1.1.1 未来空中导航系统特别委员会 (FANS) 发现,多年来指示所需导航能力最常用的方法是规定强制携带某些设备。这限制了现代机载设备的最佳应用。此外,随着卫星的出现,这种方法将迫使国际民用航空组织进行繁琐的选择过程。为了克服这些问题,委员会提出了所需导航性能能力 (RNPC) 的概念。FANS 将 RNPC 定义为一个参数,该参数描述了与指定或选定航迹的横向偏差以及基于适当遏制水平的沿航迹定位精度。虽然这个概念从一开始就避免了 ICAO 在竞争系统之间进行选择的需要,但它并不妨碍 ICAO 处理国际上使用的导航技术。RNPC 概念已获得国际民航组织理事会的批准,并被指派给分离总体概念审查小组 (RGCSP) 进行进一步阐述。1990 年,RGCSP 注意到能力和性能截然不同,空域规划取决于测量性能而非设计能力,因此将 RNPC 改为所需导航性能 (RNP)。
Lophiotrema 属是 Lophiotremataceae 科中的一种子囊菌属真菌。该属的成员作为内生菌已被从多种宿主植物以及陆地和海洋生境中的植物碎片中分离出来,它们被认为在这些环境中起着腐生菌的作用。Lophiotrema sp. F6932 是从新加坡乌敏岛的白色红树林 (Avicennia officinalis) 中分离出来的。该真菌的粗提取物表现出强效抗菌活性,通过生物测定指导的生物活性成分分离和结构解析,分离出了 palmarumycin C 8 和一种新的类似物 palmarumycin CP 30 。全基因组测序分析鉴定出一种假定的 1 型迭代 PKS (iPKS),该 PKS 推测参与了 palmarumycin 的生物合成。为了验证帕尔马霉素 (PAL) 基因簇参与这些化合物的生物合成,我们采用核糖核蛋白 (RNP) 介导的 CRISPR-Cas9 诱导 PAL 中酮合酶 (KS) 结构域的靶向缺失。KS 结构域上游和下游的双链断裂 (DSB) 之后进行同源定向修复 (HDR),其中潮霉素抗性盒两侧有 50 bp 的同源性。与野生型菌株相比,所得的缺失突变体表现出完全不同的表型,因为它们具有不同的菌落形态并且不再能够产生帕尔马霉素或黑色素。因此,这项研究证实了 PAL 参与了帕尔马霉素的生物合成,并为实施类似方法表征这种研究不足的真菌菌株中其他感兴趣的基因簇铺平了道路。
•含有Cas9和GRNA的纳米配方,将外源喷涂到感染植物上。•核糖核蛋白(RNP)络合物的递送,该复合物靶向特定细菌毒性基因HRPX,HRPG,HRPB和HOPP1。•用于不同疾病的GRNA复合物的个体或组合。•所提出的技术靶向病原体毒力因子,以防止细菌枯萎病,导致小米的xanthomonas oryzae pv oryzae(XOO)在水稻上,细菌斑点,引起丁香肌pv。番茄dc3000在拟南芥和细菌枯萎病上,在马铃薯上引起拉尔斯托尼亚溶剂。•RNPS纳米配方具有增强的渗透和效率。•将RNP应用的管道和SOPS靶向细菌中的其他基因
第一阶段最终报告 14. 资助机构代码 ANG-C1 15. 补充说明 本研究由美国联邦航空管理局下一代人为因素部资助,合同号为 DTFAWA-15-D-00025、TORFP 5092,建立在所需导航性能人为因素实施指导支持的基础上。Architecture Technology Corporation 分包给 Evans Incorporated,以提供空中交通管制运行中人为因素的研究专业知识。据信,本研究是美国首次对与美国空中交通管制中使用 RNP-AR 方法相关的运行人为因素进行调查的研究之一;此前在基于性能导航领域的人为因素研究主要涉及驾驶舱中的人为因素。本研究分两个阶段进行:第一阶段分析 EoR 运行中的人为因素考虑因素,第二阶段则涉及实施指导材料的制定。本报告是与该项目相关的两份报告中的第一份,提供了第一阶段的结果。本报告对合同交付物进行了轻微修改,以提高可访问性。16. 摘要 美国联邦航空管理局 (FAA) NextGen 人为因素部门委托进行这项研究,以确定和分享从两个空中交通管制设施中吸取的经验教训,这两个设施是“早期采用”基于要求的导航性能 (EoR) (RNP) 程序的机构。西雅图-塔科马国际机场和丹佛国际机场是美国国家空域系统 (NAS) 内最先实施 EoR 的两个机场。研究的第一阶段涉及审查相关概念验证文档和研究文献。随后对西雅图和丹佛终端雷达管制 (TRACON) 设施的人员进行了 38 次采访,其中包括 24 名认证专业管制员。结果包括考虑空中交通管制员如何将新程序融入他们在相关运营(西雅图)和间隔较大的运营(丹佛)中的控制风格和实践中。本报告还讨论了一些支持或阻碍管制员使用新程序的组织和运营因素。研究结果可能有助于实现其他机场 EoR 的潜在优势,也可用于支持在国家空域系统内更广泛地实施基于轨迹的运营。这项研究还为在空中交通管制中引入新技术、新程序和自动化提供了一些人为因素和变革管理见解。 17. 关键词 18. 分布说明 人为因素;空中交通管制;基于所需导航性能 (EoR) (RNP);所需导航性能:需要授权 (RNP-AR);程序;基于性能的导航 (PBN);基于轨迹的运营 (TBO),自动化。
