进行多个反应时,我们通常将它们组合起来,然后装入 15 μL 进行分析。**I. 末端修复和适配器 2 连接。**1. 从 -20°C 中取出 NEBNext Ultra 末端修复/ dA 尾部模块试剂,在冰上解冻。2. 按如下方式组装末端修复反应:碎片 DNA \(来自步骤 H)\(27.7µL)末端修复缓冲液 \(10x)\(3.3µL)末端修复酶混合物 \(1.5µL)水 \(0.5µL)总计 \(33µL)3. 将反应在 20°C 下孵育 30 分钟,然后在 65°C 下孵育 30 分钟。 4. 在末端修复过程中,按照下列步骤形成接头 2: 接头 2 N7 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 N6 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 N5 Forward \(100µM) \(1µL) 接头 2 Rev \(100µM) \(3µL) 2x Annealing Buffer \(6µL) Total \(1µL) 5. 将接头 2 混合物在 95°C 下孵育 5 分钟,然后让反应