能够产生稀有鞘氨碱(例如鞘氨酸和鞘氨酸)的微生物菌株的有效识别对于推进微生物发酵过程和解决工业需求的增加至关重要。wickerhamomyces ciferrii是一种非惯性酵母,自然会过量产生四乙酰基植物磷酸盐(TAPS);但是,其他有价值的鞘氨素碱基的产生,包括鞘氨醇,鞘氨酸和三乙酰基鞘氨醇,仍然是一个关键目标。在这项研究中,我们开发了一种新型的筛选方法,利用氟钠钠(一种选择性的荧光染料,它特异性地与非乙酰化的鞘氨酸鞘氨酸碱(鞘氨酸,鞘氨醇和植物磷酶)反应,同时对TAPS没有反应性。通过伽马射线诱变产生了W. ciferrii的突变库,并使用荧光激活的细胞分选(FACS)进行筛选。通过三轮分类分离出表现出高荧光强度的突变体,表明非乙酰化或部分乙酰化的鞘氨醇化碱基的产生,并通过HPLC分析进一步验证。这种方法成功地识别了三种突变菌株:P41C3(产生鞘氨酸),M01_5(鞘氨碱产生)和P41E7(产生三乙酰基肾上腺素产生)。中,p41c3突变体在摇动培养过程中达到了36.7 mg/l的鞘氨酸滴度,并伴随着TAPS产生的显着降低,表明代谢量的重定向。这项研究证明了荧光素钠作为用于鞘脂基碱产生菌株的选择性筛选染料的实用性,并为W. ciferrii代谢工程建立了有效的平台,以增强工业上重要的鞘脂的产生。
主要关键词