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从无DNA编辑的葡萄植物原生质体中的非晶体植物再生
新育种技术（NBT）在Vitis Vinifera中的应用非常需要引入有价值的特征，同时保留了精英品种的基因型。然而，由于外源性DNA的稳定整合，欧洲和其他国家 /地区的公众舆论和法律法规对NBT的广泛应用被公众舆论和法律法规所接受，这会导致可能受到嵌合的转基因植物。一种基于单细胞的方法，再加上CRISPR/CAS编辑机械的无DNA转染，构成了克服这些问题并保持整个生物体中原始遗传化妆的强大工具。我们在这里描述了一种成功的基于单细胞的无DNA无DNA方法，以获取编辑的葡萄植物，并从两个表格葡萄藤品种的胚胎愈伤组织中分离出来的原生质体（V. vinifera cv。深红色无籽和sugraone）。分别将重生的非晶体植物编辑为单个或双突变体，分别在腐烂的和粉状的米尔德易感基因，VVIDMR6和VVIMLO6上。
设计驱动的外部分析：数字原生企业的适应和创新框架
摘要：使用设计思维方法分析外部因素对于适应、发现机会和降低本土数字企业的风险至关重要。本研究引入了一个植根于设计原则和未来外部分析场景的框架，旨在满足当前的市场需求。该研究采用定性定量混合研究方法，结合了文献综述、研讨会和调查等方法。这些方法可以收集和分析定性和定量数据，通过在 DNVB 案例研究中使用研究主题，可以全面准确地理解研究主题。使用我们称之为 ASPECT 的设计思维方法开发概念框架有助于全面解释复杂性，将集体和个人因素交织在一起。这降低了在模糊、不确定和不稳定的环境中做出战略决策时忽视基本要素的风险。这种方法与 CAME、Pestle 和 SWOT 等传统外部分析框架形成对比。本文旨在通过探索基于设计过程的外部分析新模型来为文献做出贡献。该框架将设计思维流程的传统阶段与未来情景方法相结合，以识别组织相关的外部因素。它为数字企业创建新的商业模式和增长战略提供了一个创新的概念框架。
胞嘧啶基础编辑器针对马铃薯原生质体中的基因组编辑进行了优化
在这项研究中，我们生成并比较了三个针对马铃薯（卵巢结核）制成的胞苷碱基编辑器（CBE），该量子量其最多赋予了原生质体池中所有等位基因的43％C-T转换。早些时候，基因编辑的马铃薯植物是通过聚乙烯二烯介导的CRISPR/CAS9转化原生质体的转化而成功产生的。在一项研究中，通过用内源性马铃薯ST U6启动子替换U6-1启动子的标准拟南芥，从而获得了3 - 4倍的编辑效率。在这里，我们使用了这种优化的构建体（SP Cas9/ st u6-1 :: grna1，Target GRNA序列GGTC 4 C 5 TTGGAGC 12 AAAAAC 17 TGG）用于生成CBES量身定制的马铃薯，并测试了用于C-T碱基编辑的CBES在Granule-Bounchase-bound starch synthase 1 Gene中的C-T碱基编辑。首先，将链球菌CAS9转化为（D10A）Nickase（NCAS9）。接下来，来自人hapobec3a（A3a），大鼠（EVO_RAPOBEC1）（RA1）或Sea Lamprey（EVO_ PM CDA1）（CDA1）的三种胞质脱氨酶之一（cda1）与NCAS9和A尿素 - DNA Glycosylase融合了C-Encas9（CDA1）与每种模块化的链接。CBE的总体高度有效，A3A具有最佳的总体基础编辑活动，平均为34.5％，34.5％和27％的C-T转换为C4，C5和C12，而CDA1的平均基础编辑活动的平均基础编辑活性为34.5％，34％，34.5％，14.25％C4和C4，C4和C4，C4和C4，C4和C4，C4。ra1在C4和C5时表现出平均基础编辑活性为18.75％，19％的基础编辑活动，是唯一在C12时显示C-TO-T转换的基本编辑器。
