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结合MEK和SRC抑制剂治疗结直肠癌的抑制剂表现出在体外的功效提高，但在体内
转移性结直肠癌（MCRC）是美国癌症死亡的第二大原因。超过50％的致癌驱动器RAS（KRAS或NRA）的MCRC港口突变患者。由于直接瞄准RA的大多数突变是技术上具有挑战性的，因此研究人员专注于目标MEK，这是RAS的下游介质。但是，将MEK作为单药治疗的目标是MCRC患者无效。我们假设将MEK抑制剂与其他药物相结合可以增强MEK靶向MCRC的疗效。无偏见的高通量筛选（HTS）被形成，以识别提高MEK抑制剂功效的药物。使用MEK抑制剂Trametinib用KRAS突变的CRC细胞作为“骨链”，并在美国食品药品监督管理局批准或在临床试验中批准了两个“临床准备就绪”化合物文库。hts表明，SRC抑制剂dasatinib和Trametinib的组合在体外CRC细胞中是协同的（MTT和菌落形成测定）。使用荧光激活的细胞分选，逆相蛋白阵列或蛋白质印迹分析细胞增殖和凋亡的标志物，与多个CRC细胞系中的单个药物相比，当靶向SRC和MEK时，靶向SRC和MEK时，细胞增殖降低和细胞死亡增加。然而，与单独的曲敏替尼相比，与人类使用的剂量相当于人类剂量的小鼠的剂量和剂量的剂量相结合的小鼠抗肿瘤活性，将剂量显着增强了抗肿瘤活性。这些结果强调了使用临床相关剂量作为将体外发现转化为诊所的先决条件进行仔细的临床前验证研究的重要性。
CD226- 人类调节性 T 细胞表现出增强的稳定性...
此前，过继细胞疗法 (ACT) 一直试图通过流式激活细胞分选 (FACS) 和体外扩增外周血中的 CD4+CD25+CD127lo/- Treg 来预防 1 型糖尿病 (T1D) 患者的自身免疫。然而，这种方法会产生表型稳定、胸腺来源的 FOXP3+/Helios+ (tTreg) 和不稳定、外周来源的 FOXP3+Helios- Treg (pTreg) 的异质群体。在这里，我们提出了一种使用 CD4+CD25+CD226- 谱系 FACS 分离 Treg 的新策略，其中 tTreg 的比例增加。流式细胞术评估典型谱系决定转录因子表明，与 CD127- Treg 相比，分离的 CD226- Treg 产生的 tTreg 百分比更高，而 pTreg 百分比更低，无论是在体外扩增 14 天之前 (tTreg：+∆4.70%，pTreg：-∆1.10%) 还是之后 (+∆3.57%，-∆4.43%)。扩增后，与 CD127- Treg 相比，CD226- Treg 显示出改变的细胞因子谱，其特征是细胞外 TGFb1 表达增加 (1.87 倍) 和细胞内 TGFb1 (1.15 倍) 表达增加，而 IL-10 (0.83 倍)、IFNg (0.86 倍)、IL-17A (0.92 倍) 和 TNFa (0.79 倍) 表达降低。 CD226- Tregs 表现出比 CD127- Tregs 更强的体外抑制作用（1:1 Treg:PBMC 比例时为 +∆22.0%）。CRISPR-Cas9 敲除 (KO) CD226 支持 CD226 在谱系不稳定性中的作用，与未编辑的 CD127- Treg 对照相比，CD127- CD226 KO Tregs 显示出更高的 tTreg（+∆39.0%）和更低的 pTreg（-∆13.9%）百分比。这些数据表明 CD226- Tregs 具有更高的表型稳定性，并且具有更强的体外抑制能力，这对 ACT 在预防或中止 T1D 方面具有重要意义。
生成Zeb2不足的人IPSC线（...
