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利用 CRISPR/Cas9 技术生成和鉴定转基因人类多能干细胞的流程
由于其无限的增殖潜力、整倍体状态以及向任何细胞类型分化的能力，人类多能干细胞 (hPSC)（无论是胚胎细胞还是诱导细胞）在疾病建模和生产临床应用细胞方面具有巨大潜力 [ 1 – 3 ]。尽管已经建立了来自患有各种疾病的患者的许多 hPSC 系，但是针对某些病理或罕见基因突变生成 hPSC 系仍然具有挑战性。此外，个体间的遗传异质性可能导致生物学变异，从而使系间比较困难，尤其是来自健康对照和患者的 hPSC 之间的比较 [ 4 , 5 ]。对 hPSC 进行遗传操作的能力为我们引入、修改或校正突变以及生成遗传匹配的同基因对照系提供了机会，从而建立明确的基因型-表型关联 [ 6 , 7 ]。近年来，基于位点特异性核酸酶（包括锌指核酸酶 (ZFN)、转录激活因子样效应核酸酶 (TALEN)，尤其是成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 系统）的技术已使 hPSC 的基因组工程变得十分灵活 [8,9]。然而，由于 hPSC 的固有特性，包括相对较差的转染效率和转染后存活率低、难以分离克隆群、优先选择和扩增非整倍体克隆以及自发细胞分化，hPSC 工程仍然具有挑战性。为了缓解这些问题，已经描述了几种用于产生各种不同诱变事件的方案 [10-14]。尽管人们投入了大量精力来改进产生转基因 hPSC 的方法程序，但只有少数研究
靶向基因组编辑可恢复因人类 microRNA 突变导致进行性听力丧失的成年小鼠的听觉功能
（未经同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可不得重复使用。此预印本的版权所有者此版本于 2023 年 10 月 28 日发布。；https://doi.org/10.1101/2023.10.26.564008 doi：bioRxiv preprint
案卷号：6155-22 参考：签名日期 发件人：海军记录更正委员会主席 收件人：海军部长 主题：审查前美国海军陆战队成员 XXX XX 的海军记录 参考：(a) 10 U.S.C.§1552 (b) USECDEF 备忘录，“关于公平、不公正或赦免裁定的军事退役审查委员会和军事/海军记录更正委员会指南”，2018 年 7 月 25 日（威尔基备忘录） 附件：(1) DD 表格 149 及附件 (2) 案件摘要 1. 根据参考 (a) 的规定，主体，以下简称请愿人，向海军记录更正委员会（委员会）提交了附件 (1)，请求更正她的海军记录，以更改她因人格障碍退役后的退役定性。 2. 委员会由 、 和 组成，于 2023 年 1 月 6 日审查了请愿人的错误和不公正指控，并根据其规定，确定应采取以下纠正措施。委员会审议的文件材料包括请愿人的申请以及为支持该申请而提交的所有材料、请愿人海军记录的相关部分以及适用的法规、条例和政策，包括国防部人事和战备部副部长于 2018 年 7 月 25 日发布的关于公平、不公正或宽大处理决定的指导意见（威尔基备忘录）。3. 委员会审查了与请愿人指控有关的所有记录事实
案卷号：6155-22 参考：签名日期 发件人：海军记录修正委员会主席 收件人：海军部长 主题：审查前美国海军陆战队成员 XXX XX 的海军记录 参考：(a) 10 U.S.C.§1552 (b) USECDEF 备忘录，“关于公平、不公正或宽大处理决定的军事退伍审查委员会和军事/海军记录更正委员会指南”，2018 年 7 月 25 日（威尔基备忘录）附件：(1) DD 表格 149 及其附件 (2) 案件摘要 1。根据参考 (a) 的规定，主体（以下简称为请愿人）向海军记录更正委员会（委员会）提交了附件 (1)，请求更正她的海军记录，以更改她因人格障碍退伍后的退伍定性。2.由 、 和 组成的委员会于 2023 年 1 月 6 日审查了请愿人的错误和不公正指控，并根据其规定，确定应采取以下纠正措施。委员会审议的文件材料包括请愿人的申请以及为支持该申请而提交的所有材料、请愿人海军记录的相关部分以及适用的法规、条例和政策，包括国防部人事和战备部副部长于 2018 年 7 月 25 日发布的关于公平、不公正或宽大处理裁定的指导（威尔基备忘录）。3.委员会审查了与请愿人的错误和不公正指控有关的所有记录事实，发现如下：
开发用于高内涵筛选的 CRISPR/Cas9 介导荧光报告基因人类多能干细胞系
摘要：应用 CRISPR/Cas9 系统将荧光蛋白敲入人类多能干细胞 (hPSC) 中的内源性目的基因，有可能促进基于 hPSC 的疾病建模、药物筛选和移植疗法优化。为了评估荧光报告 hPSC 系用于高内涵筛选方法的能力，我们将 EGFP 靶向内源性 OCT4 基因座。产生的 hPSC–OCT4–EGFP 系表达与多能性标记物一致的 EGFP，并且可以适应多孔格式以进行高内涵筛选 (HCS) 活动。然而，在长期培养后，hPSC 暂时失去了 EGFP 表达。或者，通过将 EGFP 敲入 AAVS1 基因座，我们建立了稳定且一致的 EGFP 表达 hPSC–AAVS1–EGFP 系，该系在体外造血和神经分化期间保持 EGFP 表达。因此，hPSC–AAVS1–EGFP 衍生的感觉神经元可适应高内涵筛选平台，该平台可应用于高通量小分子筛选和药物发现活动。我们的观察结果与最近的发现一致，表明在 OCT4 基因座进行 CRISPR/Cas9 基因组编辑后会出现高频率的靶向复杂性。相反，我们证明 AAVS1 基因座是 hPSC 中的安全基因组位置，具有高基因表达，不会影响 hPSC 质量和分化。我们的研究结果表明，应应用 CRISPR/Cas9 整合的 AAVS1 系统来生成稳定的报告 hPSC 系以用于长期 HCS 方法，并且它们强调了仔细评估和选择应用的报告细胞系以用于 HCS 目的的重要性。
转基因人体细胞临床试验中转基因相关方面评估的良好实践 1
本良好实践文件由欧盟委员会服务部门6、负责实施临床试验立法的成员国主管部门和负责实施转基因立法的部门联合制定，借鉴了此类药品的丰富经验。该文件以欧盟理事会在研究和创新政策方面所表达的原则为基础，具体而言，关于利用现有立法下的一切可能性促进对研究和创新的投资，2 在本文件中，“转基因”一词应理解为涵盖 2001/18/EC 指令第 2(2) 条定义的转基因生物，以及 2009/41/EC 指令第 2(b) 条定义的转基因微生物。