使用ROS清除剂,10 mM NAC持续1小时,随后进行或不使用NAR的处理,并收集细胞进行蛋白质印迹分析。 用NP-40裂解缓冲液,核和细胞质蛋白用核和细胞质蛋白提取试剂盒(Beyotime,Haimen,中国)提取的NP-40裂解缓冲液,核和细胞质蛋白提取总细胞蛋白。 使用BCA蛋白质试剂盒(Beyotime,Haimen,Chine)确定蛋白质浓度。 用于蛋白质印迹分析,将样品通过SDS-PAGE分离,并转移到PVDF膜上。 用5%的非脂肪干乳封闭后,将膜与制造商建议在4°C的制造商建议的稀释液一起孵育过夜。 在建议的稀释液中加入了山羊抗兔或驴抗小鼠二抗(Irdye 800,Li-Cor,Li-Cor,Lincoln,NE),并且在室温下孵育持续1小时。使用ROS清除剂,10 mM NAC持续1小时,随后进行或不使用NAR的处理,并收集细胞进行蛋白质印迹分析。用NP-40裂解缓冲液,核和细胞质蛋白用核和细胞质蛋白提取试剂盒(Beyotime,Haimen,中国)提取的NP-40裂解缓冲液,核和细胞质蛋白提取总细胞蛋白。使用BCA蛋白质试剂盒(Beyotime,Haimen,Chine)确定蛋白质浓度。 用于蛋白质印迹分析,将样品通过SDS-PAGE分离,并转移到PVDF膜上。 用5%的非脂肪干乳封闭后,将膜与制造商建议在4°C的制造商建议的稀释液一起孵育过夜。 在建议的稀释液中加入了山羊抗兔或驴抗小鼠二抗(Irdye 800,Li-Cor,Li-Cor,Lincoln,NE),并且在室温下孵育持续1小时。使用BCA蛋白质试剂盒(Beyotime,Haimen,Chine)确定蛋白质浓度。用于蛋白质印迹分析,将样品通过SDS-PAGE分离,并转移到PVDF膜上。用5%的非脂肪干乳封闭后,将膜与制造商建议在4°C的制造商建议的稀释液一起孵育过夜。在建议的稀释液中加入了山羊抗兔或驴抗小鼠二抗(Irdye 800,Li-Cor,Li-Cor,Lincoln,NE),并且在室温下孵育持续1小时。