XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search SystemRNP
基于吸附性二氧化硅纳米结构的体内递送增强治疗性核糖核蛋白的基因编辑和碱基编辑
基因组编辑工具广泛安全应用的关键是将核糖核蛋白 (RNP) 的多种成分安全有效地递送到单细胞中，但这仍是其临床应用的生物障碍。为了解决这个问题，设计了一种基于生物相容性海绵状二氧化硅纳米结构 (SN) 的强大 RNP 递送平台，用于储存和直接递送治疗性 RNP，包括 Cas9 核酸酶 RNP (Cas9-RNP) 和碱基编辑器 RNP (BE-RNP)。与基于脂质的方法等商业化材料相比，通过靶向各种细胞和基因，可获得高达 50 倍的基因删除和 10 倍的碱基替换效率，且脱靶效率低。特别是，通过体内实体瘤模型中的静脉注射和小鼠眼中视网膜下注射的基于 SN 的递送成功诱导基因校正。此外，由于其毒性低、生物降解性高，SN 对器官细胞功能的影响微乎其微。由于工程化的 SN 可以克服与治疗性 RNP 应用相关的实际挑战，因此人们强烈期望该平台能够成为模块化 RNP 递送系统，从而促进体内基因删除和编辑。
现代导航 - SmartCockpit
2.1 一般概念................................................................................................................................................7 2.1.1 定义...................................................................................................................................................7 2.1.2 性能要求............................................................................................................................................8 2.1.3 功能要求............................................................................................................................................9 2.2 RNP 空中空间环境及实施.........................................................................................................................11 2.2.1 无线电导航设施覆盖范围内的 RNP 航路.........................................................................................................11 2.2.2 无线电导航设施覆盖范围外的 RNP 航路.........................................................................................................11 2.2.3 采用 RNP 的 RNAV 非精密进近.........................................................................................................11 2.3 飞机导航系统.........................................................................................................................................12 2.3.1 航空器设备.........................................................................................................................................12 2.3.2 导航系统能力.........................................................................................................................................13 2.3.3 MEL 要求................................................................................................................................19 2.4 RNP 操作........................................................................................................................................22 2.4.1 基于无线电导航基础设施的 RNP-5（或 RNP-4）........................................................................22 2.4.2 PRNAV......................................................................................................................................26 2.4.3 远洋或偏远地区的 RNP-10.............................................................................................................26
现代导航 - SmartCockpit
2.1 一般概念 ................................................................................................................................................7 2.1.1 定义 ................................................................................................................................................7 2.1.2 性能要求 ................................................................................................................................................8 2.1.3 功能要求 ................................................................................................................................................9 2.2 RNP 空中空间环境与实施 .............................................................................................................................11 2.2.1 无线电导航设备覆盖范围内的 RNP 航路 .............................................................................................11 2.2.2 无线电导航设备覆盖范围外的 RNP 航路 .............................................................................................11 2.2.3 采用 RNP 的 RNAV 非精密进近 .............................................................................................11 