丝状真菌表现出良好的经济价值,因为它具有生产各种活性天然化合物的能力。丝状真菌的遗传背景相对复杂,并且使用遗传工程来修饰丝状真菌相对较晚。基因敲除是修饰丝状真菌的重要方法之一。基因敲除技术可以阐明基因的功能,并有效阻断或削弱旁路代谢途径,从而将代谢通量集中到目标产物。本综述着重于丝状真菌的价值和研究进度,并介绍了用于丝状敲除基因敲除
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我们强烈建议您在使用靶向特异性多向导 sgRNA 之前,先使用特定细胞类型的阳性对照优化转染条件。为了优化人类细胞系的条件,EditCo 提供了转染优化试剂盒,其中包含靶向人类 TRAC 的阳性对照多向导 sgRNA。对于小鼠细胞系,我们建议使用靶向小鼠 Rosa26 的阳性对照单向导 sgRNA 来优化您的条件(请参阅第 2 页所需的其他材料)。我们建议为您的基因组编辑实验形成核糖核蛋白 (RNP) 复合物,以最大限度地提高编辑效率并减少脱靶效应。选择 EditCo 的电穿孔、脂质转染或核转染方案与此试剂盒一起使用。所有方案均可在 editco.com/resources 上找到。
描述 PARG 敲除 MDA-MB-231 细胞系是一种 MDA-MB-231 细胞系,其中人类 PARG(聚 ADP-核糖糖水解酶)长同工酶(PARG111、PARG102 和 PARG99)已使用 CRISPR/Cas9 基因组编辑从基因上去除,慢病毒编码 CRISPR/Cas9 基因和针对人类 PARG 的 sgRNA(单向导 RNA)。该细胞系已通过基因组测序和蛋白质印迹分析验证。背景聚(ADP-核糖)糖水解酶 (PARG) 是一种分解代谢酶,参与 PARylated 链的降解,释放 ADP-核糖和寡(ADP-核糖)链。 PAR(聚 ADP 核糖基化)稳态由 PAR 聚合酶 (PARP) 家族和 PARG 调节,以响应细胞应激条件,例如 DNA 损伤反应 (DDR)。PARG 活性与炎症、缺血、中风和癌症中的细胞反应有关。PARG 在乳腺癌中过度表达,与肿瘤生长和存活有关。PARG 活性降低可以增强当前癌症疗法(例如化疗和放疗)的效果,使 PARG 选择性抑制剂抑制成为癌症和免疫疗法中一种有前途的方法。MDA-MB-231 是一种源自乳腺腺癌的上皮细胞系,具有突变的 p53。它是 ER(雌激素受体)、HER2 和 E-钙粘蛋白阴性,用作晚期乳腺癌的模型。应用