21 天开始显示出弱的 RFP 荧光（图 4a、b、c）。经过挑选，绿色健康
生物能源草芒属植物的转化和基因编辑
作物。对 87 种芒属植物基因型的初步筛选确定了胚性愈伤组织形成和再生的显著差异，而另一子集则显示出通过农杆菌或基因枪转化的能力差异——所有这些因素都可能影响基因编辑效率。针对五种基因型开发了优化程序，其中包括一种 Msi (2x)、两种 Msa (2x 和 4x) 和一种 Mxg (3x)。设计了一种多步骤筛选方法来设计能够成功靶向基因同源物的 gRNA，有利于靶向古异源多倍体芒属植物中的基因。在玉米中靶向以通过 CRISPR/Cas9 产生突变体的视觉标记基因 lw1 [36, 37, 38] 被选为芒属植物的靶向基因。编辑后的 lw1 中的叶子表型（淡绿色/黄色、条纹、白色）是一个引人注目的视觉标记
农杆菌介导的番茄转化
番茄既是一种重要的粮食作物，也是用于各种研究（包括了解基因功能）的模型植物。转化通常与番茄的所有广泛遗传和基因组资源相结合，以促进这些研究。我们实验室常用的转化方案已应用于许多不同的番茄基因型，并依赖于农杆菌对幼子叶切片的感染。我们使用载体系统进行过度表达，使用 RNA 干扰进行基因沉默，使用 CRISPR/Cas9 进行基因组编辑。用于设计基因构建体的载体包含可选择的标记基因，这些基因赋予对卡那霉素、潮霉素和除草剂成分双丙氨膦的抗性。本章详细介绍了我们遵循的农杆菌介导的番茄栽培和野生品种转化方案。
古细菌DNA-Import仪器与细菌共轭机械同源
结合是水平基因转移的主要机制，促进了抗生素耐药性在人类病原体中的传播。它涉及通过称为交配菌毛的细胞外附属物来避免供体和受体细胞之间的连接。在细菌中，结合机制由质粒或转座子编码，通常介导同源移动遗传元件的转移。对古细菌的共轭知之甚少。在这里，我们通过三个共轭pili的冷冻电子显微镜确定原子结构，两种来自高疗法古细菌（Aeropyrum pernix和pyrobaculum calidifontis），另一个由一个由细菌的细菌ti toumefaciial to to to to to to to to to to to to to to toumefacial-to to to to to to to to to to toumefiti。 pili。然而，古细菌共轭机制（称为CED）已被“驯化”，即结合机械的基因编码在染色体上，而不是在移动遗传元素上，并介导细胞DNA的转移。
西兰花的遗传学和分子育种的进步
摘要：西兰花（Brassica Oleracea L. var。Italica）是全球最重要的蔬菜作物之一。由于维生素，花青素，矿物质，纤维，二级代谢产物和其他营养素的丰富性，对西兰花的市场需求仍在增加。著名的二级代谢产物，葡萄糖苷酸盐，磺胺素和硒对癌症具有保护作用。已经在造成重要特征的精细映射和克隆基因中取得了显着进步。这一进展为西兰花育种中标记辅助选择（MAS）的选择奠定了基础。由发达的农杆菌在西兰花中介导的植物的遗传工程有助于提高质量。后期的生活；葡萄糖苷和磺胺含量；以及对昆虫，病原体和非生物胁迫的抵抗力。在这里，我们回顾了西兰花的遗传学和分子育种的最新进展。也讨论了改善西兰花的未来观点。