2.3 飞机导航系统 ................................................................................................................................12 2.3.1 航空器设备 ................................................................................................................................12 2.3.2 导航系统能力 ................................................................................................................................13 2.3.3 MEL 要求 ................................................................................................................................................19 2.4 RNP 操作 ..............................................................................................................................................22 2.4.1 基于无线电导航基础设施的 RNP-5（或 RNP-4） ........................................................................22 2.4.2 PRNAV .............................................................................................................................................26 2.4.3 远洋或偏远地区的 RNP-10 .............................................................................................................26
实现最佳 NextGen 优势的最低能力列表
PBN 以性能标准的形式描述了飞机的导航能力。这些标准，例如区域导航 (RNAV) 或所需导航性能 (RNP) 导航规范 (NavSpecs)，可在地面或空间导航辅助设施覆盖范围内，或在飞机自带导航能力范围内，在任何所需飞行路径上实现横向和/或垂直导航。一般而言，RNAV 和 RNP 导航规范相同，但 RNP 增加了机载性能监控和警报功能。NavSpec 通常用横向精度值来描述（例如，RNP 1 为 1NM），并指定与仪表飞行操作或仪表飞行特定航段相关的预期 95% 横向导航 (LNAV) 性能。
ArciTect™ Cas9-eGFP 核酸酶
ArciTect™ Cas9-eGFP 核酸酶是一种融合蛋白，由增强型绿色荧光蛋白 (eGFP) 和来自化脓性链球菌的野生型 Cas9 重组蛋白组成；它包含一个 C 端连接的 eGFP 分子。ArciTect™ Cas9-eGFP 核酸酶需要与向导 RNA（例如 ArciTect™ sgRNA（目录号 #200-0013）或由 ArciTect™ tracrRNA（目录号 #76016）和 ArciTect™ crRNA（目录号 #76010）组成的双链）结合，以形成核糖核蛋白 (RNP) 复合物。该 RNP 复合物在基因组中的位点特定位置产生双链断裂。 ArciTect™ Cas9-eGFP 核酸酶还在 N 端含有核定位信号，确保 RNP 复合物转位至细胞核，从而提高基因组编辑的效率。由于 RNP 复合物在转染后完全发挥作用，因此在转位至细胞核后可立即发挥作用。RNP 复合物在 48 小时内降解，为基因组编辑提供了充足的时间，同时减少了 RNP 复合物持续存在可能导致的脱靶效应。使用 RNP 系统还可以避免生成稳定的 Cas9 表达细胞系的繁琐过程，从而节省时间并降低由于可诱导表达系统泄漏而导致脱靶效应的风险。化脓性链球菌 Cas9 使用原间隔区相邻基序 (PAM) 序列 NGG（其中 N 可以是任何核苷酸）。如果靶序列下游没有基因组 PAM 位点，酶就不会裂解。
Cas9 蛋白和 gRNA 的电子圆二色谱
摘要：化脓性链球菌 Cas9 蛋白 (SpCas9) 是微生物中基于 CRISPR 的免疫系统的一个组成部分，已广泛用于基因组编辑。该核酸酶与向导 RNA (gRNA) 形成核糖核蛋白 (RNP) 复合物，从而诱导 Cas9 结构变化并触发其切割活性。在这里，电子圆二色性 (ECD) 光谱用于确认 RNP 的形成并确定其各个组成部分。ECD 光谱具有区分 Cas9 和 gRNA 的特征，前者显示出负/正谱，最大值位于 221、209 和 196 nm，而后者显示出正/负/正/负模式，条带分别位于 266、242、222 和 209 nm。首次展示了 gRNA:Cas9 RNP 复合物的实验 ECD 光谱。它表现出双标记正/负 ECD 偶联，最大值位于 273 和 235 nm，并且与每个 RNP 成分的单独光谱有显著不同。此外，Cas9 蛋白和 RNP 复合物在 ECD 测量后仍保留生物活性，并且它们能够在体外结合和裂解 DNA。因此，我们得出结论，ECD 光谱可被视为一种快速且无损的方法，用于监测 Cas9 蛋白因 Cas9 和 gRNA 相互作用而发生的构象变化，以及鉴定 gRNA:Cas9 RNP 复合物。
使用核转染技术利用 RNP 对人类 iPS 细胞进行 CRISPR 编辑
• 建议戴上手套并使用无核酸酶试管和试剂以避免 RNase 污染。 • 始终保持无菌技术，并使用无菌过滤移液器吸头。 • 所有 EditCo 试剂应根据制造商的建议储存。 • 合成 sgRNA 应溶解在 TE 缓冲液中，并使用无核酸酶水稀释至工作浓度。请参阅 EditCo.com/resources 以查找与溶解和储存合成 sgRNA 相关的最佳实践。 • RNP 可直接在 Nucleofector™ 溶液中形成。 • RNP 复合物在室温下可稳定保存长达 1 小时（可在 4°C 下保存长达一周，或在 -20°C 下保存长达 1 个月）。请注意，在 4°C 下储存的 RNP 可能会在长时间后受到微生物生长的污染。
人原代T细胞基因组编辑
（ A ）使用ImmunoCult™ 人 CD3 / CD28 或 CD3 / CD28 / CD2 T 细胞激活活化剂人 T 2 - 3 天后，通过将 TCR αβ 和 CD3 受体与抗体结合，进行流式分析，来测定 TRAC 的敲除效率。每个条件的每个数据点代表一个单独的供体；n = 4 - 8 个供体。每一列线路表示干±标准差。（ B ） ）首先人T细胞被ImmunoCult™人CD3 / CD28 T细胞剂激活活化剂3天，然后进行电转。在电转48小时后，通过ArciTect™ T7循环内切酶I试剂盒测定基因组编辑（切割）的效率。 RNP 电转：+ RNP 。（ C - D ）被ImmunoCult™ 人 CD3 / CD28 T 细细胞激活剂活化 3 天的人 T 细胞经（ C ）模拟电转（无 RNP ）和（ D ） RNP 电转后 TCR αβ 和 CD3 的流式分析点图。（ E ）被ImmunoCult™ 人 CD3 / CD28 T 细胞激活剂活化 3 天的人 T细胞的CD4和CD8流式分析点图。
《安全第一》杂志 - 第 16 期 - SKYbrary
RNP 允许在以前无法设想仪表进近的环境中设计 IFR 程序。RNP 进近特别适合（但不限于）在具有挑战性的区域（例如山区）的进近，并可替代大多数现有的盘旋进近。与目视进近和盘旋进近相比，RNP 进近的轨迹是可预测的。这增强了进近的准备和简报。此外，它还有助于态势感知和决策。在横向和垂直方向上以及速度控制方面完全管理这些进近，使整个进近过程中的能量管理变得容易。如果需要，RNP 进近还可以确保更简单地进入计划的复飞轨迹剖面。这一直是循环方法的一个“困难”方面。
CBI-Deleted Copy Bernadette Juarez APIS 副......
然后使用“PEG 方法”将经过验证的 RNP 复合物（由单个 gRNA 和 [ ] 组成）转染到番茄原生质体中，该方法使用聚乙二醇促进 RNP 进入原生质体（Maas & Werr，1989）。进入细胞后，RNP 复合物被运输到细胞核并到达 gRNA 指示的特定目标。一旦达到目标序列，CRISPR-[ ] 酶将在 DNA 中产生双链断裂 (DSB)。当植物细胞修复断裂时，DNA 链中产生的单个断裂将重新连接，有时会导致 DNA 序列的缺失。几天后，RNP 复合物中的 CRISPR-[ ] 蛋白和 gRNA 将被植物细胞分解。