智力残疾，癫痫，赫希斯普朗氏病和各种先天性畸形（Garavelli and Mainardi，2007年）。此外，Zeb2的过表达与不同形式的癌症的进展有关（Fardi等，2019）。虽然已经对Zeb2蛋白的功能进行了广泛的研究，但目前缺乏可用的Zeb2缺乏的人类细胞模型，无法在胚胎发育过程中进一步删除Zeb2依赖性调节网络，并且可以取消抗癌药物的发展。为此，我们使用CRISPR/CAS9介导的编辑系统生成了人类IPSC线，耗尽了Zeb2蛋白（表1）。我们分别应用了两个靶向Zeb2外显子5和外显子6的GRNA（图1 a），在父母IPSC线上Kicri002a（表1;（Uhlin等，2017）。通过LiPofection将包含两个GRNA的构建体引入IPSC系，并通过荧光激活的细胞分选（FACS）选择转染的细胞以表达绿色荧光蛋白。单细胞克隆在LN521上扩展，并通过基因组DNA上的Sanger测序分析基因编辑。分析显示了具有纯合790 bp缺失的克隆线kicri002a-4，跨越了内含子5和外显子5和6的一部分（chr2：g.144,404,077 - 144,404,404,404,867del;1 a;补充。图1 A-B）。 外显子5和外显子6的其余部分被融合，预测氨基酸194上的截短的Zeb2 mRNA，其截短的Zeb2 mRNA（PTC）（P.THR188888888888888888888888;图1 A-B）。外显子5和外显子6的其余部分被融合，预测氨基酸194上的截短的Zeb2 mRNA，其截短的Zeb2 mRNA（PTC）（P.THR188888888888888888888888;图1 a）。与136PTC位于编码N末端锌指（NZF）域的区域以及更C末端的R-SMAD结合域（SBD），CTBP相互作用结构域（CID）（CID）和C-末端的c-terminal Zinc Zinc Finger（CZF（CZF）和Homeododomain（例如Domains）（epifa）（epifa）。
医学生物学口语考试题目清单
1 医学生物学作为一门科学，是生物学和遗传学史上的标志 2 细胞和人体的化学组成。生物分子中的化学键 3 生物聚合物、一般结构、脂质、多糖 4 蛋白质结构 5 蛋白质功能 6 原核细胞和真核细胞的结构 7 生物膜（结构、功能） 8 膜蛋白和膜转运 9 细胞器（概述、结构、功能） 10 细胞骨架系统 - 概述、中间丝 11 细胞骨架系统 - 微管、微丝 12 导致发现 DNA 作为遗传信息载体的实验 13 核酸结构 14 原核生物和真核生物基因组（特征和差异） 15 人类基因组的结构（组蛋白、核小体、染色质） 16 线粒体基因组 17 DNA 复制 18 原核生物和真核生物中 DNA 复制的比较 19 DNA 损伤的类型及其原因 20 DNA 修复机制（NER、BER、错配修复 21 DNA 双链断裂修复 22 染色体不稳定性和非整倍性 23 分子生物学的中心法则，原核和真核基因 24 RNA 分子的类型和转录的一般特征 25 原核生物的转录 26 真核生物的转录 27 真核生物的转录后修饰 28 RNA 编辑和逆转录 29 遗传密码 30 tRNA 和氨酰基-tRNA 合成酶，核糖体结构 31 翻译 32 翻译后修饰 33 蛋白质折叠和蛋白质降解，蛋白质分选 34 原核生物基因表达调控-操纵子模型，示例 35 真核生物基因表达调控（概述） 36 转录水平的调控，转录因子 37 转录后水平的表达调控（从细胞核输出，mRNA退化，非
重新利用血压的敏化效应 - ...
摘要。背景/目的：我们研究了可以对艾日布林或长春新碱 (VIC) 治疗有抗药性的 KBV20C 癌细胞产生敏化的药物，并评估了它们相关的作用机制。材料和方法：已知此类癌细胞过度表达 P-糖蛋白 (P-gp)。考虑到利血平 (P-gp 抑制剂) 在高血压患者中起调节作用，我们研究了 27 种低剂量血压调节药物对 VIC 耐药性 KBV20C 细胞的影响。这样做是为了确定可以在相对低剂量下重新用于使抗有丝分裂药物耐药性 KBV20C 细胞产生敏化的药物。进行了荧光激活细胞分选 (FACS)、膜联蛋白 V 分析、罗丹明摄取试验和蛋白质印迹分析，以进一步研究此类药物的作用机制。结果：我们发现低剂量胺碘酮、尼卡地平、卡维地洛或伐地那非联合治疗可高度增敏用艾日布林或VIC治疗的KBV20C细胞。这些药物与艾日布林或VIC联合使用时可降低细胞活力、增加G2期停滞并上调细胞凋亡。考虑到它们与艾日布林或VIC联合治疗均有增敏作用，我们推测它们可与其他抗有丝分裂药物联合使用以增敏耐药癌细胞。通过详细的定量分析，我们发现艾日布林与胺碘酮的增敏作用高于艾日布林与尼卡地平或艾日布林与卡维地洛的增敏作用。我们发现利血平具有最高的P-gp抑制活性，表明艾日布林或VIC-
Cas9 介导的 β-catenin 突变校正和...
