15. 补充说明 本研究由美国联邦航空管理局的下一代人为因素部门资助,合同编号为 DTFAWA-15-D-00025,TORFP 5092,建立在所需导航性能人为因素实施指导支持的基础上。Architecture Technology Corporation 分包给 Evans Incorporated,以提供空中交通管制运行人为因素方面的研究专业知识。据信,这项研究代表了对美国空中交通管制中使用 RNP-AR 方法相关的运行人为因素的首次调查之一;之前在基于性能的导航领域的人为因素研究主要针对驾驶舱的人为因素。本研究分两个阶段进行:第一阶段是分析 EoR 运行中的人为因素考虑因素,而第二阶段涉及实施指导材料的开发。本报告是与该项目相关的两份报告中的第一份,提供了第一阶段的结果。本报告对合同交付物进行了轻微修改,以提高可访问性。 16. 摘要 美国联邦航空管理局 (FAA) NextGen 人为因素部门委托开展这项研究,以确定和分享从两个空中交通管制机构获得的经验教训,这两个机构是“早期采用”基于要求的导航性能 (EoR) (RNP) 程序的机构。西雅图-塔科马国际机场和丹佛国际机场
AMC1 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准.............................................................. 64 AMC2 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准.............................................................. 65 AMC3 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准............................................................. 65 GM1 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准............................................................. 65 GM2 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准............................................................. 65 GM3 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准............................................................. 66
AMC1 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 58 AMC2 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 59 AMC3 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 59 GM1 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 59 GM2 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 59 GM3 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 60
AMC1 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 60 AMC2 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 61 AMC3 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 61 GM1 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 61 GM2 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 61 GM3 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 62
AMC1 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 60 AMC2 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 61 AMC3 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 .............................................................................. 61 GM1 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 61 GM2 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 61 GM3 ACNS.C.PBN.205 RNP 系统批准 ............................................................................. 62
我们测试了MAD7表达质粒的共转染和GRNA表达质粒作为RNP方案的替代方案。质粒转染具有不需要先前产生和纯化MAD7蛋白的优势。我们使用与RNP实验相同的GRNA序列靶向相同的基因。如图2所示,基于质粒的协议也可以生成indels,但显示的Indels水平低于RNP协议。类似于RNP协议,尽管不太明显,但4XNLS版本优于1XNLS版本。
我们在此报告了首次证明穿梭肽在恒河猴模型中将蛋白质和 ABE8e-Cas9 RNP 递送至呼吸道上皮的转化潜力。在单次气雾剂给药后,我们成功地将荧光标记的蛋白质货物递送至大气道和小气道的上皮细胞以及一些肺泡上皮。使用 S315 穿梭肽进行 ABE8e-Cas9 RNP 递送,我们在使用支气管刷回收的细胞中实现了 CCR5 基因座的显著 A 到 G 编辑。从气管和近端气道收获的上皮中 CCR5 位点的编辑效率达到 5.3%。在具有 R553X 突变的人类 CF 气道上皮中应用这种递送方法实现了类似的编辑水平并赋予 CFTR 功能的部分恢复。
使用 RNA 和 RNP • 建议戴上手套并使用无核酸酶的试管和试剂,以避免 RNase 污染。 • 始终保持无菌技术,并使用无菌过滤移液器吸头。 • 所有 Synthego 和 Nucleofector™ 试剂均应根据制造商的建议储存。 • 合成的 sgRNA 应溶解在 TE 缓冲液中,并使用无核酸酶的水稀释至工作浓度。请参阅 Synthego 快速入门指南,了解溶解和储存合成 sgRNA 的最佳实践。 • RNP 可直接在 Nucleofector™ 溶液中形成。 • RNP 复合物在室温下可稳定保存长达 1 小时(可在 4°C 下保存长达一周,或在 -20°C 下保存长达 1 个月)。请注意,在 4°C 下储存的 RNP 长时间后可能会受到微生物生长的污染。