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检替滨在恶性脑膜瘤细胞中的功效
脑膜瘤对手术或辐照的脑膜瘤的客观化学治疗选择在很大程度上是未知的。Human端粒酶逆转录酶（HTERT）启动子甲基化具有随后的TERT表达和端粒酶活性，在大多数高级脑膜瘤中都发现了肿瘤发生的关键特征。因此，作者研究了脱甲基化剂去甲甲他蛋白（5-Aza-2-脱氧胞苷）对脑膜瘤细胞中存活和DNA甲基化的影响。方法在两种良性（HBL-52和Ben-Men 1）和一种恶性（Iomm-Lee）脑膜瘤细胞系中，研究了在与Decitabine与Decitabine孵育之前和孵育后，研究了在与Decitabine孵育之前和孵育培养之前研究的。与DNA甲基化分析一起探索了解替滨对DNA甲基化的整体作用。在Iomm-Lee和Ben-Men 1中发现了高水平的TERT表达，端粒酶活性和HTERT启动子甲基化，但在HBL-52细胞中没有发现。decitabine诱导剂量依赖性的显着降低，并在Iomm-Lee中与剂量从1至10 µm孵育后，在HBL-52或Ben-Men 1细胞中诱导了剂量依赖性降低。然而，Iomm-Lee细胞的作用与TERT表达，端粒酶活性或HTERT启动子甲基化无关。全基因组甲基化分析表明，在德替替替替替替替象敏感的Iomm-Lee中药物给药后，14个DNA区域的脱甲基化明显，但在耐替替替他的HBL-52细胞中却没有。结论决定滨在高级脑膜瘤细胞系中降低了增殖和生存能力。差异甲基化区域的11个基因的启动子区域，包括几种癌基因和肿瘤抑制基因，这些基因尚未在脑膜瘤中描述。取代滨的作用是独立的，但与不同肿瘤抑制基因和癌基因的启动子的DNA甲基化变化有关。
TAQ-B DNA聚合酶
蛋白质的来源：一种重组大肠杆菌菌株，携带来自嗜热有机体Thermus aquaticus YT-1的TAQ DNA聚合酶基因。单位定义：1个单位定义为将在75°C的30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸 - 不溶性材料的酶。分子量：93,910 Daltons质量控制分析：使用2倍连续稀释方法测量单位活动。在1X反应缓冲液中制成酶的稀释液，并将其添加到含有小腿胸腺DNA，25 mM TAPS（pH 9.3），50 mM KCl，2.0mm MGCL2，1 mM DTT，3H-DTTP和100 µm DNTP的50 µL反应中。 在75°C下孵育10分钟，浸入冰上，并使用Sambrook和Russell的方法进行分析（Molecular Cloning，V3，2001，pp。 A8.25-A8.26）。 蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。 通过浓缩和稀释酶溶液的SDS-PAGE评估物理纯度，然后进行银色染色检测。 通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。 单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定，在37°C下孵育4小时4小时。 双链外切核酸酶在50 µL反应中确定，该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。 双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。在1X反应缓冲液中制成酶的稀释液，并将其添加到含有小腿胸腺DNA，25 mM TAPS（pH 9.3），50 mM KCl，2.0mm MGCL2，1 mM DTT，3H-DTTP和100 µm DNTP的50 µL反应中。在75°C下孵育10分钟，浸入冰上，并使用Sambrook和Russell的方法进行分析（Molecular Cloning，V3，2001，pp。A8.25-A8.26）。蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。物理纯度，然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定，在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定，该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。
