在可编程 DNA 热循环仪 (Perkin Elmer Cetus) 中进行 1000 个循环。每个循环中,反应混合物加热至 93 °C 持续 0.5 分钟,冷却至 55 °C 持续 1 分钟,然后在 72 °C 下孵育 2 min。在最后一个循环中,72 °C 孵育时间延长至 7 分钟。
该测试涉及将特定数量的细菌引入抗菌治疗的塑料上,并在未经治疗的情况下引入塑料样品。两个塑料测试斑块均覆盖以防止蒸发并在95°F和90%的相对湿度(促进细菌生长的条件)24小时内孵育。在塑料表面孵育结束时,使用一系列稀释液和琼脂孵育和定殖对细菌进行计数。该结果据报道是在处理过的抗菌和未处理样品之间的细菌减少。使用金黄色葡萄球菌(金黄色葡萄球菌)和大肠杆菌(大肠杆菌)作为两种细菌分类(革兰氏阳性和革兰氏阴性)的代表的ISO标准参考,但也可以测试不同的微生物。
表 1. 金 (I) 和银 (I) 衍生物以及游离配体和两种参考药物 - 顺铂和金诺芬 - 作为阳性对照在 72 小时孵育后对 Caco-2、MCF-7 和分化的 Caco-2 细胞的 IC 50 ( μ M) 值。还显示了选择性指数值。结果以至少三次测定的平均值 ± SE 表示。孵育 72 小时后。
专为少量板的孵育而设计。对于Thermo Scientific™Oxoid™Anaerogen™紧凑型,可以使用1-4个标准培养板。对于Thermo Scientific™Oxoid™Campygen™Compact,CO 2 Gen™紧凑型,1或2个培养板可以孵育(但是,如果仅要孵化一个板,则还应将第二个假板插入袋中以确保正确的气态条件)。
图 5. 使用 AzureRed 和化学发光 Western Blot 同时检测总蛋白。通过 SDS-PAGE 分离 2 倍连续稀释的 HeLa 裂解物并转移到 PVDF 膜上。半干转移完成后,用 AzureRed 总蛋白染料对膜进行染色。然后用 Azure 化学发光印迹封闭缓冲液封闭印迹,然后与小鼠抗 GAPDH 孵育。用 Azure 印迹洗涤缓冲液洗涤印迹 3 次,然后用 Azure 山羊抗小鼠 HRP 二抗孵育。用 Radiance ECL 底物检测化学发光信号。底物孵育后,对印迹进行成像以产生总蛋白染色和 GAPDH 蛋白的叠加。AzureRed 显示为绿色,GAPDH 显示为灰色。
核糖核酸酶测定DRR:在37°C下将10 µL DRR与160 ng 2 Kb RNA转录物一起孵育10 µL DRR后,检测到无污染的RNase。对于DNase I:在37°C下以160 ng的2KB RNA转录本与160 ng的2KB RNA转录本孵育5U后,未检测到污染RNase 4小时。
1。将多达200毫克的凳子样品添加到珠管中,然后将管子放在冰上。-Note:如果样品干燥,则将样本量降低至≤50mg。 - 注意:如果样品是液体,则将200 µL样品添加到珠管中。2。将300 µL的SDE1缓冲液和20 µL蛋白酶K加入样品。以最大速度涡旋5分钟。在孵育过程中将样品混合物在60°C下孵育20分钟,每5分钟涡流一次。- 确保粪便样品完全匀浆。- 为了从革兰氏阳性细菌中分离DNA,需要在蛋白酶K裂解后在95°C下额外孵育5分钟。3。简要旋转管以去除盖子内部的滴。4。冷却样品混合物,并加入100 µL SDE2缓冲液。通过涡旋充分混合并在冰上孵育样品混合物5分钟。5。全速离心5分钟。6。小心地将上清液转移到1.5 mL微输出管(未提供)并丢弃凳子颗粒。- 避免移除任何碎屑和颗粒。7。加入200 µL的SDE3缓冲液。通过涡旋充分混合并在室温下孵育样品混合物2分钟。- 注:SDE3缓冲液必须在每次使用前都会急剧涡旋。- 切断1 ml尖端的末端,以使移动SDE3缓冲区更容易。8。全速离心2分钟。9。小心地将250 µL上清液转移到1.5 mL微输出管(未提供)。- 避免移除任何碎屑和颗粒。