目的：结直肠癌 (CRC) 是导致癌症死亡和发病率的主要原因之一。迫切需要找到对抗 CRC 的策略。APC 或 β -catenin 的驱动基因突变在 CRC 的发生和进展中起重要作用。在本研究中，我们联合应用 CRISPR/Cas9-sgRNA 系统和单链寡脱氧核苷酸 (ssODN) 作为模板来纠正结肠癌细胞系 HCT-116 中存在的 β -catenin 的杂合 Δ TCT 缺失突变。该方法为癌症的基因治疗提供了一种潜在的策略。方法：构建 Cas9/β -catenin-sgRNA-eGFP 共表达载体并与 ssODN 共转染到 HCT-116 细胞中。通过 FACS 分选突变校正的单细胞克隆，并通过 TA 克隆和 DNA 测序进行判断。通过实时定量PCR、Western印迹、CCK8、EDU染色和细胞接种克隆检测CRISPR/Cas9介导的校正效果。此外，还分析了裸鼠异种移植瘤中细胞克隆衍生肿瘤的生长情况。结果：CRISPR/Cas9介导的β-catenin突变校正导致TCT序列的存在和Ser45处磷酸化β-catenin的重新表达，从而恢复了磷酸化β-catenin的正常功能，包括减少核β-catenin的运输和下游c-myc、survivin的表达。在β-catenin突变校正的细胞中观察到细胞生长显著减少。移植了突变校正的HCT-116细胞的小鼠的肿瘤大小明显小于未校正的异种移植瘤。结论：本研究数据表明，通过 CRISPR/Cas9 和 ssODN 的组合来纠正驱动突变可以极大地改善癌细胞系的生物学行为，表明该策略在癌症基因治疗中具有潜在的应用价值。关键词：CRISPR/Cas9、ssODN、靶向基因编辑、β-catenin、结肠癌
细胞外ATP/大脑中的腺苷动力学及其在健康和疾病中的作用
能够产生稀有鞘氨碱（例如鞘氨酸和鞘氨酸）的微生物菌株的有效识别对于推进微生物发酵过程和解决工业需求的增加至关重要。wickerhamomyces ciferrii是一种非惯性酵母，自然会过量产生四乙酰基植物磷酸盐（TAPS）；但是，其他有价值的鞘氨素碱基的产生，包括鞘氨醇，鞘氨酸和三乙酰基鞘氨醇，仍然是一个关键目标。在这项研究中，我们开发了一种新型的筛选方法，利用氟钠钠（一种选择性的荧光染料，它特异性地与非乙酰化的鞘氨酸鞘氨酸碱（鞘氨酸，鞘氨醇和植物磷酶）反应，同时对TAPS没有反应性。通过伽马射线诱变产生了W. ciferrii的突变库，并使用荧光激活的细胞分选（FACS）进行筛选。通过三轮分类分离出表现出高荧光强度的突变体，表明非乙酰化或部分乙酰化的鞘氨醇化碱基的产生，并通过HPLC分析进一步验证。这种方法成功地识别了三种突变菌株：P41C3（产生鞘氨酸），M01_5（鞘氨碱产生）和P41E7（产生三乙酰基肾上腺素产生）。中，p41c3突变体在摇动培养过程中达到了36.7 mg/l的鞘氨酸滴度，并伴随着TAPS产生的显着降低，表明代谢量的重定向。这项研究证明了荧光素钠作为用于鞘脂基碱产生菌株的选择性筛选染料的实用性，并为W. ciferrii代谢工程建立了有效的平台，以增强工业上重要的鞘脂的产生。
《测试与评估杂志》第 15 卷 1987 年主题索引
胶接接头 开裂搭接剪切试样的应力分析：ASTM 循环试验 (Johnson), 11 月, 303 空气阻隔系统 评估空气阻隔系统的拟议测试程序 (Timusk and Seskus), 7 月, 191 气密性 评估空气阻隔系统的拟议测试程序 (Timusk and Seskus), 7 月, 191 合金 用于金属分选的热电差异 (Stuart), 7 月, 224 铝合金 多晶 B2 Ni-Al 中杨氏模量的温度和成分依赖性 (Harmouche and Wolfenden), 3 月, 101 铝合金 一种确定铝合金拉伸性能和各向异性的方法 (Srivatsan, Meyers, and Berry), 7 月, 196 铝合金的 J 积分测试：一种标记裂纹前沿的新技术 (Beaver), 11 月, 350肺泡巨噬细胞 焚烧炉飞灰对肺泡巨噬细胞的细胞毒性 (Liu, Wong, and Tam), 1 月, 3 模拟数字转换器 使用微型计算机和 A/D 转换器对 NBS 烟室进行计算机化 (Eichhorn, Barrow, and Davis), 9 月, 281 沥青耐久性 沥青老化硬化分析的建议方法 (Ishai), 5 月, 127 ASTM E 119 ASTM E 119 和 ISO 834 耐火试验中暴露严重程度的比较 (Harmathy, Sultan, and Mac-Laurin), 11 月, 371 ASTM E 662 使用微型计算机和 A/D 转换器对 NBS 烟室进行计算机化 (Eichhorn, Barrow, and Davis), 9 月, 281 ASTM 标准 E 9 ASTM 标准 E 9 压缩试样的非弹性屈曲(Papirno)，133 年 5 月 弯曲试验 一种通过分析载荷位置和由行进载荷弯曲的梁的位移之间的关系来测量材料弹性模量的新方法 (Kuroda)，10S 年 3 月 书评 无损检测的电磁方法由 Lord (Starin) 编辑，299 年 9 月
第14卷，第1、2024、3 https：//doi.org/10.33263/briac141.003 linalool和caffeine作为C
摘要：现有治疗“阿尔茨海默氏病（AD）的方法的极低效率使得开发其治疗的新药物具有很高的意义。有希望的是创造刺激神经发生的方法。作为实施此途径的一部分，有望在细胞内信号分子（包括依赖CAMP依赖的细胞内途径）之间搜索目标。旨在研究腺苷酸环化酶（AC）和PKA抑制剂对β-淀粉样蛋白诱导的神经变性（βAIN）在Vitro的β-淀粉样蛋白诱导的神经变性（βain）的条件下对腺苷酸盐抑制剂（AC）和PKA抑制剂的影响。实验是在C57B1/6雄性小鼠上进行的。我们研究了AC（2ʹ，5ʹ-脱氧腺苷和PKA抑制剂（2ʹ，5ʹ-二维腺苷和KT 5720）对神经干细胞（NSC），神经元承诺的祖细胞（NCP）（NCP）和神经细胞的神经干细胞功能（NSC）的功能（scerebrial tore secerbrrib brberbr）（Sece）（seris）（Ser）的神经细胞。使用免疫磁分选，NCP和单个类型的神经细胞细胞从SVZ细胞中分离出来。我们揭示了在神经毒性β-淀粉样蛋白的影响下NSC和NCP的活性的脱节。发现在βAin条件下，AC和PKA抑制剂同步不同类型祖细胞功能的实现的能力。暴露于神经毒性剂后，cAMP依赖性途径的封锁也导致了几种类型的神经胶质细胞增加神经营养生长因子的产生。特别明显的是PKA失活过程中少突胶质细胞和小胶质细胞的反应。获得的结果表明，使用AD中cAMP依赖途径（主要是PKA）的细胞内分子的选择性抑制剂（主要是PKA）的选择性抑制剂对不同类型的祖细胞和神经细胞的功能进行了协调刺激。
时间成熟了吗？
抽象背景自然杀手（NK）细胞通过其细胞毒性效应子功能以及与其他免疫细胞相互作用以构建协调的抗肿瘤免疫反应的能力在肿瘤免疫监视中起着至关重要的作用。新兴数据揭示了通过与调节表型相关的检查点抑制分子在肿瘤微环境（TME）内的NK细胞功能障碍。目的我们旨在分析与非肿瘤NK细胞相比肿瘤内NK细胞的基因表达谱，并表征其在TME中的抑制作用。方法NK细胞是从人肺肿瘤组织中分选的，并与非肿瘤远处的肺进行了比较。在当前的研究中结果，我们确定了人类非小细胞肺癌（NSCLC）中NK细胞功能障碍的独特基因特征。首先，转录组分析揭示了与迁移模式相关的重大变化，鞘氨酸1-磷酸受体1（S1PR1）和CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）以及C-X-C趋化因子受体过表达以及C-X-C趋化因子受体类型5（CXCR5）和C-X-C-C介质因子受体型6（C-X-C-C氧化异体受体型6（C-x-C趋化）。第二，肿瘤内NK细胞中的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA-4）和杀伤细胞凝集素（KLRC1）抑制性分子在肿瘤内NK细胞中增加了，并且CTLA-4阻断中的CTLA-4封锁可以部分恢复MHC II类Cland的MHC Cells（DC），该小组在DC/dc中均具有IMBAIR（DC）。最后，NK细胞密度影响NSCLC中CD8 + T细胞的正预后值。结论这些发现表明了与NSCLC中NK细胞抑制功能相关的新分子提示。