技术数据表-Kovàcs'Indole试剂
实验程序和评估必须首先确定要测试的生物的应变纯度；然后将其接种到适当的培养基中，例如开发色氨酸汤（Cat。编号1.10694。），sim媒介（cat。编号105470。）等）并在最佳孵育温度下孵育18-24小时。然后用大约0.5 cm的kovàcs的吲哚试剂覆盖培养基。如果存在吲哚，几分钟后，试剂层变成颜色。•试剂溶液必须存储在冰箱中的黑暗中，否则可能会变成棕色并且不能使用。
卷心菜（Brassica oleracea var. capitata L.）的优化……
基因组编辑技术，例如成簇的规律间隔短回文重复序列/CRISPR 相关系统 (CRISPR/Cas9)，无疑正在成为改良粮食作物和应对农业挑战不可或缺的工具。在本研究中，评估了影响转化效率的关键因素，例如 PEG4000 浓度、孵育时间和质粒量，以实现将 CRISPR/Cas9 载体有效递送到卷心菜原生质体中。使用扩增子测序，我们证实了 PEG4000 浓度和孵育时间对诱导的目标突变有显著影响。通过优化转化方案，以 40 µg 质粒和 50% PEG4000 孵育 15 分钟，实现了 26.4% 的编辑效率。虽然这些因素强烈影响突变率，但转化原生质体的活力仍然很高。我们的发现将有助于成功编辑卷心菜和其他芸苔属植物的基因组，也有助于依赖原生质体瞬时转化方法的基因功能分析和亚细胞定位等研究领域。
全血模型中对抗结核药物的基因表达反应
背景：需要更好的工具来评估新的或重新利用的 TB 药物。为此目的，人们提倡使用全血杀菌活性 (WBA) 测定法。我们研究了 WBA 测定法中的转录反应是否类似于体内的 TB 反应，以及该方法是否可能另外揭示作用机制。结果：在与利福平、异烟肼、吡嗪酰胺和乙胺丁醇的标准组合孵育的 WBA 中，1798 个 (79%) 差异表达基因中的 1422 个也在服用相同药物组合的患者获得的痰液中表达 (P < 0.0001)；这些基因包括已确定的治疗反应基因。在与标准药物单独孵育的 WBA 中，或与莫西沙星或法罗培南 (与阿莫西林和克拉维酸) 孵育的 WBA 中的基因表达谱按单个药物暴露聚类。检测到单个药物的不同途径，尽管只有异烟肼与已知的药物作用机制相关。
SITE-Seq：一种测量 Cas9 切割的全基因组方法
进行多个反应时，我们通常将它们组合起来，然后装入 15 μL 进行分析。**I. 末端修复和适配器 2 连接。**1. 从 -20°C 中取出 NEBNext Ultra 末端修复/ dA 尾部模块试剂，在冰上解冻。2. 按如下方式组装末端修复反应：碎片 DNA \（来自步骤 H）\（27.7µL）末端修复缓冲液 \（10x）\（3.3µL）末端修复酶混合物 \（1.5µL）水 \（0.5µL）总计 \（33µL）3. 将反应在 20°C 下孵育 30 分钟，然后在 65°C 下孵育 30 分钟。 4. 在末端修复过程中，按照下列步骤形成接头 2： 接头 2 N7 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 N6 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 N5 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 Rev \(100µM) \(3µL) 2x Annealing Buffer \(6µL) Total \(1µL) 5. 将接头 2 混合物在 95°C 下孵育 5 分钟，然后让反应