• 非病毒工程能够快速开发下一代疗法——例如内源性 T 细胞受体敲除或检查点抑制剂破坏——并具有简化、更具成本效益的制造优势。
与 CRISPR QC 合作为科学家提供了优化基因编辑策略的强大优势。我们的协作方法与我们的尖端平台相结合,可以全面评估 CRISPR 工作流程中的每个步骤。CRISPR 分析平台使科学家能够定量评估 gRNA 和 Cas 核酸酶复合物的结合和稳定性,确定 RNP 复合物与靶标(扩增子)DNA 之间的结合效率,测试靶标和非靶标 DNA 样本中的 RNP CRISPR 复合物裂解频率,并分析成功多重编辑的关键动力学排名。通过利用这些工具,我们可以帮助科学家快速获得可操作的见解,以优化他们的 CRISPR 策略。
摘要:Castanea sativa是全球重要的树坚果物种,以其多功能作用,尤其是木材和坚果生产而受到高度赞赏。如今,需要采取新的策略来实现对疾病,气候变化,更高产量和营养质量的植物弹性。 在新的植物育种技术(NPBT)中,CRISPR/CAS9系统代表了在短时间内改善植物育种的强大工具。 此外,CRISPR/CAS9构建体可以以核糖核蛋白(RNP)的形式传递到细胞中,从而避免通过原生质体技术避免外源DNA(无GMO-FRO)整合,这代表了基因编辑的有趣材料,这要归功于高度渗透性的DNA膜。 在本研究中,我们开发了从欧洲栗子体细胞胚胎开始的第一个原生质体隔离方案。 针对细胞壁消化优化的酶溶液含有1%纤维素酶Onozuka R-10和0.5%MacRozyme R-10。 在黑暗条件下在25℃孵育4小时后,获得了4,500,000个原生质体/mL的产率(可行的91%)。 使用GFP标记基因评估转染能力,转染原生质体的百分比为51%,在转染事件后72小时。 然后对靶向植物去饱和酶基因的直接递送进行了纯化的RNP。 结果揭示了CRISPR/CAS9 RNP和有效的原生质体编辑的预期目标修饰。如今,需要采取新的策略来实现对疾病,气候变化,更高产量和营养质量的植物弹性。在新的植物育种技术(NPBT)中,CRISPR/CAS9系统代表了在短时间内改善植物育种的强大工具。此外,CRISPR/CAS9构建体可以以核糖核蛋白(RNP)的形式传递到细胞中,从而避免通过原生质体技术避免外源DNA(无GMO-FRO)整合,这代表了基因编辑的有趣材料,这要归功于高度渗透性的DNA膜。在本研究中,我们开发了从欧洲栗子体细胞胚胎开始的第一个原生质体隔离方案。针对细胞壁消化优化的酶溶液含有1%纤维素酶Onozuka R-10和0.5%MacRozyme R-10。在黑暗条件下在25℃孵育4小时后,获得了4,500,000个原生质体/mL的产率(可行的91%)。使用GFP标记基因评估转染能力,转染原生质体的百分比为51%,在转染事件后72小时。然后对靶向植物去饱和酶基因的直接递送进行了纯化的RNP。结果揭示了CRISPR/CAS9 RNP和有效的原生质体编辑的预期目标修饰。
• 可以进行DNA编辑的工具 • 由Cas9蛋白和gRNA组成 • gRNA识别并切割目标序列。 • 切割的序列主要通过末端连接(NHEJ)或同源重组(HDR)进行修复 • NHEJ容易发生缺失和突变等错误→适用于基因缺失 • HDR可以根据供体DNA的设计引入所需的序列。
当该技术首次被发现时,需要构建质粒载体来表达 Cas 酶和 gRNA,因为长合成 RNA 非常昂贵且不广泛可用。转染的质粒将利用细胞的转录和翻译机制来产生 Cas 蛋白和 gRNA。然而,现在大量数据表明这种方法效率低下,并且会产生很高的脱靶效应。将 Cas 蛋白和 gRNA 作为核糖核蛋白 (RNP) 复合物递送是一种有效且经过验证的方法,与质粒表达载体相比具有多种优势。
– 为便于识别涵盖 GNSS 相关理论知识大纲的幻灯片,已用红色条纹标记,该大纲定义在“2014 年 3 月 13 日第 245/2014 号委员会条例(欧盟),修订 2011 年 11 月 3 日第 1178/2011 号委员会条例(欧盟),该条例规定了与民航机组人员相关的技术要求和行政程序”