从隔离到CRISPR/CAS基因组编辑应用
在簇的调节间隔短的短质体重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白（CAS）系统中，原生质体不仅有助于快速验证各种RNA引导的内核酶的诱变效率，而且还可以是平台的dna-fiee。迄今为止，后一种方法已应用于许多农作物，尤其是那些具有复杂基因组的农作物，少年时期，杂种趋势和/或自我不相容性。原生质体再生是无DNA基因编辑的关键步骤。在本报告中，我们回顾了原生质体技术的历史和一些未来前景，包括原生质体转染，转化，融合，再生以及基于CRISPR/CAS的繁殖中的当前原生质体应用。
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栽培番茄（Solanum lycopersicum）无DNA基因组编辑及原生质体再生方法的建立
摘要 关键信息 我们建立了一种基于核糖核蛋白的CRISPR/Cas9无DNA基因组编辑方法在栽培番茄中应用，并获得了高突变率的转染原生质体再生突变植株。 摘要 近年来，基因组编辑作为一种研究和育种方法的应用为许多作物的性状改良提供了许多可能性。在栽培番茄（Solanum lycopersicum）中，迄今为止只建立了携带CRISPR/Cas9试剂的稳定的农杆菌介导转化方法。转染原生质体芽再生是基于核糖核蛋白的CRISPR/Cas9无DNA基因组编辑方法在栽培番茄中应用的主要瓶颈。在本研究中，我们报道了利用CRISPR/Cas9技术实现栽培番茄的无转基因育种方法，包括优化原生质体分离和克服转染原生质体芽再生障碍。结果表明，含0.1 mg/L IAA和0.75 mg/L玉米素的芽再生培养基为最佳激素组合，再生率可达21.3%。原生质体分离转染4个月后，成功获得高突变率的再生植株。获得的110株再生M 0 植株中，有35株（31.8%）同时发生SP和SP5G基因突变，SP或SP5G基因中至少一个等位基因的编辑效率高达60%。
TSA促进CRISPR/CAS9的编辑效率和细胞分裂基因的表达，来自植物原生质体
摘要：Trichostatin A（TSA）是一种代表性的组蛋白脱乙酰基酶（HDAC）抑制剂，该抑制剂通过调节细胞中的染色质重塑来调节表观遗传基因的表达。调查TSA对染色质DE稳态的调节是否会影响Cas9蛋白 - 蛋白 - 核核糖核蛋白（RNP）的效率提高，从植物细胞中检查了基因组编辑的基因组，使用生菜和烟草原子量进行了多种浓度，在几次浓度的TSA治疗后（tsa）（0.1）（0.1）（0.1和10，0.1）。RNP从原生质体递送。有趣的是，在莴苣原生质体中，TSA处理中SOC1基因的indel频率是DMSO处理的3.3至3.8倍。尽管没有太大差异，但糖基因原生质体中SOC1基因的indel频率的增加发生在浓度依赖性的方式中。类似于生菜，TSA在PDS基因组编辑期间使用烟草原生质体以浓度依赖性方式将indel频率提高了1.5至1.8倍。MNase测试清楚地表明，使用TSA处理的染色质可及性高于DMSO治疗的染色质。此外，TSA处理显着提高了生菜原生质体的组蛋白H3和H4乙酰化水平。QRT-PCR分析表明，通过TSA处理，增加了细胞分裂相关基因的表达（LSCYCD1-1，LSCYCD3-2，LSCYCD6-1和LSCYCU4-1）。这些发现可能有助于提高CRISPR/CAS9介导的基因组编辑的效率。此外，这可以应用于使用带有植物原生质体的CRISPR/CAS9系统开发有用的基因组编辑的作物。
用于文档选择和分类的 AI/ML 工具的市场研究