纳尔西卡汀通过耐他莫昔芬耐药性乳腺癌细胞中的不同机制靶向STAT3
使用ROS清除剂，10 mM NAC持续1小时，随后进行或不使用NAR的处理，并收集细胞进行蛋白质印迹分析。 用NP-40裂解缓冲液，核和细胞质蛋白用核和细胞质蛋白提取试剂盒（Beyotime，Haimen，中国）提取的NP-40裂解缓冲液，核和细胞质蛋白提取总细胞蛋白。 使用BCA蛋白质试剂盒（Beyotime，Haimen，Chine）确定蛋白质浓度。 用于蛋白质印迹分析，将样品通过SDS-PAGE分离，并转移到PVDF膜上。 用5％的非脂肪干乳封闭后，将膜与制造商建议在4°C的制造商建议的稀释液一起孵育过夜。 在建议的稀释液中加入了山羊抗兔或驴抗小鼠二抗（Irdye 800，Li-Cor，Li-Cor，Lincoln，NE），并且在室温下孵育持续1小时。使用ROS清除剂，10 mM NAC持续1小时，随后进行或不使用NAR的处理，并收集细胞进行蛋白质印迹分析。用NP-40裂解缓冲液，核和细胞质蛋白用核和细胞质蛋白提取试剂盒（Beyotime，Haimen，中国）提取的NP-40裂解缓冲液，核和细胞质蛋白提取总细胞蛋白。使用BCA蛋白质试剂盒（Beyotime，Haimen，Chine）确定蛋白质浓度。 用于蛋白质印迹分析，将样品通过SDS-PAGE分离，并转移到PVDF膜上。 用5％的非脂肪干乳封闭后，将膜与制造商建议在4°C的制造商建议的稀释液一起孵育过夜。 在建议的稀释液中加入了山羊抗兔或驴抗小鼠二抗（Irdye 800，Li-Cor，Li-Cor，Lincoln，NE），并且在室温下孵育持续1小时。使用BCA蛋白质试剂盒（Beyotime，Haimen，Chine）确定蛋白质浓度。用于蛋白质印迹分析，将样品通过SDS-PAGE分离，并转移到PVDF膜上。用5％的非脂肪干乳封闭后，将膜与制造商建议在4°C的制造商建议的稀释液一起孵育过夜。在建议的稀释液中加入了山羊抗兔或驴抗小鼠二抗（Irdye 800，Li-Cor，Li-Cor，Lincoln，NE），并且在室温下孵育持续1小时。
天木细菌DNA试剂盒
50-200μL缓冲液或直接到膜中心的蒸馏水。 在室温下孵育2-5分钟，然后在12,000 rpm（〜13,400×g）下离心2分钟。 注意：如果洗脱缓冲液的体积小于50μL，则可能会影响恢复效率。 洗脱缓冲液的pH值将在洗脱中产生一定影响。 我们建议选择缓冲液或蒸馏水（pH 7.0-8.5）以洗脱gDNA。 对于长期存储DNA，建议在缓冲液中洗脱并在-30〜 -15°C下存储，因为存储在水中的DNA会接受酸水解。 为了提高gDNA产量，可以将洗脱液重新加载至CB3，在室温2分钟下孵育，然后以12,000 rpm（〜13,400×g）的速度离心2分钟，以获得最终的洗脱。50-200μL缓冲液或直接到膜中心的蒸馏水。在室温下孵育2-5分钟，然后在12,000 rpm（〜13,400×g）下离心2分钟。注意：如果洗脱缓冲液的体积小于50μL，则可能会影响恢复效率。洗脱缓冲液的pH值将在洗脱中产生一定影响。我们建议选择缓冲液或蒸馏水（pH 7.0-8.5）以洗脱gDNA。对于长期存储DNA，建议在缓冲液中洗脱并在-30〜 -15°C下存储，因为存储在水中的DNA会接受酸水解。为了提高gDNA产量，可以将洗脱液重新加载至CB3，在室温2分钟下孵育，然后以12,000 rpm（〜13,400×g）的速度离心2分钟，以获得最终的洗脱。
产品表BuňkyHK-Crispr-CAP-H2-MEGFP | 301569
亚培养从Adher细胞中去除旧培养基，并在没有钙和镁的情况下洗净PBS。用于T25烧瓶使用3-5 ml PBS和T75 5-10 ml烧瓶。然后，使用1-2 mL对T25和2.5 mL烧瓶完全覆盖细胞，用于T75烧瓶。让细胞在室温下孵育8-10分钟以分开。孵育后，将细胞与10 ml培养基再次悬浮，然后在300xg洒3分钟。丢弃上清液，将细胞溶解在新鲜培养基中，然后将其转移到已经包含新培养基的新瓶中。