pH 7.4)并在4ºC下与以下主要抗体一起孵育:(1)小鼠单克隆抗白蛋白(PRV)抗体(no。235,Swant Inc.,瑞士Marly),稀释1:1000; (2)小鼠单克隆抗纤维纤维抗原蛋白(GFAP)(no。) 3670,细胞信号技术,美国马萨诸塞州丹佛市),稀释1:500;或(3)山羊多克隆抗DARPP-32(no。 SC-271111,圣克鲁斯生物技术,美国德克萨斯州达拉斯),稀释1:200。 在4°C的PBS中孵育24小时0.1M Triton X-100,其中包含3%驴血清(no。 SC-2044,圣克鲁斯生物技术)。 冲洗后,在两个小时的室温下与以下二次抗体之一的一种与偶联的荧光染色体一起孵育两小时,将组织免受光的保护:(1)Alexa Fluor 488驴抗小鼠(no。235,Swant Inc.,瑞士Marly),稀释1:1000; (2)小鼠单克隆抗纤维纤维抗原蛋白(GFAP)(no。3670,细胞信号技术,美国马萨诸塞州丹佛市),稀释1:500;或(3)山羊多克隆抗DARPP-32(no。SC-271111,圣克鲁斯生物技术,美国德克萨斯州达拉斯),稀释1:200。在4°C的PBS中孵育24小时0.1M Triton X-100,其中包含3%驴血清(no。SC-2044,圣克鲁斯生物技术)。冲洗后,在两个小时的室温下与以下二次抗体之一的一种与偶联的荧光染色体一起孵育两小时,将组织免受光的保护:(1)Alexa Fluor 488驴抗小鼠(no。A32766 Thermo Fisher Scientific)稀释1:500;或(2)Alexa Fluor 488驴抗山羊(no。705-545-147杰克逊实验室,
摘要:这项研究的目的是确定与四种细菌接触的氧化石墨烯(GO)的杀菌潜力:大肠杆菌,S。Mutans,S。Aureus和E. faecalis。细菌细胞的抑制在含有GO的培养基中孵育,孵育时间为5、10、30和60分钟,最终浓度为50、100、100、200、300、300和500 µg/ml。使用活/死染色评估GO的细胞毒性。使用BD精度C6浮动到液化计记录结果。使用BD CSAMPLER软件分析获得的数据。在所有含有的样品中都注意到了一个显着的细菌生存能力。GO的抗菌特性受到GO浓度和孵育时间的强烈影响。在所有孵育时间(5、10、30和60分钟)的浓度为300和500 µg/mL时,观察到最高的杀菌性活性。在大肠杆菌中观察到最高的抗菌电位:60分钟后,以300 µg/ml的GO为94%,在500 µg/mL时为96%;发现最低的金黄色葡萄球菌-49%(300 µg/ml)和55%(500 µg/ml)。
膜过滤程序和粪便延迟孵育。蛋白质肽,色氨酸和酵母提取物为粪便生长提供必要的营养。乳糖是培养基中的碳源和可发酵碳水化合物。胆汁盐抑制污染革兰氏阳性微生物的生长。苯胺蓝是一种三苯基甲烷染料,可抑制许多革兰氏阳性微生物的生长。苯胺蓝以及玫瑰酸形成培养基的指示系统。膜过滤器,通过将水样品通过无菌放置在M-FC琼脂底板上。如果要估计总大肠菌群,则在35-37°C下进行孵育,而如果要估算粪便大肠菌数,则在44-45°C下进行孵育。大肠菌群将形成蓝色菌落,而非颜色将在M-FC琼脂碱基上形成灰色菌落。