如今，政府部门面临着一项新挑战，即所谓的“数字海啸”。这场海啸由大量分散在共享驱动器、电子文档和记录管理系统 (EDRMS) 中的原生数字记录组成，这些记录通常为非结构化或半结构化格式。当考虑什么是原生数字记录时，您就会开始意识到这场数字海啸的规模；其中包括基于文本的文档、电子邮件、演示文稿、电子表格、图像、 CAD 图纸、 3D 模型、数据集和数据库。如果我们现在将这些不同格式的原生数字记录与每秒产生的大量数字数据相乘，我们就会开始看到真正的规模。大量的原生数字记录使得政府部门几乎不可能仅依靠手动技术进行选择和保存。
通过恢复 GFP 活性来优化水稻、花生、鹰嘴豆和豇豆原生质体中的 Prime Editing
摘要：植物基因组的精确编辑一直是功能基因组研究和作物育种的迫切需要。Prime 编辑是一种新开发的基于 CRISPR-Cas9 的精确编辑技术，它使用工程逆转录酶 (RT)、催化受损的 Cas9 内切酶 (nCas9) 和 Prime 编辑向导 RNA (pegRNA)。此外，Prime 编辑比碱基编辑具有更广泛的编辑类型，可以产生几乎所有类型的编辑。虽然 Prime 编辑最早是在人类细胞中建立的，但它最近才被应用于植物。作为一种相对较新的技术，需要进行优化以提高不同作物的编辑效率。在本研究中，我们成功地编辑了水稻、花生、鹰嘴豆和豇豆原生质体中的突变体 GFP。在水稻中，双 pegRNA 的编辑效率比单 pegRNA 载体高出 16 倍。用双 pegRNA 载体转化花生、鹰嘴豆和豇豆后，也获得了编辑突变的 GFP 原生质体，尽管编辑效率比水稻低得多，范围从 0.2% 到 0.5%。这些初步结果有望加快在豆科植物育种计划中应用主要编辑，以加速作物改良。
首次通过核糖核蛋白（RNP ...
摘要：Castanea sativa是全球重要的树坚果物种，以其多功能作用，尤其是木材和坚果生产而受到高度赞赏。如今，需要采取新的策略来实现对疾病，气候变化，更高产量和营养质量的植物弹性。 在新的植物育种技术（NPBT）中，CRISPR/CAS9系统代表了在短时间内改善植物育种的强大工具。 此外，CRISPR/CAS9构建体可以以核糖核蛋白（RNP）的形式传递到细胞中，从而避免通过原生质体技术避免外源DNA（无GMO-FRO）整合，这代表了基因编辑的有趣材料，这要归功于高度渗透性的DNA膜。 在本研究中，我们开发了从欧洲栗子体细胞胚胎开始的第一个原生质体隔离方案。 针对细胞壁消化优化的酶溶液含有1％纤维素酶Onozuka R-10和0.5％MacRozyme R-10。 在黑暗条件下在25℃孵育4小时后，获得了4,500,000个原生质体/mL的产率（可行的91％）。 使用GFP标记基因评估转染能力，转染原生质体的百分比为51％，在转染事件后72小时。 然后对靶向植物去饱和酶基因的直接递送进行了纯化的RNP。 结果揭示了CRISPR/CAS9 RNP和有效的原生质体编辑的预期目标修饰。如今，需要采取新的策略来实现对疾病，气候变化，更高产量和营养质量的植物弹性。在新的植物育种技术（NPBT）中，CRISPR/CAS9系统代表了在短时间内改善植物育种的强大工具。此外，CRISPR/CAS9构建体可以以核糖核蛋白（RNP）的形式传递到细胞中，从而避免通过原生质体技术避免外源DNA（无GMO-FRO）整合，这代表了基因编辑的有趣材料，这要归功于高度渗透性的DNA膜。在本研究中，我们开发了从欧洲栗子体细胞胚胎开始的第一个原生质体隔离方案。针对细胞壁消化优化的酶溶液含有1％纤维素酶Onozuka R-10和0.5％MacRozyme R-10。在黑暗条件下在25℃孵育4小时后，获得了4,500,000个原生质体/mL的产率（可行的91％）。使用GFP标记基因评估转染能力，转染原生质体的百分比为51％，在转染事件后72小时。然后对靶向植物去饱和酶基因的直接递送进行了纯化的RNP。结果揭示了CRISPR/CAS9 RNP和有效的原生质体编辑的预期目标修饰。