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摘要：Castanea sativa是全球重要的树坚果物种，以其多功能作用，尤其是木材和坚果生产而受到高度赞赏。如今，需要采取新的策略来实现对疾病，气候变化，更高产量和营养质量的植物弹性。 在新的植物育种技术（NPBT）中，CRISPR/CAS9系统代表了在短时间内改善植物育种的强大工具。 此外，CRISPR/CAS9构建体可以以核糖核蛋白（RNP）的形式传递到细胞中，从而避免通过原生质体技术避免外源DNA（无GMO-FRO）整合，这代表了基因编辑的有趣材料，这要归功于高度渗透性的DNA膜。 在本研究中，我们开发了从欧洲栗子体细胞胚胎开始的第一个原生质体隔离方案。 针对细胞壁消化优化的酶溶液含有1％纤维素酶Onozuka R-10和0.5％MacRozyme R-10。 在黑暗条件下在25℃孵育4小时后，获得了4,500,000个原生质体/mL的产率（可行的91％）。 使用GFP标记基因评估转染能力，转染原生质体的百分比为51％，在转染事件后72小时。 然后对靶向植物去饱和酶基因的直接递送进行了纯化的RNP。 结果揭示了CRISPR/CAS9 RNP和有效的原生质体编辑的预期目标修饰。如今，需要采取新的策略来实现对疾病，气候变化，更高产量和营养质量的植物弹性。在新的植物育种技术（NPBT）中，CRISPR/CAS9系统代表了在短时间内改善植物育种的强大工具。此外，CRISPR/CAS9构建体可以以核糖核蛋白（RNP）的形式传递到细胞中，从而避免通过原生质体技术避免外源DNA（无GMO-FRO）整合，这代表了基因编辑的有趣材料，这要归功于高度渗透性的DNA膜。在本研究中，我们开发了从欧洲栗子体细胞胚胎开始的第一个原生质体隔离方案。针对细胞壁消化优化的酶溶液含有1％纤维素酶Onozuka R-10和0.5％MacRozyme R-10。在黑暗条件下在25℃孵育4小时后，获得了4,500,000个原生质体/mL的产率（可行的91％）。使用GFP标记基因评估转染能力，转染原生质体的百分比为51％，在转染事件后72小时。然后对靶向植物去饱和酶基因的直接递送进行了纯化的RNP。结果揭示了CRISPR/CAS9 RNP和有效的原生质体编辑的预期目标修饰。
首次通过核糖核蛋白（RNP ...
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